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人眼小梁细胞体外培养与细胞鉴定

眼科学报 1998年第4期14卷 190-194,198页

作者：钟丽春李梅李美玉北京医科大学第一临床医学院眼科北京100034

目的:建立人眼小梁细胞体外培养方法和确定该细胞的鉴定要点。方法:小梁网和角巩膜组织来源于除眼部疾患以外各种原因死亡的6岁以下儿童,在24小时内取材的34人68只正常眼球。组织块原代培养和细胞传代培养。用光镜和电镜观察培养细胞;... 详细信息

目的:建立人眼小梁细胞体外培养方法和确定该细胞的鉴定要点。方法:小梁网和角巩膜组织来源于除眼部疾患以外各种原因死亡的6岁以下儿童,在24小时内取材的34人68只正常眼球。组织块原代培养和细胞传代培养。用光镜和电镜观察培养细胞;用免疫组织细胞化学S-P法染色培养细胞的细胞外基质包括纤粘连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和Ⅳ型胶原(Ⅳ collagen,ⅣC)。结果:供者年龄小、取材距死亡时间短者小梁细胞易生长;分离小梁网必须准确;原代培养的接种与换液和传代培养的时机与比例应适当;实验研究选用传3～5代细胞。培养的小梁细胞生长特性和形态特征不同于角巩膜组织的细胞;超微结构使其与角膜基质细胞相鉴别;细胞外基质染色使其与巩膜成纤维细胞相鉴别。结论:本研究表明,只要掌握培养方法和要点,人眼小梁细胞体外培养在常规培养条件下并不困难。对培养的人眼小梁细胞鉴定至少从其生长特性,形态特征和细胞外基质(FN,LN和ⅣC)免疫组织细胞化学S-P法染色特点三方面相结合方能确定小梁细胞。建立人眼小梁细胞体外培养方法与细胞鉴定是进一步研究原发性开角型青光眼病因和发病机制的必要条件和重要保证。眼科学报1998;14:190～194。

关键词：人眼小梁细胞细胞培养细胞鉴定开角型青光眼

转化生长因子β_1对培养人眼小梁细胞分泌Ⅳ型胶原的影响

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眼科学报 2000年第4期16卷 217-219页

作者：李梅李美玉北京大学第一临床医学院眼科 100034

目的:观察转化生长因子β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)对培养人眼小梁细胞分泌Ⅳ型胶原的影响。方法:在成功地培养人眼小梁细胞的基础上,应用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbentassay ELISA)及免疫组织化... 详细信息

目的:观察转化生长因子β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)对培养人眼小梁细胞分泌Ⅳ型胶原的影响。方法:在成功地培养人眼小梁细胞的基础上,应用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbentassay ELISA)及免疫组织化学技术,分别观察1ng/ml TGF-β1作用于小梁细胞后培养上清液中及细胞铺片上Ⅳ型胶原的含量。结果:ELISA法:TGF-β_1作用第一个4天,实验组Ⅳ型胶原的含量为187.50±29.01pg/ml(x±s),对照组为93.75±20.56pg/ml,两者间的差异有统计学意义。TGF-β_1作用第二个4天,实验组为128.75±52.02pg/ml,对照组为91.25±21.36pg/ml,差异无统计学意义。Ⅳ型胶原的含量在对照组之间及实验组之间也无统计学差异。免疫组化法:TGF-β_1作用12天,实验组铺片与对照组相比Ⅳ型胶原的阳性着色增强。结论:TGF-β_1可以促进培养的人眼小梁细胞分泌Ⅳ型胶原,它可能是原发性开角型青光眼患者小梁细胞外基质堆积的原因之一。眼科学报2000;16:217～219。

关键词：人眼小梁细胞细胞培养 Ⅳ型胶原转化生长因子β 开角型青光眼

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体外培养人眼小梁细胞Ang Ⅱ的表达

眼科研究 2009年第12期27卷 1077-1079页

作者：章艳熊新春郑红梅秦文宜昌市第一人民医院(三峡大学人民医院)眼科 443000 华中科技大学协和医院眼科武汉430022

目的探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)在体外培养的人眼小梁细胞(TMC)中的表达情况。方法原代和传代培养人眼TMC株,收集第3代人眼TMC用于制作细胞爬片。利用免疫组织化学染色法和Western blot法检测体外培养人眼TMC中AngⅡ蛋白的表达。结果传... 详细信息

目的探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)在体外培养的人眼小梁细胞(TMC)中的表达情况。方法原代和传代培养人眼TMC株,收集第3代人眼TMC用于制作细胞爬片。利用免疫组织化学染色法和Western blot法检测体外培养人眼TMC中AngⅡ蛋白的表达。结果传代培养的人眼TMC呈典型梭形,免疫组织化学检测显示体外培养的人眼TMC细胞膜和细胞质中可见AngⅡ的阳性颗粒,阴形对照片中未见有Ang Ⅱ蛋白表达。Western blot法在相对分子质量为64000处可见一明显蛋白条带,为Ang Ⅱ蛋白的阳性表达。结论Ang Ⅱ在体外培养的人眼TMC中呈阳性表达,提示AngⅡ可能参与青光眼眼压和房水循环的调节。

关键词：人眼小梁细胞血管紧张素Ⅱ 眼压

白细胞介素-1β对人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3表达的影响

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白细胞介素-1β对人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3表达的影响

作者：李超福建医科大学

学位级别：硕士

目的:研究白细胞介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)对体外培养的人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinases 3,MMP-3)表达的影响。方法:(1)采用组织块培养法进行人眼小梁细胞的体外培养,运用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐([3-... 详细信息

目的:研究白细胞介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)对体外培养的人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinases 3,MMP-3)表达的影响。方法:(1)采用组织块培养法进行人眼小梁细胞的体外培养,运用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐([3-(4,5-dimethylthiazol2-yl)-2,5-diphenyl tetrazoliumbromide],MTT)比色法、倒置显微镜、透射电镜、免疫细胞化学法等方法观察体外培养的人眼小梁细胞的生物学特性并进行鉴定。(2)采用RT-PCR法及ELISA法检测体外培养的传3代人眼小梁细胞经终浓度为0ng/ml(对照组)、5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml的IL-1β处理24h后,细胞表达MMP-3量的变化。结果:(1)组织块培养14d左右可见细胞从其边缘向外生长,倒置显微镜下呈梭形、圆形、椭圆形,并有多个突起,透射电镜可见人眼小梁细胞表面有较多的微绒毛,细胞间缝隙连接,胞质内见很多次级溶酶体。(2)免疫细胞化学法检测纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)染色阳性,传3代细胞均表现为胞浆呈红色。(3)RT-PCR法检测IL-1β终浓度为5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml实验组MMP-3/GAPDH的相对灰度比值分别为0.3437±0.0764、0.8588±0.0443、1.0079±0.0347、1.3466±0.0309,均高于对照组的相对灰度比值0.1037±0.0494,且各实验组与对照组相比采用Dunnett-t检验,差异有统计学意义(P＜0.05)。(4)ELISA法检测IL-1β终浓度为5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml实验组的MMP-3浓度值分别为2.0325±0.2456ng/ml、2.4607±0.350ng/ml、2.8532±0.1392ng/ml、3.5858±0.1141ng/ml,均高于对照组的浓度值1.2437±0.3910 ng/ml,且各实验组与对照组相比采用Dunnett-t检验,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:(1)掌握细胞培养的基本技术,并从其生长特点、超微结构及FN、LN、NSE免疫细胞化学等进行鉴定,可确定本实验室培养的细胞为正常人眼小梁细胞。(2)体外培养的人眼小梁细胞能够表达MMP-3。(3)IL-1β可增加体外培养的人眼小梁细胞MMP-3的表达,并且呈现正相剂量依赖性。

关键词：人眼小梁细胞白细胞介素细胞培养基质金属蛋白酶细胞外基质

肿瘤坏死因子-α对体外培养的人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3和基层金属蛋白酶-9表达的影响

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眼视光学杂志 2007年第4期9卷 217-221页

作者：濮清岚吴瑜瑜林玲何艳福建医科大学第二临床医学院眼科福建泉州362000 福建医科大学分子生物学及生化教研室福建福州350004

目的探讨肿瘤坏死因子-α,(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对体外培养的人眼小梁细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP-3、MMP-9)表达的影响。方法对人眼小梁细胞(human trabecular cells,HTCS)进行体外原代培养及传代培养。取传3代的小梁细胞分别施加含TNF-α终浓度为0(对照组)、1mg/ml、10mg/ml、25ng/ml的无血清培养液,48h后采用免疫细胞化学法观察小梁细胞MMP-3、MMP-9的染色变化。对结果进行计算机图像分析并进行统计学检验。结果利用免疫细胞化学法检测1ng/ml、10ng/ml、25ng/ml的TNF-α实验组小梁细胞MMP-3的平均灰度值分别为138.63±8.15、138.73±7.02、129.25±10.47,均低于对照组平均灰度值143.53±6.01,且各实验组与对照组比较差异均有显著性(P小梁细胞MMP-9的平均灰度值分别为137.60±11.53、125.20±17.29、119.88±12.47,均低于对照组平均灰度值145.30±7.05,且各实验组与对照组比较差异均有显著性(P小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达,增加了小梁网异常堆积的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的降解,使房水流出增加,眼压降低。

关键词：人眼小梁细胞肿瘤坏死因子基质金属蛋白酶青光眼,原发性,开角型

白细胞介素-1β对人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3表达的影响

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临床眼科杂志 2008年第4期16卷 298-301页

作者：李超吴瑜瑜福建医科大学第二临床医学院眼科泉州362000

目的观察白细胞介素-1β(IL-1β)对体外培养的人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinases3,MMP-3)表达的影响。方法采用组织块培养法对人眼小梁细胞(human trabecular cells,HTCs)进行体外原代及传代培养,取传3代小梁细... 详细信息

目的观察白细胞介素-1β(IL-1β)对体外培养的人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinases3,MMP-3)表达的影响。方法采用组织块培养法对人眼小梁细胞(human trabecular cells,HTCs)进行体外原代及传代培养,取传3代小梁细胞分别加入含有IL-1β终浓度为0ng/ml(对照组)、5、10、25、50ng/ml的无血清培养液,24h后采用RT-PCR法及ELISA法检测MMP-3量的变化。结果RT-PCR法检测IL-1β终浓度为5、10、25、50ng/ml实验组MMP-3/GAPDH的相对灰度比值分别为0.3437±0.0764、0.8588±0.0443、1.0079±0.0347、1.3466±0.0309,均高于对照组的相对灰度比值0.1037±0.0494,且各实验组与对照组相比差异有统计学意义(P小梁网组织细胞外基质(ECM)的堆积,使房水引流通畅,降低眼内压。

关键词：人眼小梁细胞白细胞介素细胞培养基质金属蛋白酶细胞外基质