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Ferrostatin-1通过调控铁死亡抑制亚砷酸钠诱导人肝星状细胞激活的作用机制研究

Ferrostatin-1通过调控铁死亡抑制亚砷酸钠诱导人肝星状细胞激活...

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作者：迪丽娜尔·亚尔麦麦提新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:1)研究不同剂量亚砷酸钠(NaAsO)对人肝星状细胞(LX-2)铁死亡水平的影响;2)铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)联合NaAsO共同暴露对LX-2细胞纤维化指标的影响。方法:1)通过CCK-8法检测细胞IC,并分为对照组、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/... 详细信息

目的:1)研究不同剂量亚砷酸钠(NaAsO)对人肝星状细胞(LX-2)铁死亡水平的影响;2)铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)联合NaAsO共同暴露对LX-2细胞纤维化指标的影响。方法:1)通过CCK-8法检测细胞IC,并分为对照组、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L NaAsO组;2)采用倒置显微镜观察LX-2细胞形态;3)通过油红O染色观察不同组细胞脂滴分布;4)透射电子显微镜(TEM)观察细胞线粒体超微结构;5)Ferro Orange荧光探针检测细胞Fe荧光强度;6)BODIPY 581/591 C11探针检测细胞脂质过氧化物产物(脂质ROS);7)酶标仪检测细胞谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量;8)实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞α-SMA、collagenⅠ、SLC7A11、GPX4 m RNA表达水平;9)蛋白免疫印迹(Western-Blot)检测细胞α-SMA、SLC7A11、GPX4蛋白表达水平。10)Fer-1和NaAsO共同暴露LX-2细胞24h,检测Fer-1干预前后铁死亡和纤维化指标变化情况。结果:1)随着NaAsO染毒剂量的升高LX-2细胞增殖率逐渐下降,IC为21.44μmol/L,R=0.91;2)正常情况下LX-2细胞形态饱和呈“星星”状,生长方式为抱团生长。随着NaAsO染毒剂量的升高细胞数量逐渐减少、细胞触角开始回缩逐渐变为圆形、细胞间间隙变宽;3)油红O染色结果显示,正常情况下LX-2细胞内有较少的脂滴成分,NaAsO处理可能导致LX-2细胞内的脂滴流失;4)通过TEM观察到,对照组LX-2细胞线粒体结构为双层膜、光滑闭环,线粒体嵴清楚可见,随着NaAsO染毒剂量的升高细胞线粒体膜完整性破坏、线粒体嵴断裂和消失;5)通过Ferro Orange荧光探针检测到LX-2细胞Fe荧光强度随着NaAsO剂量的升高而逐渐升高。与对照组相比,5、15μmol/L NaAsO染毒组细胞Fe水平升高(P均细胞未观察到脂质ROS绿色荧光,随着NaAsO染毒剂量的升高脂质ROS的荧光强度逐渐增强;7)GSH和MDA检测结果显示,NaAsO染毒使LX-2细胞GSH含量均减少(P细胞导致细胞纤维化指标α-SMA、collagenⅠm RNA表达水平升高,且随着NaAsO染毒剂量的升高而升高(P细胞后,CCK-8结果显示与15μmol/L NaAsO组相比,细胞增殖率升高(P细胞Fe荧光强度呈下降趋势(P细胞脂质ROS荧光强度呈下降趋势。GSH检测结果显示,与15μmol/L NaAsO组相比Fer-1干预致细胞GSH含量升高(P细胞SLC7A11和GPX4 m RNA和蛋白水平呈上升趋势(P细胞纤维化指标升高的同时铁死亡水平升高。纤维化指标(α-SMA、collagenⅠ)与铁死亡指标(SLC7A11、GPX4)之间存在负相关关系。Fer-1与NaAsO共同暴露使LX-2细胞纤维化指标表达水平降低。

关键词：亚砷酸钠人肝星状细胞激活铁死亡

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