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人牙髓干细胞与β-TCP复合后的体内外实验研究

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人牙髓干细胞与β-TCP复合后的体内外实验研究

miR-320c对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会

作者：李昊妍梁景平张秀丽殷德民上海交通大学医学院附属第九人民医院牙体牙髓科上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所

目的:观察人牙髓干细胞与β-TCP复合培养后生物学特性变化及形成新生组织的情况。方法:将人牙髓干细胞与β-TCP混合体外培养3天、7天、14天后用扫描电镜观察细胞生长及分泌细胞外基质情况。据此将人牙髓干细胞与β-TCP在体外培养3天后... 详细信息

目的:观察人牙髓干细胞与β-TCP复合培养后生物学特性变化及形成新生组织的情况。方法:将人牙髓干细胞与β-TCP混合体外培养3天、7天、14天后用扫描电镜观察细胞生长及分泌细胞外基质情况。据此将人牙髓干细胞与β-TCP在体外培养3天后植入裸鼠体内,在4周和12周时取材,进行HE、Manory染色及免疫组化染色。结果:人牙髓干细胞与β-TCP体外培养后细胞生长良好,3天后即可见细胞附着于支架材料表面及孔隙内,并有伪足伸出,但还未见细胞外基质的分泌。2周时,细胞已形成团片,且不同孔隙中的细胞团相融合,分泌大量细胞外基质。裸鼠体内培养12周后可见血管和新生组织,DSP和Ⅰ型胶原染色阳性。结论:人牙髓干细胞与β-TCP复合后生长状况良好,细胞外基质分泌旺盛,在体内可形成新生组织。

关键词：人牙髓干细胞 β-TCP DSP

来源： cnki会议评论

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miR-320c对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

作者：苗佳楠华北理工大学

学位级别：硕士

目的本课题旨在研究mi R-320c对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,h DPSCs)成骨、成脂能力以及增殖的影响,并分析对于成骨、成脂分化相关基因的影响,为h DPSCs在再生医学中的应用提供理论基础。方法1使用酶消化组织块法培养... 详细信息

目的本课题旨在研究mi R-320c对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,h DPSCs)成骨、成脂能力以及增殖的影响,并分析对于成骨、成脂分化相关基因的影响,为h DPSCs在再生医学中的应用提供理论基础。方法1使用酶消化组织块法培养原代牙髓组织来源细胞,并使用流式细胞仪鉴定。2 mi R-320c mimic及其阴性对照NC(mi R-NC组)分别瞬时转染h DPSCs,24h后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测两组细胞增殖能力;RT-q PCR验证mi R-320c在h DPSCs中的表达水平,分别检测两组成骨分化相关基因OCN及Runx2 m RNA表达水平,成脂分化相关基因PPAR-γm RNA的基因表达水平;茜素红染色分别检测两组成骨分化能力;油红O染色分别检测两组成脂分化能力。3 mi R-320c inhibitor及其阴性对照NC(mi R-INNC组)分别瞬时转染h DPSCs,24h后采用CCK-8法分别检测两组细胞增殖能力;RT-q PCR验证mi R-320c在h DPSCs中的表达水平,分别检测两组成骨分化相关基因OCN及Runx2 m RNA表达水平,成脂分化相关基因PPAR-γm RNA的基因表达水平;茜素红染色检测两组成骨分化的能力;油红O染色检测两组成脂分化的能力。结果1通过流式细胞术鉴定经酶消化组织块法培养的细胞为CD34-,CD44+,Strol-1+,符合间充质干细胞表面抗原特征,即所得细胞为h DPSCs。2成功在h DPSCs内过表达或敲低mi R-320c(P细胞的成骨分化能力。5油红O染色结果显示,与mi R-NC组相比,过表达mi R-320c的h DPSCs成脂能力增强;RT-q PCR结果显示成脂分化相关基因PPAR-γ的m RNA表达水平均有显著上升趋势(P细胞的成脂分化能力。结论1应用酶消化组织块法从人牙髓组织中分离培养的细胞为h DPSCs。2 mi R-320c可负向调控h DPSCs增殖能力。3 mi R-320c可能通过负向调控成骨分化基因OCN及Runx2 m RNAs的水平,负向调控h DPSCs成骨分化能力。4 mi R-320c可能通过正向调控成脂分化基因PPAR-γm RNA的水平,正向调控h DPSCs成脂分化能力。

关键词：人牙髓干细胞 miR-320c 增殖成骨分化成脂分化

Stathmin通过Shh信号通路调控人牙髓干细胞增殖与成骨/成牙向分化机制的研究

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Stathmin通过Shh信号通路调控人牙髓干细胞增殖与成骨/成牙向分化...

作者：于海悦南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景和目的牙髓干细胞被认为是牙齿再生工程的关键细胞之一,当牙齿受到龋损、磨损、外伤等刺激时,牙髓内的牙髓干细胞被激活并诱导分化为成牙本质样细胞,形成修复性牙本质从而阻止病变进展保存牙髓活力。牙髓组织的这种修复潜能为... 详细信息

研究背景和目的牙髓干细胞被认为是牙齿再生工程的关键细胞之一,当牙齿受到龋损、磨损、外伤等刺激时,牙髓内的牙髓干细胞被激活并诱导分化为成牙本质样细胞,形成修复性牙本质从而阻止病变进展保存牙髓活力。牙髓组织的这种修复潜能为研究牙髓牙本质复合体再生提供了可靠的生物学基础。因此,深入了解牙髓干细胞的成牙本质向分化机制,寻找参与过程的关键分子对于形成生理性牙髓牙本质复合体与构建组织工程牙齿具有重要意义。微管蛋白Stathmin是本研究团队前期筛选出的在正常和深龋牙髓干细胞中表达存在差异的蛋白,与骨组织矿化关系密切。Sonic hedgehog(Shh)作为调节牙齿发育的经典信号通路,在牙髓干细胞成牙本质向分化及增殖中发挥重要作用。目前尚未有研究报道Stathmin在人牙髓干细胞增殖与成牙本质向分化中发挥的作用及作用机制,本研究旨在明确Stathmin在调节人牙髓干细胞的增殖与成骨/成牙向分化中发挥的作用,探究Shh信号通路是否参与Stathmin对人牙髓干细胞增殖与成骨/成牙向分化的调控。材料与方法采用原代组织块酶消化法分离培养人牙髓干细胞,并对其表面分子标志物与多向分化潜能进行鉴定。利用细胞免疫荧光确定Stathmin在人牙髓干细胞的定位,利用慢病毒载体构建抑制Stathmin表达的细胞模型,Realtime PCR与Western blot检测抑制Stathmin表达后人牙髓干细胞增殖与成骨/成牙向分化的改变及Shh与其下游信号分子的表达变化。CCK8法与流式细胞术检测人牙髓干细胞增殖能力与细胞周期的改变。Realtime PCR与Western blot检测在抑制Stathmin表达的人牙髓干细胞内加入激活剂purmorphamine后Shh信号通路激活效率与人牙髓干细胞成骨/成牙向分化及增殖能力的改变。结果本实验成功分离培养出人牙髓干细胞,流式细胞检测细胞表面间充质干细胞分子标志物CD29、CD44、CD90、CD105阳性表达率分别为99.84%、99.82%、99.72%、100%;造血干细胞分子标志物CD31、CD45阳性表达率分别为0.07%、0.23%。细胞具有成骨、成脂、成软骨多向分化潜能。细胞免疫荧光结果显示Stathmin主要表达于人牙髓干细胞细胞质和细胞膜内。通过Realtime PCR、Western blot验证成功构建shRNA-Stathmin慢病毒载体;shRNA-Stathmin组矿化诱导14d后矿化结节生成能力与ALP、BSP、OCN、DSPPmRNA表达量较shRNA-Ctr1组明显降低;CCK8法与流式细胞术测得shRNA-Stathmin组细胞增殖能力较shRNA-Ctrl组明显降低。shRNA-Stathmin组Shh及其下游信号通路分子PTCH1、SMO、GLI1mRNA与蛋白表达量较shRNA-Ctr1组明显降低。在shRNA-Stathmin组人牙髓干细胞中加入激活剂purmorphamine后激活Shh信号通路,Realtime PCR、Western blot检测shANA-Stathmin+PM组PTCH1、SMO、GLI1表达量较shRNA-Stathmin组显著增加。shRNA-Stathmin+PM组矿化诱导14d后成骨/成牙向分化相关基因ALP、BSP、OCN、DSPPmRNA表达量较shRNA-Stathmin组明显升高;CCK8法与流式细胞术测得shRNA-Stathmin+PM组细胞增殖能力较shRNA-Stathmin组明显增加。结论本实验在体外成功分离培养人牙髓干细胞,经鉴定为间充质来源,且具有克隆形成能力及成骨、成脂、成软骨多向分化能力。Stathmin对于维持人牙髓干细胞增殖与成骨/成牙向分化有正向调控作用。Stathmin可能通过参与Shh信号通路调节人牙髓干细胞的增殖与成骨/成牙向分化。

关键词：人牙髓干细胞 Stathmin Shh信号通路细胞增殖成骨/成牙向分化

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人牙髓干细胞培养及其细胞表型的分析研究

临床口腔医学杂志 2005年第1期21卷 23-25页

作者：王亦菁金岩史俊南贺慧霞杨锐周泽渊王彦亮第四军医大学口腔医学院陕西西安710032

目的 :分离培养来源于人体牙髓组织的干细胞并对其细胞表型进行分析。方法 :采用胶原酶消化法获得人牙髓组织的单细胞悬液 ,14d后挑取细胞克隆传代培养 ,随机选取 2株细胞克隆扩大培养 ,以骨髓间充质干细胞为参照 ,利用免疫组化方法通... 详细信息

目的 :分离培养来源于人体牙髓组织的干细胞并对其细胞表型进行分析。方法 :采用胶原酶消化法获得人牙髓组织的单细胞悬液 ,14d后挑取细胞克隆传代培养 ,随机选取 2株细胞克隆扩大培养 ,以骨髓间充质干细胞为参照 ,利用免疫组化方法通过与外胚间充质干细胞的比较对其表型进行分析。结果 :人的牙髓干细胞呈集落状生长 ,有细胞克隆形成 ,细胞表达多种细胞表面标志。结论 :人牙髓组织中存在有呈克隆样生长的成体干细胞 ,细胞表型呈现多样性。

关键词：人牙髓干细胞克隆化细胞表型外胚间充质干细胞

人牙髓干细胞在钛金属表面向成骨细胞样细胞分化的实验研究

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北京口腔医学 2015年第5期23卷 249-253页

作者：张晓艳李小彤曾祥龙北京首都医科大学口腔医学院正畸科 100050 北京大学口腔医学院正畸科

目的探讨矿化液诱导条件下人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)在钛金属表面向成骨细胞样细胞分化的潜力。方法将HDPSCs接种于钛金属板表面,于第3、7d时观察其增殖状态。将HDPSCs接种于钛金属板表面进行矿化液诱导,于诱... 详细信息

目的探讨矿化液诱导条件下人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)在钛金属表面向成骨细胞样细胞分化的潜力。方法将HDPSCs接种于钛金属板表面,于第3、7d时观察其增殖状态。将HDPSCs接种于钛金属板表面进行矿化液诱导,于诱导的第0、3、5、7、14、21、28d时,采用RT-PCR检测其牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)和骨钙素(OCN)的基因表达。Western印迹分析、免疫荧光检测BSP及OCN蛋白表达。对照组为矿化液诱导培养皿中的HDPSCs,检测指标、方法基本相同,免疫细胞化学染色检测OCN蛋白表达。结果钛金属板上HDPSCs增殖迅速,表现出良好的生物相容性。两组细胞均自诱导第3天ALPmRNA呈高表达、DSPP始终不表达。培养皿组BSP、OCNmRNA于第5天开始表达,并随时间延长而表达增高;钛金属组BSP、OCNmRNA表达于第14天出现第一峰值,随后有所下降,28天再次升高。两组BSP蛋白表达趋势与其RT-PCR结果一致,第5天OCN染色阳性。结论钛金属表面HDPSCs经矿化液诱导向成骨细胞样细胞分化。

关键词：人牙髓干细胞钛金属成骨细胞样细胞

硅酸二钙对人牙髓干细胞增殖及骨向分化的影响

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口腔颌面修复学杂志 2021年第4期22卷 256-261页

作者：刘亚蕊罗倩婷钟文超曹威李传洁黎星阳朱明静吴安桐曾素娟广州医科大学附属口腔医院广州市口腔再生医学基础与应用研究重点实验室广州510182 江门市中心医院(中山大学附属江门医院)口腔颌面外科江门529000

目的:探索硅酸二钙(Dicalcium silicate,C_(2)S)在人牙髓干细胞增殖和成骨向分化能力方面的影响。方法:配制含梯度浓度(1、5、10、50、100μg/mL)的C_(2)S条件培养基,与人牙髓干细胞共培养1、3、5、7天,CCK-8实验及迁移实验分别用于检测... 详细信息

目的:探索硅酸二钙(Dicalcium silicate,C_(2)S)在人牙髓干细胞增殖和成骨向分化能力方面的影响。方法:配制含梯度浓度(1、5、10、50、100μg/mL)的C_(2)S条件培养基,与人牙髓干细胞共培养1、3、5、7天,CCK-8实验及迁移实验分别用于检测C_(2)S对人牙髓干细胞的增殖能力与迁移能力的影响。筛选出最佳浓度为50μg/mL的C_(2)S溶液与人牙髓干细胞共培养,并诱导其骨向分化。通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色及定量试剂盒,茜素红染色及定量分别检测ALP活性与矿化结节沉积,RT-PCR实验与Western Blot实验检测骨向分化相关mRNA与蛋白表达水平来进一步研究人牙髓干细胞在C_(2)S作用下体外骨向分化能力的改变。结果:50 μg/mL的C_(2)S溶液可显著提高人牙髓干细胞的增殖能力、ALP活性与体外矿化能力。同时C2S能促进ALP、RUNX2、OPN的RNA表达水平及蛋白水平的升高。结论:50μg/mL的C_(2)S溶液能够显著提升人牙髓干细胞的增殖能力和体外骨向分化的能力。

关键词：硅酸二钙人牙髓干细胞细胞增殖骨向分化

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一种实验性MTA对人牙髓干细胞分化的影响

临床口腔医学杂志 2021年第7期37卷 400-402页

作者：孙琴吴丽娟华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心湖北武汉430030

目的:探究Neo MTA对人牙髓干细胞的细胞外矿化的影响。方法:将50 mg/mL抗坏血酸,10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠和100 nmol/L地塞米松加入含10%胎牛血清的α-MEM中制备矿化诱导液,在Transwell中放入Neo MTA样本,诱导人牙髓干细胞分化,达到指定... 详细信息

目的:探究Neo MTA对人牙髓干细胞的细胞外矿化的影响。方法:将50 mg/mL抗坏血酸,10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠和100 nmol/L地塞米松加入含10%胎牛血清的α-MEM中制备矿化诱导液,在Transwell中放入Neo MTA样本,诱导人牙髓干细胞分化,达到指定天数后收集细胞,利用衰减全反射-傅立叶变换红外光谱(ATR-FTIR)技术检测细胞外基质形成。结果:与空白对照组相比,Neo MTA组中磷酸盐与胶原酰胺Ⅰ比率较高。结论:Neo MTA可以促进人牙髓干细胞分化过程中细胞外基质的形成。

关键词：矿物三氧化物凝聚体人牙髓干细胞细胞分化

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EPO对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

现代口腔医学杂志 2020年第4期34卷 224-226页

作者：唐莉禹怡君苗雷英江苏南京大学医学院附属口腔医院南京市口腔医院牙体牙髓科210008

目的体外探究促红细胞生成素(EPO)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖及分化的影响。方法体外常规培养hDPSCs后,不同浓度EPO(0、0.1、1、10、20、50 U/ml)刺激hDPSCs,CCK-8法检测细胞增殖能力变化;采用碱性磷酸酶... 详细信息

目的体外探究促红细胞生成素(EPO)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖及分化的影响。方法体外常规培养hDPSCs后,不同浓度EPO(0、0.1、1、10、20、50 U/ml)刺激hDPSCs,CCK-8法检测细胞增殖能力变化;采用碱性磷酸酶(ALP)染色及活性测定、茜素红染色、Real-time PCR来研究EPO对hDPSCs分化的影响。结果10U/ml EPO可以促进hDPSCs的增殖(P<0.05);20U/ml EPO组碱性磷酸酶染色加深,活性提高,钙化结节形成增多;成血管成牙成骨向分化相关基因VEGF、bFGF、DSPP、Runx2、ALP的表达上调(P<0.05)。结论适宜浓度的EPO可以促进hDPSCs的增殖及分化。

关键词：促红细胞生成素人牙髓干细胞增殖分化

骨形态发生蛋白4调节人牙髓干细胞在脱细胞的牙髓基质中促进成骨/成血管分化的研究

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临床医学研究与实践 2021年第19期6卷 9-13页

作者：谭沁曹钰莹王金华重庆医科大学附属口腔医院重庆401147 口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室重庆401147

目的探究骨形态发生蛋白4(BMP4)与脱细胞人牙髓细胞外基质是否共同调节人牙髓干细胞(hDPSCs)介导的成骨/成血管分化。方法从健康的人第三磨牙中分离出牙髓,改良组织块法培养hDPSCs并进行鉴定,用十二烷基硫酸钠(SDS)和Triton X-100制作... 详细信息

目的探究骨形态发生蛋白4(BMP4)与脱细胞人牙髓细胞外基质是否共同调节人牙髓干细胞(hDPSCs)介导的成骨/成血管分化。方法从健康的人第三磨牙中分离出牙髓,改良组织块法培养hDPSCs并进行鉴定,用十二烷基硫酸钠(SDS)和Triton X-100制作脱细胞化细胞外基质(dECM),电子显微镜观察其结构,Cell Counting Kit-8分析细胞增殖生长曲线。使用重组腺病毒BMP4感染hDPSCs。HE和DAPI染色后,当看不到完整的细胞核时,分别在dECM和三维(3D)VitroGel系统中培养细胞,并通过碱性磷酸酶染色(ALP)与实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)评估骨/牙本质/血管生成标记的表达。结果提取hDPSCs并完成鉴定,制作脱细胞牙髓细胞外基质并于镜下观察无细胞核存在。Cell Counting Kit-8分析结果表明,dECM可以支持hDPSCs的生长和增殖且没有明显的细胞毒性。ALP染色结果显示,BMP4和dECM协同促进hDPSCs成骨分化。qRT-PCR结果显示,成骨和成血管细胞基因的表达增加。结论dECM可促进hDPSCs增殖,而BMP4+dECM促进hDPSCs在体外成骨和成血管分化。

关键词：人牙髓干细胞脱细胞牙髓基质骨形态发生蛋白4 成骨/成血管分化