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人羊水间充质干细胞治疗肿瘤的临床研究进展

现代生物医学进展 2015年第15期15卷 2968-2970,3000页

作者：刘颖张广美王德君周隽段灿灿哈尔滨医科大学附属第一医院妇产科黑龙江哈尔滨150001

人羊水间充质干细胞(Human amniotic fluid derived mesenchymal stem cells,AF-MSCs)是一类具有高度增殖、自我更新和多项分化潜能的干细胞,即使经过多次传代其生物学特性也不会发生改变。有研究表明,AF-MSCs具有免疫原性低、不成瘤性... 详细信息

人羊水间充质干细胞(Human amniotic fluid derived mesenchymal stem cells,AF-MSCs)是一类具有高度增殖、自我更新和多项分化潜能的干细胞,即使经过多次传代其生物学特性也不会发生改变。有研究表明,AF-MSCs具有免疫原性低、不成瘤性和肿瘤细胞亲嗜性等特点,而且能够迁移到肿瘤病灶。因此,AF-MSCs作为转运载体介导药物靶向治疗肿瘤具有潜在的优势。同时,通过羊膜腔穿刺获得羊水有利于避免胚胎干细胞研究有关的伦理问题,可作为一种理想的治疗方法。本文通过回顾、总结人羊水间充质干细胞的研究进展,展望人羊水间充质干细胞治疗肿瘤的应用前景。

关键词：人羊水间充质干细胞肿瘤靶向治疗

超低温冻存对人羊水间充质干细胞生物学特性的影响

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中国现代医学杂志 2010年第2期20卷 183-187,191页

作者：冯建勋腊晓林马艳毕晓娟温浩新疆医科大学第一附属医院博士后科研流动站新疆医科大学第一附属医院医学研究中心干细胞研究所新疆乌鲁木齐市友谊医院新疆医科大学第一附属医院妇产科新疆医科大学第一附属医院干细胞研究所新疆医科大学第一附属医院肝胆外科新疆乌鲁木齐830000

目的观察超低温冻存对人羊水间充质干细胞(AF-MSC)生物学特性的影响。方法通过羊膜腔穿刺取得人孕16～23周羊水,分离培养出人AF-MSC。将第4代人AF-MSC经短期超低温冻存、复苏后,通过细胞活性率测定、形态学比较、细胞增殖功能测定、细... 详细信息

目的观察超低温冻存对人羊水间充质干细胞(AF-MSC)生物学特性的影响。方法通过羊膜腔穿刺取得人孕16～23周羊水,分离培养出人AF-MSC。将第4代人AF-MSC经短期超低温冻存、复苏后,通过细胞活性率测定、形态学比较、细胞增殖功能测定、细胞周期分析及细胞表面抗原检测,观察超低温冻存对人AF-MSC生物学特性的影响。结果第4代人AF-MSC冻存、复苏前后的两组细胞无论在细胞活性率、细胞形态、细胞增殖能力、细胞周期、细胞表面抗原的表达等方面均无显著性差异(P>0.05)。结论短期的超低温冻存对人AF-MSC的生物活性无明显影响。

关键词：人羊水间充质干细胞体外培养超低温冻存

人羊水来源间充质干细胞冻存后生物学特征研究

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中国修复重建外科杂志 2012年第2期26卷 141-145页

作者：王一茹白静陈杰刘丽凤王禹解放军总医院老年心血管病研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院心血管内科

目的体外分离培养人羊水间充质干细胞(human amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells,HAFMSCs),观察低温冻存复苏后HAFMSCs生物学特征,为进一步研究奠定理论基础。方法取12份自愿捐赠的孕16～20周羊水标本,采用改良两步法分离培... 详细信息

目的体外分离培养人羊水间充质干细胞(human amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells,HAFMSCs),观察低温冻存复苏后HAFMSCs生物学特征,为进一步研究奠定理论基础。方法取12份自愿捐赠的孕16～20周羊水标本,采用改良两步法分离培养HAFMSCs,用含量不同的FBS、DMSO冻存液冻存细胞,液氮冻存12周后42℃水浴复苏,锥虫蓝染色检测细胞存活率,MTT法检测细胞增殖速度并绘制生长曲线,流式细胞仪检测冻存复苏后HAFMSCs表型。对冻存复苏后的HAFMSCs进行成脂、成骨诱导分化培养,并分别采用油红O、von Kossa染色进行鉴定;实时荧光定量PCR分析细胞冻存前后Oct-4、Nanog mRNA表达差异。结果细胞冻存12周后,不同的冻存方案对细胞存活率影响有差异,优化的冻存方案为DMEM/FBS/DMSO=50%/40%/10%。冻存复苏后的HAFMSCs呈漩涡状排列,生长曲线呈S形,与冻存前细胞生长曲线相似。流式细胞仪检测示冻存复苏后细胞的MSCs表型CD29、CD44、CD73、CD90为阳性,造血干细胞表型CD34、CD45为阴性。成脂、成骨诱导21 d,油红O、von Kossa染色均呈阳性。实时荧光定量PCR检测示冻存前后Oct-4、Nanog mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HAFMSCs具有体外增殖快、分化能力强的优势;并可耐受短期冻存,复苏后细胞存活率高,生物学特征及分化潜能未发生明显变化,冻存液DMEM/FBS/DMSO=50%/40%/10%是较好冻存方案。

关键词：人羊水间充质干细胞冻存复苏生物学特征

人羊水、脐带、胎盘来源间充质干细胞体外增殖、分化、运输和免疫学特性的比较

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中国组织工程研究 2018年第25期22卷 4028-4034页

作者：赵姝灿郑桂纯林连蓬梅展图王丙云陈胜锋陈志胜佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东省佛山市528200

背景:随着再生医学推进,干细胞在疾病治疗中的使用频率逐步增高。目前在临床使用中,细胞数量、分化能力、异体接种时产生免疫排斥的可能性等因素都需要考虑,因此筛选出更适合临床使用的细胞种类显得十分有意义。目的:比较人羊水、脐带... 详细信息

背景:随着再生医学推进,干细胞在疾病治疗中的使用频率逐步增高。目前在临床使用中,细胞数量、分化能力、异体接种时产生免疫排斥的可能性等因素都需要考虑,因此筛选出更适合临床使用的细胞种类显得十分有意义。目的:比较人羊水、脐带、胎盘来源间充质干细胞的体外增殖能力、分化能力、运输液中细胞活性、免疫学特性,为临床应用提供选择依据。方法:分别对3种细胞进行分离培养和免疫荧光鉴定,在体外诱导3种细胞成骨、成脂、成神经分化;q PCR检测成神经分化后的Nestin、NT-3、MANF表达量;流式细胞术定量分析HLA-ABC、HLA-DR的表达量;将3种细胞放于细胞运输液内常温放置24,48,72 h,计算活细胞数量。结果与结论:(1)脐带间充质干细胞成脂能力最强,胎盘间充质干细胞成骨能力最好,3种细胞均可以表达神经细胞标志Nestin和GFAP;(2)成神经诱导后的胎盘间充质干细胞高表达NT-3,脐带间充质干细胞高表达MANF,分别可以用于不同类型的神经损伤修复;(3)羊水干细胞低表达HLA-ABC,不表达HLA-DR,更适合异体接种,产生免疫排斥的可能最低;(4)细胞运输液内储存72 h后羊水干细胞的存活率最高;(5)由于羊水、胎盘、脐带间充质干细胞在生物学特性上稍有差异,因此可根据其特点用于不同临床疾病治疗。

关键词：人羊水间充质干细胞人胎盘来源间充质干细胞人脐带来源间充质干细胞生物学特性组织相容性抗体干细胞羊水胎盘脐带细胞增殖细胞分化组织工程

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体修饰的人羊水间充质干细胞

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中国组织工程研究 2013年第23期17卷 4272-4278页

作者：杜晶春朱蕊范婷婷王鹏鲲林勇平徐霞广州医学院第一临床学院检验系广东省广州市510182 广州医学院第一附属医院妇产科广东省广州市510120

背景:以间充质干细胞为载体的基因治疗新方法具有广阔的应用价值。目的:利用慢病毒感染方法将肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体导入人羊水来源的间充质干细胞,以期获得稳定表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的人羊水间充质干细胞。方法:首... 详细信息

背景:以间充质干细胞为载体的基因治疗新方法具有广阔的应用价值。目的:利用慢病毒感染方法将肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体导入人羊水来源的间充质干细胞,以期获得稳定表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的人羊水间充质干细胞。方法:首先利用多位点Gateway技术构建慢病毒表达载体pLVpuro/EF1α-肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体,将该表达载体与慢病毒包装质粒同时转染293FT细胞,从而获得携带肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因的慢病毒颗粒。利用重组慢病毒颗粒感染人羊水间充质干细胞,并通过抗生素筛选的方法获得稳定表达目的基因-肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的羊水间充质干细胞,并对其稳定性进行鉴定。结果与结论:酶联免疫吸附法和Westernblot检测结果表明,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白在感染的人羊水间充质干细胞内呈高表达,其表达量可达到72μg/L。说明实验成功制备了肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体修饰的人羊水间充质干细胞。

关键词：干细胞干细胞培养与分化人羊水间充质干细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因修饰慢病毒载体多位点稳定表达目的基因 293FT细胞组织工程国家自然科学基金干细胞图片文章