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国外医学（病毒学分册） 2001年第4期8卷 100-104页

作者：于剑光中国医科大学

人类疱疹病毒８型（ＨＨＶ－８）是近年来从卡波济肉瘤（ＫＳ）中发现的一种新型疱疹病毒。ＨＨＶ－８的某些基因具有癌基因的功效。本文简要对ＨＨＶ－８的特性及其致病性作一综述。

关键词：人类疱疹病毒8型 HHV-8 致病性免疫性微生物学检查

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人类疱疹病毒8型的免疫逃逸分子机制

微生物学通报 2024年

作者：石静艺康晓静新疆医科大学研究生学院新疆维吾尔自治区人民医院皮肤性病科新疆皮肤性病临床医学研究中心新疆皮肤病研究重点实验室

人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8， HHV-8)又称卡波西肉瘤相关疱疹病毒(kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus， KSHV)，是一种人类γ-2型疱疹病毒。在不同种族和地区人群感染率差异较大。当HHV-8感染免疫功能正常人群时，病... 详细信息

人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8， HHV-8)又称卡波西肉瘤相关疱疹病毒(kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus， KSHV)，是一种人类γ-2型疱疹病毒。在不同种族和地区人群感染率差异较大。当HHV-8感染免疫功能正常人群时，病毒复制受限、HHV-8-DNA拷贝数较低、仅表达少量潜伏期蛋白，不易被机体免疫监察系统察觉发展为终身潜伏感染。而当HHV-8感染免疫功能紊乱或免疫功能缺陷人群时，可发展为卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma， KS)、多中心性卡斯特莱曼病(Multicenter castleman’s disease， MCD)、原发性渗出性淋巴瘤(Primary effusion lymphoma， PEL)，以及最近报道的KSHV炎性细胞因子综合征(KSHV inflammatory cytokine syndrome， KICS)，其死亡率高达60%。HHV-8主要通过干扰机体固有免疫和适应性免疫信号通路和表达病毒微小核糖核酸(microRNAs，miRNAs)等途径破坏机体免疫应答，导致其在宿主细胞内终身潜伏甚至发展为恶性肿瘤。本综述旨在探讨HHV-8的免疫逃逸机制，为HHV-8相关恶性肿瘤的免疫治疗及生物标志物提供思路。

关键词：人类疱疹病毒8型免疫逃逸固有免疫适应性免疫 miRNAs

人类疱疹病毒8型包膜糖蛋白编码基因K8.1的分离、克隆及在大肠杆菌中的表达

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南京医科大学学报（自然科学版） 2004年第2期24卷 105-108页

作者：曾怡卢春黄丽南京医科大学微生物学与免疫学系江苏南京210029

目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1编码基因,并置于大肠杆菌中作融合表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5'端分别引入BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点,以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为... 详细信息

目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1编码基因,并置于大肠杆菌中作融合表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5'端分别引入BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点,以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增出K8.1编码基因,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含K8.1基因重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌(***)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果:分离、克隆的411bp序列与基因数据库中所登记的HHV-8K8.1序列呈现100%同源性。IPTG诱导后的菌体,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),显示有一个41ku的融合表达蛋白产生。结论:HHV-8K8.1编码基因在***中初步获得正确表达。

关键词：人类疱疹病毒8型包膜糖蛋白K8.1基因原核表达

人类疱疹病毒8型病毒干扰素调节因子编码基因的克隆及在真核细胞中的表达

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南京医科大学学报（自然科学版） 2006年第12期26卷 1145-1149页

作者：程林卢春陈秀英曾怡姚水洪秦娣南京医科大学微生物学与免疫学系江苏南京210029

目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)编码的病毒干扰素调节因子(virusinterferonregulatoryfactor,vIRF)基因K9,并将其导入真核细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的K9基因核苷酸序列设计一对PCR引物,其5′端分别引入HindⅢ和Bam... 详细信息

目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)编码的病毒干扰素调节因子(virusinterferonregulatoryfactor,vIRF)基因K9,并将其导入真核细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的K9基因核苷酸序列设计一对PCR引物,其5′端分别引入HindⅢ和BamHⅠ酶切位点。以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增K9基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pK9。为了便于蛋白检测,再设计第二对引物,上游引物不变,在下游引物5′端引入了Flag序列。以质粒pK9为模板再次PCR,扩增K9-Flag基因,并把K9-Flag序列克隆入pcDNA3.1(+)中,得到重组质粒pK9F。重组质粒经酶切鉴定,核酸序列测定和分析后瞬时转染NIH3T3细胞,用RT-PCR、Westernblot分别从核酸和蛋白水平检测K9基因的表达情况。结果:PCR分离、克隆的K9-Flag序列全长1380bp,核酸序列分析显示克隆的K9基因与GenBank中己经登记的K9基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Westernblot都在K9预期位置检测到特异性条带。结论:HHV-8K9基因在NIH3T3细胞中获得了正确表达。

关键词：人类疱疹病毒8型 K9 病毒干扰素调节因子真核表达

人类疱疹病毒8型ORF50基因截短片段和vIL-6全长基因的克隆、表达及表达产物的纯化

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南京医科大学学报（自然科学版） 2009年第3期29卷 303-307页

作者：徐静朱晓蕾秦娣卢春南京医科大学微生物学与免疫学系江苏南京210029

目的:克隆人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)ORF50截短基因和编码病毒IL-6(vIL-6)全长基因,将其置于大肠杆菌中作融合表达,并纯化融合表达的vIL-6。方法:分别以本实验室先前构建的重组质粒pcDNA3.1+ORF50和pcD-NA3.1+vIL-6为... 详细信息

目的:克隆人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)ORF50截短基因和编码病毒IL-6(vIL-6)全长基因,将其置于大肠杆菌中作融合表达,并纯化融合表达的vIL-6。方法:分别以本实验室先前构建的重组质粒pcDNA3.1+ORF50和pcD-NA3.1+vIL-6为模板,PCR扩增目的基因片段,克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含HHV-8ORF50截短基因的重组原核表达质粒pORF50-C1,pORF50-C2,pORF50-C3和含vIL-6全长基因的重组原核表达质粒pvIL-6。重组质粒经酶切鉴定和核酸序列测定正确后转化大肠杆菌(***)BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。用glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化vIL-6表达产物。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western blot检测GST融合蛋白的表达和纯化情况。结果:核酸序列分析的结果表明,克隆的序列与基因数据库中已登记的HHV-8相应序列呈现100%同源;IPTG诱导后的菌体,经SDS-PAGE,显示有相应大小的融合表达蛋白产生。Western blot亦在预期的位置检测到特异性条带。结论:在***中获得了正确表达的HHV-8ORF50基因3个截短片段和vIL-6全长基因,并成功纯化了vIL-6融合蛋白。

关键词：人类疱疹病毒8型 ORF50截短基因 vIL-6全长基因原核表达亲和层析

人类疱疹病毒8型肿瘤转化基因K12的分离及在昆虫细胞中的表达

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南京医科大学学报（自然科学版） 2003年第5期23卷 425-428,F002页

作者：卢春朱建中南京医科大学微生物学与免疫学系江苏南京210029

目的:分离人类疱疹病毒8型(HHV-8)肿瘤转化基因 K12,克隆至杆状病毒载体并在昆虫细胞中作尝试性表达。方法:设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHI、EcoRI酶切位点,以佛波脂刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模... 详细信息

目的:分离人类疱疹病毒8型(HHV-8)肿瘤转化基因 K12,克隆至杆状病毒载体并在昆虫细胞中作尝试性表达。方法:设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHI、EcoRI酶切位点,以佛波脂刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增HHV-8肿瘤转化基因K12。将经序列测定后的PCR产物克隆进杆状病毒转移载体pVL1393中,构建成重K12杆状病毒转移载体pVL-K12,并与线性BaculoGold病毒 DNA共转染昆虫细胞Sf9,获得重组病毒。RT-PCR检测K12 mRNA转录水平;间接免疫荧光染色(IFA)检测K12编码蛋白在Sf9细胞中的表达状况。结果:含 HHV-8 K12基因重组杆状病毒在昆虫细胞Sf9中获得表达,经IFA证实该重组蛋白为HHV-8特异性蛋白。结论:杆状病毒载体能够介导HHV-8肿瘤转化基因K12编码的蛋白在昆虫细胞中表达。

关键词：人类疱疹病毒8型肿瘤转化基因K12 杆状病毒表达载体分离昆虫细胞

人类疱疹病毒8型K1基因的克隆及其在内皮细胞和前列腺癌细胞中的表达

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江苏医药 2011年第1期37卷 4-7页

作者：闵治超王子盾糜远源程伟华立新冯宁翰南京医科大学第一附属医院泌尿外科 210029

目的构建含人类疱疹病毒8型(HHV-8)致瘤基因K1的真核表达质粒,并将其导入内皮细胞(EC)和前列腺癌细胞(PC-3)中进行表达。方法根据GenBank中登记的K1基因核酸序列设计PCR引物,在其5′端及3′端分别引入Xho I和Xba I酶切位点,并在其下游引... 详细信息

目的构建含人类疱疹病毒8型(HHV-8)致瘤基因K1的真核表达质粒,并将其导入内皮细胞(EC)和前列腺癌细胞(PC-3)中进行表达。方法根据GenBank中登记的K1基因核酸序列设计PCR引物,在其5′端及3′端分别引入Xho I和Xba I酶切位点,并在其下游引入Flag标签蛋白序列用于后期K1蛋白表达的检测。以含有K1基因的HHV-8 DNA为模板扩增K1基因,经双酶切纯化后将其克隆入真核表达载体pCI-neo中。重组质粒经核酸测序鉴定后分别瞬时转染EC和PC-3细胞系,于转染后48 h提取细胞RNA及蛋白,分别以RT-PCR和Western blot检测K1基因的转录和表达情况。结果成功构建了含K1基因的重组质粒pCI-K1。核酸序列分析显示,克隆的K1基因全长928 bp,与GenBank中登记的K1基因100%同源,引入的Flag序列完全正确。经pCI-K1转染后的EC及PC-3细胞中均可检测到K1 mRNA转录和蛋白表达。结论重组质粒pCI-K1构建成功,并在EC和PC-3细胞中正确表达。

关键词：人类疱疹病毒8型 K1致瘤基因真核表达前列腺癌

人类疱疹病毒8型包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体的制备与鉴定

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南京医科大学学报（自然科学版） 2005年第10期25卷 685-688,F0002页

作者：张玲卢春曾怡钱超唐桂霞秦娣南京医科大学微生物学与免疫学系江苏南京210029

目的:制备人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含重组质粒pGEX-6p-1+K8.1的大肠杆菌BL21表达谷胱甘肽-S-转移酶GST/K8.1融合蛋白,将以包涵体形式存在... 详细信息

目的:制备人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含重组质粒pGEX-6p-1+K8.1的大肠杆菌BL21表达谷胱甘肽-S-转移酶GST/K8.1融合蛋白,将以包涵体形式存在的融合蛋白进行变性、复性、复性后的GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化。以纯化的GST/K8.1融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选分泌K8.1单抗的杂交瘤细胞株。免疫组化染色(IHC)和Westernblot法鉴定单抗的特异性。结果:建立了一株稳定分泌抗K8.1单抗的杂交瘤细胞株,命名为3G10;IHC和Westernblot法显示,3G10株单抗能特异地识别HHV-8K8.1蛋白。结论:成功制备出抗HHV-8包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体。

关键词：人类疱疹病毒8型包膜糖蛋门K8.1 包涵体单克隆抗体

人类疱疹病毒8型ORF26和ORF75基因亚型在鳞状细胞癌中的分布

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人类疱疹病毒8型ORF26和ORF75基因亚型在鳞状细胞癌中的分布

作者：李桂寅石河子大学

学位级别：硕士

目的：明确鳞癌感染人类疱疹病毒8型（HHV-8） ORF75、ORF26基因亚型的分类及分布并初步探讨其与鳞癌的相关性。方法：对40例皮肤鳞癌、46例食管鳞癌石蜡包埋组织进行HHV-8 DNA抽提;使用巢式PCR方法对抽提的DNA进行ORF26基因片段的... 详细信息

目的：明确鳞癌感染人类疱疹病毒8型（HHV-8） ORF75、ORF26基因亚型的分类及分布并初步探讨其与鳞癌的相关性。方法：对40例皮肤鳞癌、46例食管鳞癌石蜡包埋组织进行HHV-8 DNA抽提;使用巢式PCR方法对抽提的DNA进行ORF26基因片段的扩增,扩增产物在1.5%的琼脂糖凝胶上电泳,并在凝胶成像系统下观察电泳结果从而确定ORF26基因阳性标本;对ORF26基因阳性标本的DNA进行双向测序;采用DNASTAR软件把双向测序结果装配成重叠群;使用Clustal W软件对该重叠群进行核苷酸序列比对,采用PHYLIP软件包对比对结果进行系统发生学分析,从而确定HHV-8 ORF26基因的亚型分类;最后运用方检验、Fisher确切概率法等统计方法对结果进行统计学分析。结果：（ORF26检测结果）：①40例皮肤鳞癌有9例HHV-8感染为阳性,阳性率为22.5%;46例食管鳞癌有10例为阳性,阳性率为21.74%。②新疆皮肤鳞癌感染HHV-8 ORF26亚型6例为A亚型,3例为C亚型;食管鳞癌感染HHV-8 ORF26亚型7例为A亚型,3例为C亚型,③鳞癌感染HHV-8 ORF26基因亚型与鳞癌患者感染部位及病理分级之间没有统计学意义（P＞0.05）;（ORF75检测结果）①40例皮肤鳞癌有10例HHV-8感染为阳性,阳性率为25.0%;46例食管鳞癌有12例为阳性,阳性率为26.1%.②皮肤鳞癌感染HHV-8 ORF75亚型6例为A亚型,4例为C亚型;食管鳞癌感染HHV-8 ORF75亚型8例为A亚型,4例为C亚型③鳞癌感染HHV-8 ORF75基因亚型与鳞癌患者部位及病理分级之间没有统计学意义（P＞0.05）结论：皮肤鳞癌和食管鳞癌患者感染HHV-8有一定的特殊性;皮肤鳞癌和食管鳞癌患者感染HHV-8 ORF26、ORF75亚型属于A亚型和C亚型;皮肤鳞癌和食管鳞癌感染HHV-8 ORF26、ORF75基因亚型与患者感染部位及病理分级无关。

关键词：皮肤鳞癌食管鳞癌人类疱疹病毒8型 ORF26基因 ORF75基因亚型

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第1期24卷 76-80页

作者：卢春曾怡黄丽钱超唐桂霞南京医科大学微生物学与免疫学系 210029

目的　研究HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ对人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)Rta基因启动子活性影响 ;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性。方法　将已构建的HHV 8Rta启动子 +虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV 1Tat基因重组表达质粒... 详细信息

目的　研究HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ对人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)Rta基因启动子活性影响 ;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性。方法　将已构建的HHV 8Rta启动子 +虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV 1Tat基因重组表达质粒转染多种细胞 ,转染后 2 4h加入IFN γ和或重组HIV 1gp12 0刺激 ,刺激后 2 4h收集细胞 ,进行虫荧光素酶活性检测。试验同时以佛波酯类化合物TPA刺激为阳性对照 ,进行最佳刺激时间点的选择和不同转染方法转染效率的比较。结果　①HHV 8Rta启动子启动活性在TPA刺激后的 2 4h达到最高峰 ;②HHV 8Rta启动子启动活性的发挥不依赖于HHV 8和或EBV基因组的存在 ,且在血管内皮细胞 (HUVECs)中启动活性最佳 ;③IFN γ可以诱导Rta启动子活性 ;但HIV 1Tat和gp12 0蛋白与IFN γ协同上调Rta启动子活性的能力较弱。结论　HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ至少部分通过Rta基因启动子激活HHV

关键词： HIV-1 细胞因子 IFN-γ Rta基因基因启动子人类疱疹病毒8型基因重组质粒