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人类免疫缺陷病毒1型Tat蛋白N末端缺失突变体融合蛋白的表达及其免疫原性分析

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病毒学报 2011年第6期27卷 580-586页

作者：张华群廖文婷陈秋莉葛宜兵杨界章萍萍祁培培刘超何婷王锦红潘卫曹洁第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032

本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大... 详细信息

本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达及Ni^(2+)-NTA柱亲和层析纯化。纯化后的突变体融合蛋白PET32a-Tat22-101经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,其相对分子质量约为26.9kD。该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测结果表明,pET32a-Tat22-101融合蛋白不仅较好地保留其免疫原性,而且能诱导产生高滴度的针对Tat N末端区之外的Tat其他功能区表位的抗体,为进一步研究Tat生物学功能和研制新型HIV Tat疫苗奠定试验基础。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型 Tat蛋白缺失突变原核表达免疫原性

人类免疫缺陷病毒1型耐药性检测方法及其应用进展

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中华检验医学杂志 2005年第7期28卷 758-760页

作者：杨坤李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心北京100710

近年来,艾滋病临床治疗失败中的耐药性问题,已经引起了越来越多的关注.在此背景下,耐药性检测逐步成为优化艾滋病联合化疗方案的有力工具。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型耐药性检测方法免疫学分子生物学

人类免疫缺陷病毒1型病毒复制负调控因子编码基因的克隆及在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中的表达

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南京医科大学学报（自然科学版） 2008年第4期28卷 434-438,444页

作者：曹戌华立新冯宁翰李久明吕志刚秦娣卢春南京医科大学第一附属医院泌尿外科江苏南京210029 南京医科大学微生物学与免疫学系江苏南京210029

目的:分离克隆人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)编码的病毒复制负调控因子(Negative factor,Nef)基因,并将其导入BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的Nef基因核苷酸序列设计PCR引物,在其5′端分别引入EcoRⅠ和SalⅠ... 详细信息

目的:分离克隆人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)编码的病毒复制负调控因子(Negative factor,Nef)基因,并将其导入BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的Nef基因核苷酸序列设计PCR引物,在其5′端分别引入EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点;以含有Nef基因的pCINL质粒为模板,扩增Nef基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pCI-neo中。为了便于蛋白检测,在下游引物5′端引入Flag序列,构建重组真核表达质粒。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后分别瞬时转染BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞,用RT-PCR、Western blot分别从核酸和蛋白水平检测Nef基因的表达情况。结果:成功构建了含Nef基因的重组真核表达质粒,核酸序列分析显示,克隆的Nef基因序列全长651bp,与GenBank中登记的Nef基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Western blot都在Nef预期位置检测到特异性条带。结论:HIV-1Nef基因在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中获得了正确表达。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型病毒复制负调控因子真核表达

人类免疫缺陷病毒1型RNA定量参考品的研制

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中华实验和临床病毒学杂志 2004年第4期18卷 321-324页

作者：张春涛宋爱京李秀华李娟王佑春中国药品生物制品检定所细胞室北京100050

目的　研制人类免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)RNA核酸国家参考品及制定相应标准。方法　收集各地HIV感染者阳性血浆和HIV非感染者血浆 ,应用HIV、HCV抗体和HBsAg检测试剂进行筛选 ,对HIV抗体筛查阳性者用新加坡Genelabs公司的HIVBLOT 2 2... 详细信息

目的　研制人类免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)RNA核酸国家参考品及制定相应标准。方法　收集各地HIV感染者阳性血浆和HIV非感染者血浆 ,应用HIV、HCV抗体和HBsAg检测试剂进行筛选 ,对HIV抗体筛查阳性者用新加坡Genelabs公司的HIVBLOT 2 2确证试剂进行确证。以世界卫生组织 (WHO)推荐的HIVRNA标准品对国家HIV核酸参考品中定量样品进行标定 ,并对其稳定性进行研究。结果　经过筛选 ,选出 8份样品为阴性参考品 ,8份样品为阳性参考品 ,3份为定量参考品 ,6份为灵敏度参考品 ,5份为线性参考品。几次独立标定 ,得到定量参考品HIVRNA的国际单位(IU) ,其中b1～b3的国际单位的对数值在 x±s以内 ,表明结果可靠。稳定性实验数据表明 ,该核酸参考品在 4℃以下可存放 4d。结论　初步建立了HIV核酸参考品。

关键词：参考品 HIV 阳性 RNA 人类免疫缺陷病毒1型核酸定量国际结论对数

人类免疫缺陷病毒1型慢性感染者B细胞表型分析及抗反转录病毒治疗的修复作用

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微生物与感染 2013年第3期8卷 144-152页

作者：闫静静仇超李亮助邱趁丽傅卫辉孙俊徐建青张晓燕复旦大学附属公共卫生临床中心上海201508 复旦大学生物医学研究院上海200032 复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染会造成严重的免疫功能损伤,除引起CD4+T细胞不断耗损和功能损伤外,体液免疫应答也受到损伤。本研究通过检测HIV-1慢性感染者和慢性感染治疗者外周血B细胞数目和亚群比例,以及活化、凋亡和共刺激分子的表... 详细信息

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染会造成严重的免疫功能损伤,除引起CD4+T细胞不断耗损和功能损伤外,体液免疫应答也受到损伤。本研究通过检测HIV-1慢性感染者和慢性感染治疗者外周血B细胞数目和亚群比例,以及活化、凋亡和共刺激分子的表达,探讨HIV-1感染者中B细胞损伤及抗反转录病毒治疗(ART)对B细胞损伤的修复作用。结果显示,HIV-1慢性感染者外周血B细胞数目显著低于健康对照组,其中未成熟B细胞、初始B细胞、静息记忆B细胞和浆母细胞显著降低,而组织样记忆B细胞显著增加,ART可恢复初始B细胞和组织样记忆B细胞比例,但不能恢复静息记忆B细胞比例。与健康对照组相比,HIV-1感染者未成熟B细胞、初始B细胞、静息记忆B细胞和组织样记忆B细胞中CD38的表达上调;CD95的表达在所有B细胞亚群中均上调;而Bcl-2在初始B细胞、组织样记忆B细胞和浆母细胞中的表达显著降低;静息记忆B细胞和浆母细胞中PD-1的表达上调;共刺激分子CD40在所有B细胞亚群中的表达降低,而CD70的表达在未成熟B细胞以外的亚群中均显著下调。ART仅能部分修复以上分子的表达。结果表明,HIV-1感染引起B细胞及其亚群比例异常,B细胞表现为过度活化、易凋亡及与T细胞作用受损,ART不能完全修复B细胞损伤,有效的免疫干预策略亟待开发。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型 B细胞表型抗反转录病毒治疗

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人类免疫缺陷病毒1型对结核病传染性的影响

国际结核病与肺部疾病杂志 1996年第2期 52-59页

作者： P.Nunn M.Mungai J.Nyamwaya C.Gicheha R.J.Brindle D.T Dunn W.Githui J.O.Were K.P.W.J.McAdam 李荣德 Kenya Medical Research Institute/Wellcome Trust Collaborative Research Programme Kenya London School of Hygiene and Tropical Medicine.LondonUK. Respiratory Disease Research Unit.Kenya.Medical Research Institute(KEMRI).Kenya Public Health Laboratory.Oxford UK London School of Hygiene and Tropical Medicine.London UK. Respiratory Disease Research Unit.Kenya.Medieal Research Institute(KEMRI).Kenyal Clinical Research Center.KEMRI.Kenya

背景:发展中国家三级转诊医院及其服务社区。目的:确定染有人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的、经培养证实的肺结核病人的传染性。设计:HIV-1阳性和阴性的肺结核病例的家庭内接触者中结核病发病率和结核菌素皮肤试验阳性率的比较。结果:在25... 详细信息

背景:发展中国家三级转诊医院及其服务社区。目的:确定染有人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的、经培养证实的肺结核病人的传染性。设计:HIV-1阳性和阴性的肺结核病例的家庭内接触者中结核病发病率和结核菌素皮肤试验阳性率的比较。结果:在255名HIV-1阴性索引病例(index case)的接触者中,2名为HIV-1阳性,在102名HIV-1阳性索引病例的接触者中,14名为HIV-1阳性(让步比[odds ratio,OR,一个事件发生的概率对其不发生的概率之比。译注。]=20.0,95％置信区间(CI)4.4—193),接触者中共诊断结核病21例,其中3例为HIV-1阳性。患结核病的HIV-1阳性索引病例接触者与HIV-1阴性索引病例接触者相比,总的未经校正的OR为1.6(95％CI0.6—4.3)。单独在HIV-1阴性接触者中,OR为1.5(95％CI0.4—4.4)。在该组中,接触者中结核病的最佳预报者是索引病例中的女性(OR=3.4,95％CI1.1—12),与索引病例同睡一床者(OR=2.6,95％CI0.9—1.4),和接触者年龄小于5岁者(OR=3.3,95％CI1.1—9.5),HIV-1阳性接触者比HIV-1阴性接触者更容易发生结核病(OR=4.1,95％CI0.7—17),HIV-1阳性和阴性索引病例的HIV-1阴性接触者的结核素皮肤试验阳性率相同(OR=1.1,95％CI0.7—1.6)。结论:与HIV-1联合的肺结核并不比单独患结核病的传染性强。社区中有了HIV-1。

关键词：接触者人类免疫缺陷病毒1型结核病结核菌素皮肤试验 tuberculosis HIV-1 传染性结核分支杆菌索引结核菌素阳性

人类免疫缺陷病毒1型gp41结构与功能的研究进展

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微生物与感染 2011年第4期6卷 238-247页

作者：姚茜茜吕钧叶荣复旦大学上海医学院上海200032

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)通过其包膜糖蛋白(Env)介导侵入靶细胞。Env由受体特异性结合单位gp120和膜融合单位gp41组成。HIV-1的gp41分为3个功能区:膜外区、跨膜区和膜内区。膜外区是病毒感染时膜融合的主要结构基础;跨膜区通过疏水... 详细信息

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)通过其包膜糖蛋白(Env)介导侵入靶细胞。Env由受体特异性结合单位gp120和膜融合单位gp41组成。HIV-1的gp41分为3个功能区:膜外区、跨膜区和膜内区。膜外区是病毒感染时膜融合的主要结构基础;跨膜区通过疏水残基使Env锚定在脂质膜上;膜内区则表现多重功能,参与病毒的感染、复制、装配等过程。膜内区的功能由其特定的结构域或基序完成,包括3个慢病毒裂解肽(LLP-1、LLP-2、LLP-3)、含Tyr基序(Y712XXL和Y802W803)和双Leu基序(LL855/856)等。病毒诱导的融合过程中,包含Kennedy表位在内的膜内区发生拓扑学改变,表明gp41的3个功能区之间存在相互作用。这些进展对了解HIV-1的感染、复制和致病机制,开发新的抗病毒药物具有重要意义。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型 gp41 功能区膜内区基序

不同血样处理方法对人类免疫缺陷病毒1型载量检测结果的影响

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中华医院感染学杂志 2014年第12期24卷 3115-3117页

作者：盛磊殷勤石河子大学第一附属医院检验科新疆石河子832000 石河子市中心血站新疆石河子832000

目的：探讨不同血样处理方法对人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）病毒载量检测结果的影响，以提高检测准确率。方法采用H IV-1核酸序列扩增技术对不同方法处理后的样品进行检测，主要观察条件为离心、血浆样品保存温度、保存时间以及冻融次... 详细信息

目的：探讨不同血样处理方法对人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）病毒载量检测结果的影响，以提高检测准确率。方法采用H IV-1核酸序列扩增技术对不同方法处理后的样品进行检测，主要观察条件为离心、血浆样品保存温度、保存时间以及冻融次数等。结果不同血样处理方法基线样品的检测值误差为0．00114/lg ，在可控范围内（病毒载量检测值变化＜0．2/l g ）；未经分离血浆的检测结果为0．219～0．444/lg与基线值比较差异有统计学意义（病毒载量检测值变化＞0．2/lg ）；对抗凝后的血液样品进行适当的分离，将有助于更加准确地检测病毒载量，对于离心后的血浆样品，其最佳保存条件为室温下6 h、-4℃条件下可保存至24 h ，冻融次数以-20℃冻融1次为佳、-70℃可冻融2次后即检测。结论离心、低温和适当冻融将有助于提高 HIV-1病毒载量检测的准确度。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型病毒载量检测影响因素

深圳市男男性行为人群人类免疫缺陷病毒1型流行株的聚集性分析

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中华医院感染学杂志 2011年第14期21卷 2892-2894页

作者：王晓辉鲍毅何太平陈琳程锦泉华中科技大学深圳公共卫生研究院广东深圳518055 广东医学院临床诊断系广东湛江524023

目的研究深圳市男男性行为(MSM)人群人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)亚型的聚集性,为艾滋病的预防治疗提供科学依据。方法 RT-PCR巢式扩增深圳市MSM人群HIV-1病毒的gag基因和env基因,结合HIV数据库和MEGA4.02软件分析测序结果,确定亚型;建立... 详细信息

目的研究深圳市男男性行为(MSM)人群人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)亚型的聚集性,为艾滋病的预防治疗提供科学依据。方法 RT-PCR巢式扩增深圳市MSM人群HIV-1病毒的gag基因和env基因,结合HIV数据库和MEGA4.02软件分析测序结果,确定亚型;建立进化树,比较各亚型的组内基因离散率。结果深圳市MSM人群中HIV-1流行株以CRF01-AE为主,占53.0%,与CRF07-BC、CRF08-BC、B、C共同存在,各个亚型均形成了簇集(cluster);B亚型cluster的基因离散率最大(gag区:9.5%,env区:16.1%),CRF01-AE形成了3个独立的cluster。结论深圳市MSM人群中流行的HIV-1毒株是复杂的,并且不同亚型的毒株也有各自的变异,以CRF01-AE和B亚型最为典型,病毒基因的变异对病毒的表型,疾病的进程及耐药性的影响尚待进一步研究。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型男男性行为基因变异进化树模型聚集性分析