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转化生长因子β1对人牙髓干细胞成纤维向分化的作用

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中国医科大学学报 2018年第5期47卷 398-401,405页

作者：姜力铭宋戈夏商陈旭中国医科大学口腔医学院儿童口腔科辽宁省口腔疾病重点实验室辽宁省口腔疾病转化医学研究中心沈阳110002

目的研究不同浓度转化生长因子β1(TGF-β1)促进人牙髓干细胞(hDPSCs)成纤维分化的作用。方法利用含有不同浓度(1、5、10、20 ng/m L)TGF-β1的细胞培养基培养h DPSCs,分别在第1、3和7天时检测细胞增殖情况;在第7和14天时,采用RT-PC... 详细信息

目的研究不同浓度转化生长因子β1(TGF-β1)促进人牙髓干细胞(hDPSCs)成纤维分化的作用。方法利用含有不同浓度(1、5、10、20 ng/m L)TGF-β1的细胞培养基培养h DPSCs,分别在第1、3和7天时检测细胞增殖情况;在第7和14天时,采用RT-PCR方法检测成纤维相关因子[I型胶原蛋白(Collagen I)、纤连蛋白(Fibronectin)、骨膜蛋白(Periostin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]的表达情况。结果 MTT结果显示,第7天时,TGF-β1(1 ng/mL和5 ng/mL)可明显促进hDPSCs增殖。RT-PCR结果表明:第7d时,1ng/m L组、5 ng/m L组和10 ng/m L组Collagen I的表达水平分别为对照组的8.2倍、9.3倍和8.1倍,α-SMA的表达水平分别为对照组的6.2倍、6.7倍和5.8倍。5 ng/mL和10 ng/mL组的Periostin表达水平相近,约为1 ng/mL和20 ng/mL组的3.2倍和1.8倍(P<0.05)。第14天时,各实验组的成纤维相关因子表达水平均下降,但仍高于对照组。结论 TGF-β1可以促进h DPSCs的成纤维分化,浓度为10ng/mL时效果最明显。

关键词：转化生长因子β1 人牙髓干细胞成纤维分化

模拟微重力对人牙髓干细胞细胞骨架及迁移能力影响的研究

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口腔医学研究 2015年第2期31卷 137-139,143页

作者：吴相周潘爽李艳萍何丽娜张巍巍牛玉梅哈尔滨医科大学口腔医学院牙体牙髓病科黑龙江哈尔滨150001

目的:初步研究模拟微重力(simulated microgravity,SMG)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)细胞骨架及迁移能力影响的信号通路机制。方法:采用酶消化法分离培养hDPSCs,并将其接种于PLGA支架上进行模拟微重力培养及普... 详细信息

目的:初步研究模拟微重力(simulated microgravity,SMG)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)细胞骨架及迁移能力影响的信号通路机制。方法:采用酶消化法分离培养hDPSCs,并将其接种于PLGA支架上进行模拟微重力培养及普通重力培养。72h后收集细胞,行Realtime-PCR检测LARG(leukemia-associated Rho GEF factor)基因的mRNA相对定量表达;拖拽实验检测RhoA-GTP表达情况;western blot检测RhoA及下游信号分子LIMK-P蛋白表达情况。结果:模拟微重力下培养的hDPSCs细胞LARG基因的mRNA表达下调(P人牙髓干细胞细胞骨架的重排,细胞迁移能力的改变可能与RhoA/ROCK信号通路有关。

关键词：人牙髓干细胞模拟微重力 RhoA 迁移

Rho激酶抑制剂Y-27632对人牙髓干细胞增殖能力的影响

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口腔医学研究 2016年第3期32卷 278-281页

作者：于天瑶潘爽何丽娜李艳萍张琳牛玉梅哈尔滨医科大学口腔医学院牙体牙髓病科黑龙江哈尔滨150001

目的:初步研究Rho激酶抑制剂Y-27632对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖能力的影响。方法:采用体外贴壁式培养法培养人牙髓干细胞,应用Rho激酶抑制剂Y-27632,根据培养条件,分为普通培养液培养组(Con)及普通培养液... 详细信息

目的:初步研究Rho激酶抑制剂Y-27632对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖能力的影响。方法:采用体外贴壁式培养法培养人牙髓干细胞,应用Rho激酶抑制剂Y-27632,根据培养条件,分为普通培养液培养组(Con)及普通培养液+抑制剂Y-27632培养组(Con+Y),采用MTT法检测两种培养条件下人牙髓干细胞培养24、48、72、96h细胞活性;采用DAPI染色法及流式细胞定量检测技术(FCM)比较两组在培养48h的细胞数量及细胞周期分布情况。结果:MTT结果显示,实验组hDPSCs细胞增殖曲线较对照组明显上移,且增殖高峰期提前;培养48h,DAPI染色结果显示,实验组细胞总数量明显多于对照组;FCM结果显示,对照组G0/G1期细胞比例为(66.8±6.84)%,S期细胞比例为(25.17±0.62)%,实验组G0/G1期细胞比例为(58.59±1.76)%,S期细胞比例为(31.34±1.16)%,实验组S期细胞比例明显高于对照组(P人牙髓干细胞DNA合成、细胞分裂及增殖。

关键词：人牙髓干细胞 Rho激酶 Y-27632 增殖

不同锌含量Zn/PLGA/HA复合支架对人牙髓干细胞粘附能力影响的体外研究

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口腔医学研究 2018年第2期34卷 169-171页

作者：刘旭妍吴兆玉王冉旭何丽娜潘爽牛玉梅哈尔滨医科大学口腔医学院牙体牙髓病科黑龙江哈尔滨150001

目的:制备含有不同锌含量的Zn/PLGA/HA复合支架并检测其机械性能;探讨不同锌含量的Zn/PLGA/HA复合支架在体外对人牙髓干细胞粘附能力的影响。方法:通过溶液浇铸/粒子沥滤法制备含锌质量分数0.5%、1%及2%的Zn/PLGA/HA复合支架,每组HA含... 详细信息

目的:制备含有不同锌含量的Zn/PLGA/HA复合支架并检测其机械性能;探讨不同锌含量的Zn/PLGA/HA复合支架在体外对人牙髓干细胞粘附能力的影响。方法:通过溶液浇铸/粒子沥滤法制备含锌质量分数0.5%、1%及2%的Zn/PLGA/HA复合支架,每组HA含量均为20%质量分数,对照组为不含锌的20%HA/PLGA支架。使用扫描电镜观察支架的表面形态,电子万能试验机检测支架的拉伸强度。将人牙髓干细胞接种在不同锌含量的Zn/PLGA/HA复合支架上培养,采用DAPI染色细胞计数法检测细胞粘附能力。结果:含锌质量分数1%和2%的Zn/PLGA/HA复合支架组拉伸强度均高于对照组(P牙髓干细胞粘附能力(P人牙髓干细胞粘附具有更好的促进作用,为含锌支架作为支架材料用于组织工程提供了理论基础。

关键词：锌 PLGA HA 人牙髓干细胞组织工程

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低氧对人牙髓干细胞生物学特性的影响

低氧对人牙髓干细胞生物学特性的影响

作者：刘庆娜南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景和目的干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞。2000年,Gronthos等首次发现成人牙髓中存在具备自我更新和多向分化潜能的前体细胞并命名为人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)。牙髓干细胞的发现,为牙... 详细信息

研究背景和目的干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞。2000年,Gronthos等首次发现成人牙髓中存在具备自我更新和多向分化潜能的前体细胞并命名为人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)。牙髓干细胞的发现,为牙髓损伤修复机制的研究提供了一个新的平台,也为牙组织工程学带来了突破性进展。人牙髓干细胞可从患者拔除的第三磨牙或正畸牙中分离培养获得,由于来源于自体细胞,无免疫排斥反应,同时又具有多向分化潜能,可向成牙本质方向分化,使其成为牙组织再生研究的首选细胞。低氧是生命发育及生命体的基本现象,牙髓组织在正常生理状态下的氧体积分数显著低于常氧21%的氧体积分数。同时由于牙髓组织被高度不可让性的牙本质等硬组织包绕,当受到刺激时,血管通透性增加、组织压力上升,可导致低氧的进一步加剧。牙髓干细胞在牙髓组织的损伤修复过程中发挥着重要作用,目前对于其生物学特性的研究多数是在常氧环境下进行的,然而,无论是生理或病理状态,牙髓组织内的氧体积分数均显著低于常氧的氧体积分数,而且大量研究结果表明不同的氧体积分数可显著影响细胞的生物学功能。因此研究低氧环境下牙髓干细胞的生物学特性可为进一步阐明人牙髓干细胞在牙髓损伤修复中的作用及牙组织再生的研究提供重要理论参考。目前有关低氧环境下人牙髓干细胞生物学特性的研究较少,且现有研究结果存在较多差异。本实验旨在研究探讨低氧对人牙髓干细胞的增殖、迁移、成牙本质向分化及促血管生成特性的影响,为进一步阐明人牙髓干细胞在牙髓损伤修复及再生机制中的作用提供重要依据。本论文主要包括以下四章内容：第一章人牙髓干细胞的分离培养与鉴定本章实验利用组织块酶消化法分离培养人牙髓干细胞;流式细胞术检测细胞表面分子标记物;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;多向诱导实验检测细胞多向分化潜能。第二章低氧对人牙髓干细胞增殖、迁移的影响实验分别采用低氧(3%02)和常氧(21%02)培养人牙髓干细胞;流式细胞术检测低氧培养对人牙髓干细胞表面分子标记物、细胞周期分布及凋亡的影响;MTT法检测低氧对人牙髓干细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测低氧对人牙髓干细胞迁移能力的影响。第三章低氧对人牙髓干细胞成牙本质向分化的影响qRT-PCR检测低氧组和常氧组人牙髓干细胞矿化诱导7 d、14 d、21 d后,成牙本质向分化相关基因ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达情况。第四章低氧对人牙髓干细胞表达成血管相关因子的影响qRT-PCR检测对比低氧组和常氧组人牙髓干细胞成血管相关因子VEGF、 SDF-1 mRNA的表达情况,并分别收集低氧组和常氧组人牙髓干细胞24 h、48 h、72 h的培养上清作ELISA检测,比较VEGF在蛋白水平分泌量的变化。材料与方法人牙髓干细胞的分离与培养取南方医科大学南方医院口腔颌面外科门诊18-25岁患者因正畸治疗或阻生需要拔除的完整、健康的第三磨牙和前磨牙(经患者知情同意),组织块酶消化法分离培养人牙髓干细胞。具体操作为：牙齿拔除后立即置于含双抗的DMEM培养液内送实验室(4h内),选用涡轮机牙钻在釉牙骨质界环绕牙颈部磨出一定深度的沟槽后(注意不能穿髓),在超净台内将牙齿沿沟槽劈开,无菌条件下取出牙髓组织(去除根尖孔端约2 mm的牙髓组织),置于含双抗的PBS缓冲液内反复漂洗至少3次,每次漂洗至少1 min。用眼科剪将牙髓组织剪碎为大小约mmx 1 mm的组织块,3 mg/mL Ⅰ型胶原酶37℃消化10-15 min后,加入完全培养基终止消化,800 rpm离心3 min,弃上清,加入少量培养液,轻轻吹打,使细胞悬液与松散组织呈混匀状态,然后移至25 mm2培养瓶内均匀铺开,翻转培养瓶加入3 mL培养液,24 h后翻瓶。每隔3d换液一次。待细胞生长至80%汇合行传代培养。克隆形成实验取第3代对数生长期的细胞,以100/孔的密度接种于6孔板,连续培养14d后,4%多聚甲醛固定,0.1%结晶紫染色,倒置显微镜下观察克隆形成情况(以≥50个细胞为一个克隆)细胞表面分子标记物检测取第3代对数生长期的细胞,将其密度调至1×106/mL后,细胞重悬于预冷的PBS中。分别加入小鼠抗人PE标记的CD29、CD34、CD45、CD90及小鼠抗人FITC标记的CD44抗体,冰上避光敷育1 h。预冷的PBS清洗2次,上流式细胞仪检测。多向分化能力检测取第3代对数生长期的细胞,待细胞生长至80%汇合时,分别加入成骨、成脂、成软骨诱导培养基,每2d换液一次,连续培养21 d,分别使用茜素红、油红O、阿利新蓝染色,倒置显微镜下观察。MTT实验取第3-5代对数生长期的细胞,以2×103/孔的密度接种于96孔板,到达时间监测点时每孔加入20 μL MTT,37℃避光孵育4h;吸去上清液,终

关键词：人牙髓干细胞低氧增殖迁移成牙本质向分化成血管

MS-275对人牙髓干细胞增殖和分化的影响

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MS-275对人牙髓干细胞增殖和分化的影响

作者：马逢乐第四军医大学

学位级别：硕士

近年来,龋病作为临床上的常见病之一,越来越引起人们的关注,龋病的形成主要是由于细菌及其毒性产物侵害牙本质,造成牙体硬组织脱矿,最终形成缺损。而当细菌和其致病因子毒力较强且持续作用时,则会通过牙本质小管导致牙髓组织的损伤。在... 详细信息

近年来,龋病作为临床上的常见病之一,越来越引起人们的关注,龋病的形成主要是由于细菌及其毒性产物侵害牙本质,造成牙体硬组织脱矿,最终形成缺损。而当细菌和其致病因子毒力较强且持续作用时,则会通过牙本质小管导致牙髓组织的损伤。在受到严重刺激后,牙髓中的间充质干细胞即牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)会迁移并黏附到受损组织,在多种因素调控下,向成牙本质样细胞分化并产生牙本质基质,进行组织修复,这为牙齿的修复再生奠定了坚实的细胞生物学基础。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)是一类催化组蛋白去除乙酰化过程的酶类,在调控机体乙酰化水平中发挥重要作用,而机体的乙酰化水平与肿瘤的发生发展有密切联系,而且在干细胞增殖,分化的调控中有重要作用。我们前期研究结果表明,在h DPSCs成骨/成牙分化过程中,HDAC1的基因表达量随时间增加显著下调,提示HDAC1可能参与调控h DPSCs的分化过程。MS-275(Entinostat,SNDX-275)是HDAC1的特异性抑制剂,属于苯甲酰胺类,它可以选择性的抑制第一类HDAC,特别是HDAC1,调控组蛋白的乙酰化水平,从而影响肿瘤相关基因的表达水平,与其他种类的HDACs抑制剂相比,MS-275具有细胞毒性低和抗肿瘤效率高等优点,因此成为临床上一类重要的抗肿瘤药物。MS-275能够通过调控细胞周期蛋白而抑制肿瘤细胞的增殖,同时在胚胎干细胞的成神经分化中发挥重要作用。组织工程技术在医学领域组织器官再生中得到了广泛应用,而各种材料的合理应用成为组织工程技术中重要的环节,目前纳米材料在组织修复再生中应用广泛,而仿生多孔纳米纤维明胶支架材料(nano-fibrous gelatin(NF-gelatin)hybrid scaffolds)是一种新型的三维立体结构的支架材料,在物理结构和化学组成上都与自然形成的牙本质相类似,这种三维结构能够促进干细胞的粘附、增殖、迁移和分化能力,在组织工程应用中有很大前景,因此我们选用该材料进行进一步研究。本课题旨在成功分离、培养人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,h DPSCs)的基础上,通过体内外实验研究MS-275对h DPSCs增殖和分化能力的影响,进一步明确HDAC1在h DPSCs增殖和分化中的作用,为牙齿损伤修复与再生提供理新的思路与实验依据。主要研究成果如下:1.h DPSCs的分离、培养和鉴定我们取18-22周岁年轻患者因正畸或阻生拔除的健康恒牙,用组织块与酶消化联合法分离、培养h DPSCs,再通过有限稀释法挑取单细胞克隆,扩大培养。我们通过流式细胞仪鉴定细胞表面标记物,通过成骨、成脂诱导后茜素红染色和油红O染色检测细胞的多向分化能力,证明我们成功分离和培养出h DPSCs。***-275对体外培养的h DPSCs增殖及分化的研究我们前期研究结果表明,在h DPSCs成骨/成牙分化过程中,HDAC1的基因表达量随时间的增加显著下调,为了进一步探索HDAC1在h DPSCs中的作用,我们选择其特异性抑制剂MS-275作为研究对象。我们选取20μM MS-275、2μM MS-275、0.2μM MS-275诱导二维平面的h DPSCs,通过MTT检测发现:不同浓度的MS-275均对h DPSCs的增殖有抑制作用,且20μM MS-275对细胞有毒性。而经过成骨诱导后,与对照组相比,2μM MS-275、0.2μM MS-275均能促进h DPSCs钙结节的形成和成骨/成牙相关基因和蛋白ALP、DSPP、OCN和BSP的表达,且2μM MS-275促进h DPSCs成骨/成牙向分化的作用更强。***-275对在仿生多孔纳米明胶支架材料上培养的h DPSCs增殖及分化的研究我们将h DPSCs与20μM MS-275、2μM MS-275、0.2μM MS-275处理后的纳米明胶支架材料相复合,通过MTT检测发现:在三维立体环境下,所测不同浓度的MS-275均对h DPSCs的增殖有抑制作用,且20μM MS-275对细胞有毒性。而经过成骨诱导后,2μM MS-275、0.2μM MS-275均能促进h DPSCs钙结节的形成和成骨/成牙相关基因和蛋白ALP、DSPP、OCN、BSP的表达,且2μM MS-275促进h DPSCs成骨/成牙向分化的作用更明显。将h DPSCs与材料复合物进行裸鼠皮下移植结果显示:与对照组比较,HE染色和Masson’s染色表明2μM MS-275能够显著促进材料上胶原纤维的生成,Von Kossa染色显示2μM MS-275能够促进矿化硬组织的形成。X线片及Micro CT三维结构重建及数据分析结果表明2μM MS-275

关键词： HDAC MS-275 仿生多孔纳米明胶支架材料人牙髓干细胞增殖分化

骨形态发生蛋白4调节人牙髓干细胞与脱细胞牙髓基质协同促进牙髓样再生研究

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骨形态发生蛋白4调节人牙髓干细胞与脱细胞牙髓基质协同促进牙髓...

作者：谭沁重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验研究人脱细胞牙髓基质（Decellularized Dental Pulp Extracellular Matrix,dECM）的结构和功能,探究骨形态发生蛋白4（Bone Morphogenetic Protein4,BMP4）能否与dECM共同调节人牙髓干细胞（Human Dental Pulp Stem Cells,hDPSCs）的牙髓样组织再生。方法:体外实验:收集18-22岁临床健康由于正畸或阻生需要拔除的人第三磨牙,改良组织块法培养hDPSCs并进行流式细胞术鉴定;用10%十二烷基硫酸钠（SDS）和Triton X-100制作dECM,H＆E、DAPI染色,电子显微镜观察其结构;Cell Counting Kit-8分析细胞增殖生长曲线。使用重组腺病毒介导的BMP4与GFP转染hDPSCs;分别在dECM、dECM+三维（3D）Vitrogel生物支架中培养。检测不同时间点碱性磷酸酶活性（ALP）,实时聚合酶链反应（RT-PCR）以评估骨/牙本质/血管生成标记相关基因表达。体内实验:BMP4转染hDPSCs并与dECM支架共培养,移植到裸鼠背部,4周后切除背部新生成组织,H＆E染色分析以评估牙髓样组织的形成。结果:成功提取hDPSCs并完成流式细胞术鉴定;制作脱细胞牙髓细胞外基质,并于镜下确定无细胞核存在。CCK-8分析表明dECM可以支持hDPSCs的生长和增殖没有明显的细胞毒性。ALP染色结果显示BMP4+dECM+hDPSCs组染色均强于对照组。RT-PCR结果显示成骨（ALP/DMP1/OPN/DSPP/COL）和成血管（VEGF/OSM）基因的表达增加,体内实验结果显示裸鼠背部形成皮下肿块,H＆E染色观察牙髓样组织形成。结论:dECM促进hDPSCs增殖,而BMP4与dECM协同促进hDPSCs体外成骨和成血管分化,体内形成牙髓样组织。

关键词：人牙髓干细胞脱细胞牙髓基质骨形态发生蛋白4 牙髓样组织再生

重组腺病毒介导的人表皮生长因子基因体外转染人牙髓干细胞的研究

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重组腺病毒介导的人表皮生长因子基因体外转染人牙髓干细胞的研究

作者：鲍艳泸州医学院

学位级别：硕士

目的：本实验将EGF基因CDS片段亚克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1，在体外重组至腺病毒载体pAd/BL-DEST，构建重组腺病毒载体，并转染HEK293细胞进行腺病毒包装，获得重组腺病毒rAd-EGF。将重组腺病毒rAd-EGF在体外感染指数生长期... 详细信息

目的：本实验将EGF基因CDS片段亚克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1，在体外重组至腺病毒载体pAd/BL-DEST，构建重组腺病毒载体，并转染HEK293细胞进行腺病毒包装，获得重组腺病毒rAd-EGF。将重组腺病毒rAd-EGF在体外感染指数生长期人牙髓干细胞，分析人牙髓干细胞被转染后EGF蛋白的表达情况，为后续实验提供材料及数据。方法：在体外用含有10%胎牛血清的DEME培养基传代培养人牙髓干细胞至第三代，镜下观察细胞贴壁及生长情况。双酶切pCR4-TOPO-EGF及腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1，1%琼脂糖凝胶电泳检测后分别回收EGF片段的带和线状pYr-adshuttle-1载体带，连接转化感受态大肠杆菌DH5α，并进行扩增，提取重组质粒pYr-adshuttle-1-EGF，进行酶切鉴定。将鉴定正确的重组质粒采用体外同源重组将EGF表达框亚克隆至腺病毒表达载体pAd/PL-DEST，XbaI酶切重组腺病毒载体pAd-EGF，进行酶切鉴定。用PacI酶切pAd-EGF使重组腺病毒载体线性化后转染包装细胞HEK293，包装成重组腺病毒rAd-EGF，PCR鉴定并测定病毒滴度。感染前24h取指数生长期的人牙髓干细胞根据实验目的将其分为3组：重组腺病毒rAd-EGF感染组、对照腺病毒rAd-NC阴性对照组、空白对照组，当细胞密度达到70%时，感染组和阴性对照组加入100MOI重组腺病毒或对照腺病毒，空白组加等量DEME培养液，置于37℃、5%C02培养箱中培养4小时，更换培养基为含10%胎牛血清的DMEM，培养48h后胰酶消化收集各组细胞进行Western-blot，检测基因转染后各组EGF的蛋白表达差异。结果：人牙髓干细胞在镜下成梭形或多角形，2个不等突起，生长情况良好。 pYr-ads-1-EGF经KpnI、XhoI酶切鉴定分析表明腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1-EGF构建成功。pAd-EGF进行XbaI酶切鉴定和测序鉴定，确定和目的序列一致，腺病毒载体pAd-EGF构建成功。经PCR鉴定，重组腺病毒rAd-EGF包装成功。重组腺病毒rAd-EGF感染DPSC细胞48h后，Western-blot检测各组EGF的蛋白表达，结果显示重组腺病毒rAd-EGF感染组的EGF的蛋白表达水平均显著高于其他两对照组(p人牙髓干细胞至第三代，细胞生长良好，增殖情况正常。酶切鉴定表明成功构建了重组腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1-EGF和重组腺病毒载体pAd-EGF后，采用HEK293细胞进行腺病毒包装，最终获得重组腺病毒rAd-EGF。采用重组腺病毒rAd-EGF成功转人牙髓干细胞后，高表达EGF蛋白。说明腺病毒是一种有效的转染载体，人牙髓干细胞是一种理想的基因载体细胞，腺病毒介导的EGF基因可有效转染人牙髓干细胞。

关键词：人表皮生长因子人牙髓干细胞腺病毒转染

锶磷硅生物陶瓷对人牙髓干细胞增殖和成牙本质、成血管分化的影响

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锶磷硅生物陶瓷对人牙髓干细胞增殖和成牙本质、成血管分化的影响

作者：张一帆上海交通大学

学位级别：硕士

目的:1.以传统支架材料β-磷酸三钙(β-TCP)作为对照,在不添加额外的成牙本质或成血管试剂的条件下,探索锶磷硅复合生物陶瓷材料(SPS)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖活性的影响,筛选出合适的浸提液浓度。2.进一步研究SPS对hDPSCs成牙本质... 详细信息

目的:1.以传统支架材料β-磷酸三钙(β-TCP)作为对照,在不添加额外的成牙本质或成血管试剂的条件下,探索锶磷硅复合生物陶瓷材料(SPS)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖活性的影响,筛选出合适的浸提液浓度。2.进一步研究SPS对hDPSCs成牙本质、成血管性能的促进作用,为牙再生领域寻求有潜力的新型支架材料。方法:1.通过改良组织块法获取人牙髓干细胞原代细胞。2.人牙髓干细胞的传代培养和扩增。***及β-TCP浸提液的制备。***法检测SPS及β-TCP浸提液对hDPSCs增殖作用,进而筛选出适宜浓度。5.通过碱性磷酸酶(ALP)活力的测定检测SPS及β-TCP浸提液对hDPSCsc成牙本质及成血管分化的作用。6.通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RealTime-PCR)检测SPS及β-TCP浸提液对hDPSCs成牙本质及成血管相关基因的表达水平的影响。结果:1.采取组织块法分离培养人牙髓细胞,传代培养至3-5代,能够得到纯度较高的人牙髓干细胞。***生物陶瓷浸提液可促进人牙髓干细胞增殖,25mg/ml、12.5mg/ml、6.25 mg/ml浓度的SPS浸提液培养hDPSCs 7d时增殖显著。***生物陶瓷浸提液可促进人牙髓干细胞早期成牙本质、成血管化。12.5mg/ml SPS生物陶瓷浸提液培养hDPSCs,其ALP定量检测及定性染色在培养10天后开始增高,成牙本质和成血管基因的mRNA表达在早期增高,不呈时间依赖性。结论:12.5mg/ml SPS生物陶瓷浸提液能够明显促进hDPSCs的增殖,提高成牙本质和成血管相关基因的表达,进而促进hDPSCs向成牙本质细胞和血管方向分化。

关键词：锶磷硅生物陶瓷人牙髓干细胞成牙本质分化成血管分化