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激活素A在人皮肤微血管内皮细胞中的表达及对其增殖的抑制作用

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中国实验诊断学 2009年第2期13卷 164-166页

作者：裴颖左玲栾永昕苏冠方吉林大学第二医院眼科吉林长春130041 解放军二零八医院神经外科

目的将真核表达质粒pEGFP-ActivinA以脂质体介导转染人皮肤微血管内皮细胞,观察能否在细胞内表达,为进一步研究其作用奠定基础。方法pEGFP-ActivinA扩增和酶切鉴定;原代培养人皮肤微血管内皮细胞,以脂质体介导将真核表达质粒pEGFP-Activ... 详细信息

目的将真核表达质粒pEGFP-ActivinA以脂质体介导转染人皮肤微血管内皮细胞,观察能否在细胞内表达,为进一步研究其作用奠定基础。方法pEGFP-ActivinA扩增和酶切鉴定;原代培养人皮肤微血管内皮细胞,以脂质体介导将真核表达质粒pEGFP-ActivinA转染该细胞,于一定时间内在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,MTT法检测基因转染对人皮肤微血管内皮细胞增殖的影响。结果转染后48h在荧光显微镜下人皮肤微血管内皮细胞可见发出绿色荧光,72h发出绿色荧光的细胞增多,强度增强;转染后48h与72h,转染组与对照组比较细胞增殖有明显的抑制,差异有显著性(P人皮肤微血管内皮细胞,并在细胞内有较高表达,pEGFP-ActivinA基因转染抑制了人皮肤微血管内皮细胞的增殖。

关键词：激活素A 基因转染人皮肤微血管内皮细胞

肌肽对脂多糖诱导的人皮肤微血管内皮细胞氧化应激及促炎症反应的影响

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中国皮肤性病学杂志 2015年第6期29卷 559-561页

作者：李敏秦本露明迪南华亮段得鉴十堰市太和医院皮肤科湖北十堰442000

目的探讨肌肽(carnosine)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人皮肤微血管内皮细胞(human dermal microvessel endothelial cells,HDMEC)氧化应激及促炎症反应的影响。方法建立脂多糖(1μg/m L)诱导的人皮肤微血管内皮细胞损伤模型,MTT法检测其细胞活性,荧光法测定细胞内活性氧族物质(ROS),试剂盒检测一氧化氮(NO)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)、3-硝基酪氨酸(3-NT)、白介素(IL)-1β,IL-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)酶活性。结果肌肽预孵育或与脂多糖处理对人皮肤微血管内皮细胞细胞活力无明显影响,脂多糖增加胞内ROS和胞外上清液NO水平,增加胞内MDA,8-OHDG及3-NT含量,增加促炎症因子IL-1β,IL-6及TNF-α产生,降低SOD和GSH-Px酶活性,而肌肽可以恢复脂多糖所致的上述效应。结论肌肽对脂多糖所致的人皮肤微血管内皮细胞损伤具有保护作用。

关键词：肌肽脂多糖人皮肤微血管内皮细胞氧化应激促炎症反应

不同基底硬度对人皮肤微血管内皮细胞生物学行为的影响

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不同基底硬度对人皮肤微血管内皮细胞生物学行为的影响

作者：李亮海南医学院

学位级别：硕士

目的:在体内,血管内皮细胞的正常生理功能受到血管壁基底应力和血流剪切力等力学刺激的调控,而目前血管内皮细胞的体外培养大多数是在传统组织培养塑料板（tissue culture plate,TCP）上,这与体内血管内皮细胞所处血管壁硬度存在一定的... 详细信息

目的:在体内,血管内皮细胞的正常生理功能受到血管壁基底应力和血流剪切力等力学刺激的调控,而目前血管内皮细胞的体外培养大多数是在传统组织培养塑料板（tissue culture plate,TCP）上,这与体内血管内皮细胞所处血管壁硬度存在一定的差异,可能会对细胞正常生理功能产生影响。因此本研究从生物力学角度出发,利用不同基底硬度聚丙烯酰胺水凝胶来模拟生理状态下血管壁硬度,以传统组织培养平板作为对照,探究不同基底硬度对人皮肤微血管内皮细胞（Human Dermal Microvascular Endothelial Cells,HDMEC）的伸展、增殖等生物学行为的影响。在此基础上,通过检测与血管内皮细胞正常生理功能相关缝隙连接蛋白和血管内皮特异性糖萼,对比不同基底硬度下HDMEC之间的差异,以期得到HDMEC体外培养较合适的基底硬度。方法:本研究将HDMEC分别培养在基底硬度为4k Pa、25k Pa、50k Pa的水凝胶（hydrogel,GEL）及传统组织培养塑料板（tissue culture plate,TCP）上,利用免疫荧光技术标记HDMEC的细胞骨架微丝蛋白;检测细胞增殖水平。采用western blot和实时荧光定量PCR方法检测缝隙连接蛋白（connexin 40,CX40）表达水平以及用糖萼检测试剂盒检测细胞表面糖萼（glycocalyx）含量。结果:在荧光显微镜下观察,随着基底硬度的增加HDMEC形态逐渐伸展,在TCP上细胞呈梭形且细胞面积最大,在水凝胶上的细胞近似圆形;水凝胶上培养的细胞增殖速率之间无明显差异,但是明显低于TCP;在水凝胶上培养的HDMEC CX40 RNA水平和蛋白表达水平比TCP上高,其中,4k Pa上HDMEC CX40表达最高;通过细胞表面糖萼含量检测发现,水凝胶上培养的细胞表面糖萼含量均高于TCP,在4k Pa时细胞表面糖萼含量最高。结论:基底硬度为4k Pa的水凝胶更适宜作为体外人皮肤微血管内皮细胞的培养。

关键词：基底硬度人皮肤微血管内皮细胞缝隙连接蛋白40 糖萼

Rho/ROCK信号通路在晚期糖基化终产物诱导的人皮肤微血管内皮细胞形态及功能改变中的作用

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Rho/ROCK信号通路在晚期糖基化终产物诱导的人皮肤微血管内皮细胞...

作者：王吉萍南方医科大学

学位级别：硕士

研究目的:本课题拟以人皮肤微血管内皮细胞株(human dermal microvascularendothelial cells,HMVECs)为研究对象,应用细胞生物学、单层内皮细胞通透性的测定、免疫印迹和激光共聚焦显微镜观察等实验方法和技术,观察晚期糖基化终产物(adv... 详细信息

研究目的:本课题拟以人皮肤微血管内皮细胞株(human dermal microvascularendothelial cells,HMVECs)为研究对象,应用细胞生物学、单层内皮细胞通透性的测定、免疫印迹和激光共聚焦显微镜观察等实验方法和技术,观察晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)修饰的人血清白蛋白(humanserum albumin,HSA)对HMVECs骨架纤维状肌动蛋白(filamentous actin,,F-actin)形态和定位的影响,以及对单层细胞通透性的作用;选用RhoA的主导失活或组成型激活的重组腺病毒以及ROCK抑制剂处理细胞,探讨Rho/ROCK通路是否参与了AGE-HSA介导的上述细胞反应;通过免疫印迹检测RhoA和ROCK蛋白及其磷酸化水平的变化,查明RhoA、ROCK的磷酸化激活在其中的作用;为了探讨Rho/ROCK介导AGE-HSA引起内皮细胞形态和功能变化的机制,分别观察了抑制ROCK对p38 MAPK磷酸化水平的影响,以及抑制p38 MAPK磷酸化激活对RhoA、ROCK磷酸化激活的影响。通过上述研究试图阐明AGE-HSA对血管内皮细胞形态和功能的影响以及可能的信号转导通路,为进一步阐明与AGE-HSA相关的糖尿病微血管并发症发生发展的机制提供实验依据,并为其防治提供新的思路和有效手段。研究方法:AGE-HSA由人血清白蛋白与D-葡萄糖共孵育8周制得。体外培养人皮肤微血管内皮细胞株,分别接种于微孔小皿(petri dish)、双层通透的培养皿(transwell)顶层小室微孔膜上(直径6.5 mm,孔径大小0.4μm)和6 cm细胞培养皿上,待细胞长至融合或接近融合后,换无血清培养基继续培养2 h使细胞获得同步生长,然后按实验分组分别处理备用。在各实验分组中,分别用ROCK特异性抑制剂Y-27632、H-1152或p38MPAK丝裂原激活的MAPK通路上游激酶抑制剂SB203580预处理细胞30 min后,即以不同时间或者浓度的AGE-HSA再孵育;另外,用重组腺病毒RhoA N19的无活性型突变体预转染内皮细胞24 h,继以AGE-HSA再孵育;或重组腺病毒RhoA L63的活性突变体单独转染细胞24 h。用免疫荧光染色法、激光共聚焦显微镜观察细胞骨架肌动蛋白F-actin、RhoA及其磷酸化蛋白的结构及分布改变;用免疫印迹法检测phospho-p38,RhoA和ROCK及其磷酸化水平的变化,采用多功能蛋白组学影像系统KODAK2000R直接成像,以ImageJ软件分析各组灰度值,β-actin为内参进行校正,以对照组面积灰度值为100%与实验组进行比较;用FITC荧光标记蛋白漏出法测定单层内皮细胞的通透系数Pa值,实验结果以Pa变化百分比表示,Pa%=(实验样品Pa值/对照样品Pa值)×100。研究结果:***-HSA对HMVECs骨架F-actin形态和单层内皮细胞通透性的影响(1) AGE-HSA对HMVECs细胞骨架F-actin形态的影响AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式引起HMVECs骨架肌动蛋白F-actin结构和分布的改变,未经修饰的人血清白蛋白无此作用;正常细胞的F-actin主要分布在细胞周边,线条光滑,完整连续,界限分明。随着AGE-HSA作用时间或浓度的增加,F-actin变得毛糙不规整,出现锯齿样结构,甚至断裂、变细、崩解消散,F-actin在细胞内弥散分布,由非极性单行排列的肌动蛋白丝组成的应力纤维逐渐增多,细胞变圆、明显回缩,相邻细胞互相解离,细胞间失去正常连接结构。(2) AGE-HSA对HMVECs通透性的影响AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式引起HMVECs通透性的升高。在时间效应组中,HMVECs的通透性随AGE-HSA作用时间的延长显著增高(F=186.746,P＜0.01),当AGE-HSA作用1,2,4,8,12 h时,与对照组相比,HMVECs的通透性分别增至113.97±2.68%,149.31±2.48%,169.76±6.21%,191.32±2.14%,196.14±2.43%,且从2 h起,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05),差异有统计学意义。在剂量效应组中,随着AGE-HSA浓度的增加,HMVECs的通透性显著增加(F=344.582,P＜0.01),对照组内皮细胞的通透性为100%,当AGEs为12.5,25,50,100μg/ml时,Pa与对照组相比分别增至117.95±0.99%,152.15±4.51%,191.32±2.14%,199.23±2.54%,且从12.5μg/ml起

关键词： Rho/Rho激酶信号通路晚期糖基化终产物人皮肤微血管内皮细胞细胞骨架肌动蛋白 p38 MAPK

低氧增加人皮肤微血管内皮细胞系迁移并促进凋亡

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基础医学与临床 2017年第10期37卷 1429-1433页

作者：程科刘洪张矛赵渝罗鸿桂福强重庆医科大学附属第一医院血管外科重庆400016

目的研究低氧环境对人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)迁移、凋亡及相关因子HIF-1α、VEGF、i NOS基因及蛋白表达的影响。方法低氧培养人微血管内皮细胞,分为常氧组(对照组)和低氧组(Co Cl2模拟化学低氧)。CCK-8细胞生存实验确定合适处理浓度... 详细信息

目的研究低氧环境对人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)迁移、凋亡及相关因子HIF-1α、VEGF、i NOS基因及蛋白表达的影响。方法低氧培养人微血管内皮细胞,分为常氧组(对照组)和低氧组(Co Cl2模拟化学低氧)。CCK-8细胞生存实验确定合适处理浓度(200μmol/L Co Cl2),划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞技术观察细胞凋亡;用RT-PCR和Western blot技术检测HIF-1α、VEGF、i NOS mRNA和蛋白表达。结果与常氧组比较,低氧组细胞迁移能力增加(P人皮肤微血管内皮细胞迁移能力,并促进其细胞凋亡,其可能机制与HIF-1α、VEGF、i NOS蛋白表达升高有关。

关键词：低氧低氧诱导因子1α 静脉性溃疡人皮肤微血管内皮细胞

形态学观察晚期糖基化终末产物诱导微血管内皮细胞核因子κB入核及其机制

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中国动脉硬化杂志 2013年第3期21卷 198-202页

作者：吴丽丽王立群王达黄巧冰南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省医学休克微循环重点实验室广东省广州市510515

目的观察晚期糖基化终末产物(AGE)诱导的微血管内皮细胞核因子κB核转位,探讨氧化应激和内质网应激在核因子κB核转位中可能发挥的作用。方法用AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)与人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)在体外共同培养1 h,设立对... 详细信息

目的观察晚期糖基化终末产物(AGE)诱导的微血管内皮细胞核因子κB核转位,探讨氧化应激和内质网应激在核因子κB核转位中可能发挥的作用。方法用AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)与人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)在体外共同培养1 h,设立对照组进行比较,用免疫荧光化学染色示核因子κB的核转位情况;应用活性氧的抑制剂谷胱甘肽(GSH)、NADPH氧化酶(NOX)抑制剂Apocynin、内皮细胞高表达的NOX亚型NOX4的siRNA和内质网应激的标志性蛋白内质网转膜蛋白激酶1α(IRE1α)的siRNA分别预处理细胞后再给予AGE-BSA刺激,观察核因子κB的核转位情况。结果与对照组相比,AGE-BSA可诱导人皮肤微血管内皮细胞核因子κB入核;应用GSH、Apocynin、NOX4 siRNA和IRE1αsiRNA预处理细胞均可抑制核因子κB的入核。结论AGE对核因子κB的移位激活可能通过细胞内的氧化应激和内质网应激途径所介导。

关键词：晚期糖基化终末产物人皮肤微血管内皮细胞核因子κB 氧化应激内质网应激

低氧后处理活化腺苷A2a受体抑制皮瓣微血管内皮细胞凋亡

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中国美容医学 2017年第3期26卷 70-74页

作者：曹建坤林煌李斌斌崔超李文志首都医科大学附属北京安贞医院·北京市心肺血管疾病研究所整形美容与激光医学科

目的：本研究致力于探求腺苷A2a在低氧后处理抗凋亡中的作用。方法：从人上睑皮肤组织中分离培养原代人皮肤微血管内皮细胞,经6h低氧培养后,置于正常氧环境培养12h;或者经过5min常氧/5min低氧,3次循环,即低氧后处理,之后再常氧培养11.5... 详细信息

目的：本研究致力于探求腺苷A2a在低氧后处理抗凋亡中的作用。方法：从人上睑皮肤组织中分离培养原代人皮肤微血管内皮细胞,经6h低氧培养后,置于正常氧环境培养12h;或者经过5min常氧/5min低氧,3次循环,即低氧后处理,之后再常氧培养11.5h。结果：细胞凋亡比例和细胞凋亡相关蛋白（Bax/Bcl-2和caspase-3）表达量增高,均证明低氧/复氧可引起严重的损伤（P〈0.05）。低氧后处理和选择性A2a受体激动剂——CGS-21680均可降低前两者（P〈0.05）。同时,低氧后处理和CGS-21680均明显活化了腺苷A2a受体（P〈0.05）。数据分析显示,凋亡的增加量与A2a受体蛋白的表达增加量呈显著负相关（γ^2=0.8177,P〈0.0001）。结论：低氧后处理通过活化皮肤微血管内皮细胞表面的A2a受体发挥抑制凋亡的作用。

关键词：游离皮瓣人皮肤微血管内皮细胞凋亡低氧后处理腺苷A2a受体

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脂肪间充质干细胞治疗糖尿病皮肤溃疡的研究

医学研究前沿

医学研究前沿 2024年第8期2卷 4-6页

作者：刘井双张奎全美玲成永霞刘贵波牡丹江医科大学基础医学院解剖教研室黑龙江牡丹江157011 牡丹江心血管病医院黑龙江牡丹江157011 牡丹江医科大学基础医学院病理教研室黑龙江牡丹江157011

目的观察脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)治疗糖尿病皮肤溃疡(diabetic cuta⁃neous ulcers,DCU)的作用。方法将ADSCs与人皮肤微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothe⁃lial cells,HDMVECs)于高糖培养基中共培养,观察不同血糖浓度下HDMVECs的增殖、凋亡、迁移及成管能力。结果高糖促进HDMVECs凋亡,抑制其增殖及血管再生;ADSCs共培养HDMVECs后,恢复高糖下HDMVECs的增殖及血管再生能力。结论ADSCs在体外高血糖环境下共培养HDMVECs可以促进皮肤血管内皮的增殖能力和成管化,促进微血管形成改善微循环从而加速糖尿病皮肤溃疡愈合。

关键词：脂肪间充质干细胞人皮肤微血管内皮细胞糖尿病皮肤溃疡高糖