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去甲斑蝥素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞侵袭转移能力的影响

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中药新药与临床药理 2017年第1期28卷 27-31页

作者：陈杰陈百芳刘新光涂植光重庆医科大学检验医学院重庆400016

目的探讨去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞侵袭、转移的影响及可能的分子机制。方法 MTT法检测NCTD对A431细胞生长增殖的影响,Transwell小室、细胞黏附实验、划痕实验等方法检测药物对A431细胞侵袭、黏附和... 详细信息

目的探讨去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞侵袭、转移的影响及可能的分子机制。方法 MTT法检测NCTD对A431细胞生长增殖的影响,Transwell小室、细胞黏附实验、划痕实验等方法检测药物对A431细胞侵袭、黏附和迁移能力的影响,Western blot法检测药物作用后细胞中MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白水平的表达变化。结果 MTT实验显示,NCTD作用24 h,A431细胞的生长增殖能力受到明显抑制,与对照组比较,40.0μmol·L-1NCTD组的抑制率为(45.38±2.75)%(P细胞黏附、划痕实验显示,经20.0,40.0μmol·L-1NCTD作用细胞24 h后,与对照组相比,用药组细胞的侵袭、黏附、迁移能力均有不同程度的下降,其抑制率呈剂量效应(P细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显下调(P细胞的生长增殖、侵袭、黏附、迁移能力,其机制可能与其能下调VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平相关。

关键词：去甲斑蝥素人皮肤鳞状细胞癌基质金属蛋白酶侵袭转移

去甲斑蝥素诱导人皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡作用

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中药新药与临床药理 2017年第3期28卷 283-286页

作者：陈杰刘新光涂植光重庆医科大学检验医学院重庆400016 广东医科大学衰老研究所广东东莞523808

目的探讨去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)诱导人皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡作用及其相关分子机制。方法体外培养A431细胞,分为对照组和NCTD低、高剂量组(20,40μmol·L^(-1))。采用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;Annexin V/PI染色法... 详细信息

目的探讨去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)诱导人皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡作用及其相关分子机制。方法体外培养A431细胞,分为对照组和NCTD低、高剂量组(20,40μmol·L^(-1))。采用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量、线粒体膜电位(MMP)变化、Caspase-3及Caspase-9酶活性变化;Western Blot法检测对细胞Bcl-2及Bax蛋白表达水平的影响。结果采用NTCD处理A431细胞48 h,与对照组相比,NCTD低、高剂量组均能抑制细胞增殖能力(P细胞凋亡(P细胞内的ROS水平(P细胞MMP(P细胞的Caspase-3及Caspase-9酶活性。结论 NCTD可能通过提高细胞内ROS水平的途径诱导A431细胞发生凋亡。

关键词：去甲斑蝥素人皮肤鳞状细胞癌细胞内活性氧凋亡 Bcl-2

KLF9对人皮肤鳞状细胞癌的作用及机制初探

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KLF9对人皮肤鳞状细胞癌的作用及机制初探

作者：李欣苏州大学

学位级别：硕士

目的:1.观察KLF9在人皮肤鳞癌A431细胞的表达情况;2.研究KLF9对人皮肤鳞癌细胞的生物学功能以及放射敏感性的影响;3.初步探究KLF9影响人皮肤鳞癌细胞的放射敏感性的机制。方法:1.首先利用western blot实验鉴定人皮肤鳞癌A431细胞中KLF9... 详细信息

目的:1.观察KLF9在人皮肤鳞癌A431细胞的表达情况;2.研究KLF9对人皮肤鳞癌细胞的生物学功能以及放射敏感性的影响;3.初步探究KLF9影响人皮肤鳞癌细胞的放射敏感性的机制。方法:1.首先利用western blot实验鉴定人皮肤鳞癌A431细胞中KLF9的表达。2.使用慢病毒感染的方式构建稳定过表达KLF9的人皮肤鳞癌A431细胞株,并采用western blot法验证过表达KLF9的A431细胞株构建成功;对A431组、A431-LV-NC组和A431-LV-KLF9组细胞进行克隆形成实验、CCK-8实验、凋亡实验、周期实验探究KLF9对人皮肤鳞癌的生物学作用的影响;3.对A431-LV-NC组和A431-LV-KLF9组细胞进行不同剂量辐照后的CCK-8实验、凋亡实验、周期实验、western blot实验检测DNA损伤蛋白γ-H2AX表达情况,探究KLF9对人皮肤鳞癌放射敏感性的影响。4.利用western blot实验明确经6Gy辐射后过表达KLF9对人皮肤鳞癌细胞中p53蛋白表达水平的影响;我们使用p53蛋白抑制剂Pifithrin-α预处理人皮肤鳞癌A431细胞下调p53蛋白的表达,采取western blot实验检测KLF9、p53蛋白的表达情况验证p53下调成功后,我们进行克隆形成实验、细胞凋亡实验探究抑制p53蛋白的表达水平是否可以逆转KLF9的放射增敏作用。结果:*** blot实验显示KLF9在人皮肤鳞癌A431细胞的表达显著低于HaCaT细胞;2.对于 A431-LV-KLF9 组和 A431-LV-NC 组,western blot 实验检测其 KLF9 的表达情况,发现A431-LV-KLF9组中KLF9蛋白表达显著升高;对A431组、A431-LV-NC组和A431-LV-KLF9组细胞进行克隆形成实验、CCK-8实验、凋亡实验、周期实验,结果发现:相对于A431组和A431-LV-NC组,A431-LV-KLF9组的集落形成数量更少,OD值更低,细胞凋亡率更高,但处于G0/G1期、S期、G2/M期的细胞比率无显著差异。3.采用不同辐射剂量对A431-LV-NC组和A431-LV-KLF9组细胞进行辐射处理,进行克隆形成实验、CCK-8实验,结果发现:与对照组相比,A431-LV-KLF9组的细胞存活率显著降低,Dq更低,即细胞损伤修复能力更弱,然后我们对这两组细胞辐照后的细胞凋亡、DNA损伤蛋白γ-H2AX表达情况以及细胞周期进行了相应的实验,细胞凋亡实验发现A431-LV-KLF9组的细胞凋亡率明显高与对照组,western blot实验发现A431-LV-KLF9组γ-H2AX蛋白表达水平高于A431-LV-NC组,细胞周期实验发现A431-LV-KLF9组的G0/G1期细胞比例更高,S期细胞比例更低。4.将A431-LV-NC组和A431-LV-KLF9组细胞进行6Gy辐射,发现辐射12h、48h后A431-LV-KLF9组中p53蛋白表达量较A431-LV-NC组更高;使用不同浓度的p53蛋白抑制剂Pifithrin-α预处理以上两组细胞12h,通过western blot检测p53蛋白、KLF9的表达情况,结果发现10μM浓度时抑制作用更明显,但Pifithrin-α对KLF9的表达无明显影响。为了探索对下调p53蛋白对细胞放射敏感性的影响,我们进行了克隆形成实验、细胞凋亡实验,实验结果显示对比A431-LV-KLF9组,A431-LV-KLF9+Pifithrin-α组的放射敏感性更小,细胞凋亡率更低,说明下调p53部分逆转了过表达KLF9对细胞的放射增敏能力。结论:1.体外实验证明了 KLF9在人皮肤鳞癌中表达下降。***9能够通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,参与人皮肤鳞状细胞癌的生物学行为调节;***9通过调控细胞凋亡、DNA损伤修复以及细胞周期提高人皮肤鳞癌的放射敏感性;***9通过影响p53蛋白表达水平提高A431细胞的放射敏感性

关键词： KLF9 人皮肤鳞状细胞癌放射敏感性 p53

PPP3CB基因在人皮肤鳞状细胞癌Colo16与A431细胞中作用的研究

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PPP3CB基因在人皮肤鳞状细胞癌Colo16与A431细胞中作用的研究

作者：鄢洁青岛大学

学位级别：硕士

背景:皮肤鳞状细胞癌(Cutaneous Squamous Cell Carcinoma,c SCC)是一种常见恶性肿瘤,恶性程度高、易转移,其病因及发病机制尚不明确,因此有必要对c SCC的病因及发病机制进行进一步研究。此前,课题组通过研究发现,PPP3CB基因在c SCC组... 详细信息

背景:皮肤鳞状细胞癌(Cutaneous Squamous Cell Carcinoma,c SCC)是一种常见恶性肿瘤,恶性程度高、易转移,其病因及发病机制尚不明确,因此有必要对c SCC的病因及发病机制进行进一步研究。此前,课题组通过研究发现,PPP3CB基因在c SCC组织较癌旁组织表达降低,因此我们推测其可能为抑癌基因,为进行进一步验证,本研究拟采用基因过表达技术对PPP3CB在人皮肤鳞状细胞癌Colo16与A431细胞中的功能进行初步探索。目的:研究上调PPP3CB基因对人皮肤鳞状细胞癌细胞系Colo16与A431细胞生物学行为的影响。方法:1.构建目的基因过表达慢病毒载体,包装及滴度测定。2.使用过表达慢病毒构建人皮肤鳞状细胞癌细胞系Colo16和A431稳转细胞株。细胞系各分为三组,Colo16-control与A431-control:未转染目的基因空白组;Colo16-Lv-control与A431-Lv-control:转染空载体阴性对照组;Colo16-Lv-PPP3CB与A431-Lv-PPP3CB:转染PPP3CB基因实验组。3.利用qPCR分别检测Colo16与A431细胞系中PPP3CB mRNA的表达。4.利用Western Blot分别检测Colo16与A431细胞系中PPP3CB蛋白表达。5.利用CCK-8试剂盒检测Colo16与A431细胞系细胞增殖能力强弱。6.利用细胞划痕实验分别检测Colo16与A431细胞系细胞迁移能力。7.利用Transwell细胞侵袭实验检测Colo16与A431细胞系细胞侵袭能力。结果:1.过表达慢病毒滴度分别为:LV-=3×10TU/ML,LV-control=1×10TU/ML。慢病毒转染Colo16细胞最佳MOI值为60,最佳嘌呤霉素浓度为2ug/ml;慢病毒转染A431细胞最佳MOI值为120,最佳嘌呤霉素浓度为3ug/ml。***检测Colo16与A431细胞系PPP3CB mRNA表达,阴性对照组较空白组无明显差异(P>0.05),实验组较空白组显著增高(Colo16:F=275.4,P0.05),实验组较空白组显著增高(Colo16:F=49.9,P细胞迁移能力较空白组无明显差异,实验组细胞迁移能力较空白组能力明显减弱(Colo16:F=257.4,P细胞增殖、迁移和侵袭能力,可能发挥抑癌基因的作用,但是其抑癌基因的功能与机制仍需要进一步研究。

关键词：人皮肤鳞状细胞癌 Colo16细胞 A431细胞 PPP3CB

百里香醌调控Caspase-3/Bax/Bcl-2信号通路诱导人皮肤鳞状细胞癌增殖和凋亡的作用机制研究

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中国美容医学 2021年第6期30卷 114-117,163页

作者：周晓谦金星姬杨竹生杨秀敏首都医科大学附属北京同仁医院皮肤科北京100730

目的:探讨百里香醌对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法:将A431细胞分为对照组,低、中、高浓度实验组,对照组采用DMEM培养,而低、中、高浓度实验组分别采用含1、15、30μg/ml百里香醌的DMEM培养。MTT法检A431... 详细信息

目的:探讨百里香醌对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法:将A431细胞分为对照组,低、中、高浓度实验组,对照组采用DMEM培养,而低、中、高浓度实验组分别采用含1、15、30μg/ml百里香醌的DMEM培养。MTT法检A431细胞增殖;台盼蓝法观察A431细胞存活;划痕试验检测各组A431细胞迁移;免疫荧光法检测Bax和Bcl-2蛋白表达;Westernblot检测各组A431细胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cyto C和PARP蛋白表达。结果:百里香醌能有效抑制人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖,且呈浓度及时间依赖性;台盼蓝法显示,百里香醌浓度增加使A431细胞死亡率上升,呈浓度依赖性;与对照组比较,低、中、高浓度实验组A431细胞迁移能力降低;与对照组比较,经百里香醌处理后A431细胞Bax表达增加,Bcl-2表达降低;Western blot检测结果显示,与对照组比较,不同浓度百里香醌处理后A431细胞Bax、cyto-C、caspase-3和PARP表达水平增加,而Bcl-2表达下降。结论:百里香醌具有抑制A431细胞增殖、侵袭以及诱导凋亡的作用,其机制可能是Bax/Bcl-2比值升高,促使释放至胞浆中Cyto C增加,进而激活Caspase-3以及PARP蛋白有关。

关键词：百里香醌人皮肤鳞状细胞癌增殖凋亡迁移

色素上皮衍生因子的分段克隆表达对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的影响

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医学研究生学报 2019年第10期32卷 1014-1018页

作者：张志彬彭胜男刘藕根张颖鹏李春明彭亚婷张淑兰南昌大学第二附属医院皮肤科南昌330006 江西中医药大学科技学院南昌330004

目的有关色素上皮衍生因子(PEDF)短肽对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的研究鲜有报道。文中旨在获得PEDF蛋白的分段克隆表达,并观察对人皮肤鳞状细胞癌细胞系(SCL-1)细胞增殖的影响。方法采用PCR扩增PEDF1、PEDF2和PEDF3目的基因,将回收的... 详细信息

目的有关色素上皮衍生因子(PEDF)短肽对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的研究鲜有报道。文中旨在获得PEDF蛋白的分段克隆表达,并观察对人皮肤鳞状细胞癌细胞系(SCL-1)细胞增殖的影响。方法采用PCR扩增PEDF1、PEDF2和PEDF3目的基因,将回收的片段用NheI/HindⅢ酶切,插入至pET28a(+)载体。连接产物转化入大肠埃希菌BL21并诱导表达,并把融合蛋白的进行分离、纯化。采用CCK-8方法检测24 h、48 h及72 h,不同浓度100、400、800和1000 nmol/L PEDF1、PEDF2和PEDF3肽段对SCL-1细胞增殖影响。结果成功构建PEDF1、PEDF2和PEDF3的原核表达载体,PEDF1、PEDF2和PEDF3融合蛋白,相对分子质量约为18 000、17 000和13 000。24 h时,800 nmol/L、1000 nmol/L浓度PEDF3 SCL-1细胞增殖[(0.61±0.03)、(0.78±0.07)]较0 nmol/L PEDF3(1.00±0.00)明显降低(P细胞增殖呈现显著抑制,并呈剂量依赖性(P细胞增殖[(0.53±0.05)、(0.51±0.05)]较400、0 nmol/L[(0.60±0.05)、(1.00±0.00)]显著降低(P细胞增殖,为进一步筛选PEDF活性功能短肽提供了基础。

关键词：色素上皮衍生因子人皮肤鳞状细胞癌分段克隆细胞增殖

萝卜硫素通过lncRNA MALAT1/TFEB信号通路诱导人皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡机制探讨

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中国美容医学 2021年第2期30卷 99-102页

作者：刘彩玉杨丽亚田冬梅恩施土家族苗族自治州中心医院皮肤性病诊疗中心湖北恩施445000 恩施土家族苗族自治州中心医院皮肤科湖北恩施445000

目的:观察萝卜硫素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡和lncRNA MALAT1/TFEB信号通路的影响。方法:CCK-8法和流式细胞术分析萝卜硫素对A431细胞活力、增殖及凋亡相关指标的影响;倒置显微镜观察A431细胞的克隆数;RT-PCR法分析lncRNA MALAT1 ... 详细信息

目的:观察萝卜硫素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡和lncRNA MALAT1/TFEB信号通路的影响。方法:CCK-8法和流式细胞术分析萝卜硫素对A431细胞活力、增殖及凋亡相关指标的影响;倒置显微镜观察A431细胞的克隆数;RT-PCR法分析lncRNA MALAT1 mRNA表达水平的影响;Western blot方法分析萝卜硫素对A431细胞中凋亡相关蛋白、TFEB及TFEB(Ser142)磷酸化水平的影响。结果:与0μg/ml萝卜硫素组比较,浓度大于10μg/ml萝卜硫素组细胞活力、克隆细胞数、BrdU偶联细胞数、S和G2期细胞数、lncRNA MALAT1 mRNA表达水平均明显降低(P细胞数、Caspase-3/9活性、组蛋白DNA水平、细胞凋亡率及TFEB表达水平显著增高(P细胞中过表达MALAT1,能明显降低萝卜硫素对TFEB(Ser142)磷酸化水平和细胞活力的抑制作用(P细胞凋亡和抑制细胞增殖发挥抗肿瘤作用,其机制可能与抑制lncRNA MALAT1/TFEB信号通路活化有关。

关键词：萝卜硫素人皮肤鳞状细胞癌凋亡增殖 lncRNA MALAT1/TFEB信号通路机制

MiR-197靶向JAK2调节人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖侵袭能力的研究

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中国美容医学 2020年第2期29卷 74-78页

作者：赵思纯首都医科大学附属北京潞河医院整形外科北京101100

目的:探讨miR-197通过调控JAK2对人皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖和侵袭的影响。方法:收集2018年7月-2019年5月于笔者医院经手术切除且被证实为皮肤鳞状细胞癌的组织标本以及对应的癌旁组织标本各40例,RT-qPCR检测miR-197在皮肤鳞状细胞... 详细信息

目的:探讨miR-197通过调控JAK2对人皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖和侵袭的影响。方法:收集2018年7月-2019年5月于笔者医院经手术切除且被证实为皮肤鳞状细胞癌的组织标本以及对应的癌旁组织标本各40例,RT-qPCR检测miR-197在皮肤鳞状细胞癌组织、癌旁组织、人正常皮肤细胞系HaCaT、人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431、A431-miR-197-siRNA和A431-miR-197-siRNA-NC中的表达情况;Western-Blot检测JAK2在各细胞株中的表达;生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-197和JAK2的靶向关系;MTS法检测miR-197对A431增殖能力的影响;Transwell检测miR-197对皮肤鳞状细胞癌细胞侵袭能力的影响;IFA检测miR-197对上皮间质转化(EMT)相关分子N-cadherin表达的影响。结果:miR-197在皮肤鳞状细胞癌组织和皮肤鳞状细胞癌细胞株A431中的表达水平分别高于癌旁组织和人正常皮肤细胞系HaCaT,差异均具有统计学意义(P细胞系A431-miR-197-siRNA中miR-197、JAK2的表达水平均显著下降(P皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭能力,同时抑制N-cadherin的表达水平。结论:下调miR-197能够靶向抑制皮肤鳞状细胞癌中JAK2的表达和降低EMT相关分子N-cadherin的表达,进而抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的EMT进程以及增殖侵袭能力。

关键词： miR-197 人皮肤鳞状细胞癌癌旁组织 HaCaT JAK2 增殖侵袭上皮-间质转化

miR-155在老年皮肤鳞状细胞癌中的表达及作用机制

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中国老年学杂志 2023年第18期43卷 4509-4512页

作者：张红娟陈岩松黎晖刘慧福建医科大学附属南平第一医院皮肤科福建南平353000 福建医科大学附属南平第一医院病理科福建南平353000

目的探讨miR-155在老年皮肤鳞状细胞癌中的表达及作用机制。方法采集42例老年皮肤鳞状细胞癌患者皮肤鳞状细胞癌组织,正常皮肤组织20例为对照,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织标本中miR-155表达水平。筛选miR-155的下游靶点... 详细信息

目的探讨miR-155在老年皮肤鳞状细胞癌中的表达及作用机制。方法采集42例老年皮肤鳞状细胞癌患者皮肤鳞状细胞癌组织,正常皮肤组织20例为对照,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织标本中miR-155表达水平。筛选miR-155的下游靶点,使用脂质体2000向人皮肤鳞状细胞癌细胞系SCL-1中转染miR-155 inhibitor、miR-155 mimics,检测蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)、蛋白激酶B(AKT)及AKT下游潜在基因表达水平。Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、细胞增殖因子(Ki-67)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达水平。结果皮肤鳞状细胞癌组织中miR-155表达水平明显高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(P皮肤鳞状细胞诱导培养第21天,miR-155抑制组CyclinD1、Ki-67蛋白表达水平明显低于对照组,Caspase-3蛋白表达水平明显高于对照组(P皮肤鳞状细胞癌患者miR-155高表达,下调miR-155表达可通过PTEN/AKT/GSK3β信号通路抑制人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

关键词：人皮肤鳞状细胞癌 miR-155 蛋白酪氨酸磷酸酶蛋白激酶B