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胰岛素样生长因子-1基因转染对人牙髓干细胞体外矿化性能的影响

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医学研究生学报 2020年第9期33卷 919-925页

作者：韩璧瑶穆睿朱磊于泓川毕博刘鹃陈博荣亮王玥史小蕾帅逸臧圣奇金磊南方医科大学口腔医学院南京临床医学院(东部战区总医院)口腔科南京:210002

目的目前利用基因转染靶向干预胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达,优化人牙髓干细胞(hDPSCs)体外矿化性能的相关研究报道较少。文中旨在利用基因转染调控hDPSCs中IGF-1的表达,探讨对hDPSCs体外矿化性能的影响。方法首先培养hDPSCs,流式细... 详细信息

目的目前利用基因转染靶向干预胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达,优化人牙髓干细胞(hDPSCs)体外矿化性能的相关研究报道较少。文中旨在利用基因转染调控hDPSCs中IGF-1的表达,探讨对hDPSCs体外矿化性能的影响。方法首先培养hDPSCs,流式细胞仪鉴定细胞表型,并检测其克隆形成能力及多向分化能力。再用IGF-1过表达慢病毒转染hDPSCs获取过表达IGF-1,分为:hDPSCs-1组(hDPSCs未转染)、Con-over组(hDPSCs转染空载体)、IGF-1-over组(hDPSCs转染过表达IGF-1慢病毒)。用IGF-1低表达慢病毒转染hDPSCs获取低表达IGF-1,分为:hDPSCs-2组(hDPSCs未转染)、Con-inhibition组(hDPSCs转染空载体)、IGF-1-inhibition组(hDPSCs转染低表达IGF-1慢病毒)。采用qRT-PCR、Western blot及Elisa评估基因转染对hDPSCs中IGF-1基因、细胞内蛋白以及分泌蛋白表达的影响。采用CCK-8法检测hDPSCs增殖能力变化,通过ALP活性、茜素红染色及基质钙含量检测hDPSCs的矿化性能。最后采用qRT-PCR及Western blot检测成牙及成骨分化关键分子牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素基因、蛋白水平的表达。结果与hDPSCs-1组、Con-over组IGF-1基因、蛋白表达量比较,IGF-1-over组显著升高(P<0.01)。与hDPSCs-2组、Con-inhibition组IGF-1基因、蛋白表达量比较,IGF-1-inhibition组显著降低(P<0.01)。IGF-1-over组较hDPSCs-1组、Con-over组可产生更多矿化结节,染色程度更深,基质钙含量更高(P<0.01)。IGF-1-over组DSPP基因表达(1.32±0.06)较hDPSCs-1组(1.03±0.03)、Con-over组(0.97±0.03)显著升高(P<0.01),骨钙素基因表达亦升高(P<0.05)。IGF-1-inhibition组DSPP基因、蛋白的表达较hDPSCs-2组、Con-inhibition组显著降低(P<0.01),骨钙素蛋白表达亦降低(P<0.05)。结论慢病毒转染可有效干预hDPSCs中IGF-1的表达,过表达IGF-1慢病毒转染可增强hDPSCs的成牙和成骨向分化能力,低表达IGF-1慢病毒转染可抑制hDPSCs的成牙和成骨向分化能力。

关键词：胰岛素样生长因子-1 基因转染人牙髓干细胞矿化

RA、SHH和bFGF体外诱导人牙髓干细胞向神经细胞分化的研究

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牙体牙髓牙周病学杂志 2011年第2期21卷 72-76页

作者：张智慧胡伟平郭阳曹潇方哈尔滨医科大学附属第二医院口腔修复科黑龙江哈尔滨150086

目的:研究体外使用全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,RA)、音猬因子(sonic hedgehog,SHH)、碱性成纤维生长因子(fibroblastgrowth factor-basic,bFGF)体外诱导人牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)分化为神经细胞的可行性,以优化DPSCs向神经细胞分化的诱导条件。方法:从因正畸或阻生拔除的第一前磨牙或第三磨牙中提取牙髓,采用酶消化及过滤法得到单细胞悬液,有限稀释法培养分离的原代DPSCs,并进行克隆化培养,检测STRO-1的表达。将DPSCs分别接种于含有不同浓度诱导液,MTT法检测三种因子对细胞增殖能力的影响,免疫荧光法检测微管相关蛋白(microtubule-associated protein-2,MAP-2)、神经元烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)的表达。透射电镜观察诱导前后细胞超微结构。结果:克隆来源细胞的STRO-1表达阳性。三种因子联合诱导促增殖作用最强,与其他组比较,差异有统计学意义(P细胞,其中以三因子联合诱导组阳性细胞表达率最高,促分化作用均优于其他组。透射电镜观察到神经元样细胞表现。结论:三因子联合可以在体外有效诱导人DPSCs转化为神经细胞。

关键词：人牙髓干细胞全反式维甲酸音猬因子碱性成纤维生长因子分化

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CD146在人牙髓干细胞中表达的研究

口腔医学研究 2016年第2期32卷 122-125页

作者：杨雪超吕孝帅广州医科大学附属口腔医院.广州口腔疾病研究所.口腔医学重点实验室广东广州510140

目的:研究CD146在人牙髓干细胞及其诱导分化过程中的表达情况。方法:体外培养人牙髓干细胞,免疫荧光及流式细胞术检测CD146的表达。矿化诱导人牙髓干细胞分化,检测牙本质唾蛋白的表达,从mRNA及蛋白水平检测诱导过程中CD146的表达。结果... 详细信息

目的:研究CD146在人牙髓干细胞及其诱导分化过程中的表达情况。方法:体外培养人牙髓干细胞,免疫荧光及流式细胞术检测CD146的表达。矿化诱导人牙髓干细胞分化,检测牙本质唾蛋白的表达,从mRNA及蛋白水平检测诱导过程中CD146的表达。结果:免疫荧光及流式细胞术证明人牙髓干细胞中CD146表达阳性。使用矿化诱导液培养人牙髓干细胞,通过检测到牙本质唾蛋白的表达,证明细胞已向成牙本质细胞方向分化;在此诱导过程中,CD146在人牙髓干细胞中的表达逐渐下调。CD146在人牙髓干细胞中有较特异性的表达,有可能作为其特异性标志物。

关键词：人牙髓干细胞 CD146 牙本质唾蛋白

瞬时受体电位M7通道在人牙髓干细胞及牙髓组织中表达的研究

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牙体牙髓牙周病学杂志 2013年第6期23卷 371-375页

作者：徐帅妹崔力吴补领南方医科大学口腔医学院南方医科大学南方医院广东广州510515

目的:检测瞬时受体电位M7通道(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)在人牙髓干细胞(hDPSCs)及牙髓组织的表达。方法:酶消化法分离培养hDPSCs,体外鉴定其表型特点及生物学特性;采用RT-PCR检测TRPM6、TRPM7mRNA在hDPSCs中水平的表达,Western blot检测TRPM7蛋白在hDPSCs中的表达;细胞免疫荧光检测TRPM7在hDPSCs的表达位置,免疫组化法检测TRPM7在牙髓组织中的表达。结果:分离培养的hDPSCs来源于间充质组织并且具有克隆形成和多向分化能力。hDPSCs表达TRPM6和TRPM7mRNA,表达TRPM7蛋白;TRPM7主要表达于hDPSCs的胞膜与胞浆;TRPM7在牙髓组织广泛表达。结论:hDPSCs和牙髓组织均表达TRPM7。

关键词： TRPM7 人牙髓干细胞牙髓组织

载柚皮苷胶原蛋白凝胶对人牙髓干细胞增殖的影响

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口腔医学研究 2019年第6期35卷 541-545页

作者：肖婉鲁潘爽侯婷婷李艳萍何丽娜牛玉梅哈尔滨医科大学附属口腔医院牙体牙髓病科

目的:构建柚皮苷/胶原蛋白凝胶复合体,研究其对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)体外增殖的影响。方法:体外分离并培养hDPSCs,CCK-8实验检测不同浓度的胶原蛋白凝胶对hDPSCs增殖的影响,进而筛选出最佳浓度,并以最佳浓... 详细信息

目的:构建柚皮苷/胶原蛋白凝胶复合体,研究其对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)体外增殖的影响。方法:体外分离并培养hDPSCs,CCK-8实验检测不同浓度的胶原蛋白凝胶对hDPSCs增殖的影响,进而筛选出最佳浓度,并以最佳浓度(1 g/L)胶原蛋白凝胶载不同质量的柚皮苷。通过CCK-8实验检测载柚皮苷胶原蛋白凝胶对hDPSCs增殖的影响。结果: 1 g/L浓度的胶原蛋白凝胶更适合hDPSCs的生长;当柚皮苷与胶原蛋白凝胶质量之比为0.2∶1时能更好地促进hDPSCs的粘附和生长。结论:一定比例的柚皮苷胶原蛋白凝胶与hDPSCs具有良好的生物相容性,可作为一种理想支架材料为hDPCs的生长提供空间。

关键词：人牙髓干细胞柚皮苷胶原蛋白凝胶细胞增殖

黄连素促人牙髓干细胞成骨/成牙本质细胞向分化

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口腔医学研究 2020年第7期36卷 639-643页

作者：马兰禹怡君刘含笑刘超苗雷英南京大学医学院附属口腔医院牙体牙髓科江苏南京210008 南京大学医学院附属口腔医院正畸科江苏南京210008

目的:研究黄连素对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖及成骨/成牙本质细胞向分化的影响,为促进年轻恒牙牙根继续发育提供新思路。方法:分离培养hDPSCs,流式细胞术鉴定细胞表型,诱导染色评估多向分化潜能。用不同浓度黄连素(0、1、3、10、30μmol... 详细信息

目的:研究黄连素对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖及成骨/成牙本质细胞向分化的影响,为促进年轻恒牙牙根继续发育提供新思路。方法:分离培养hDPSCs,流式细胞术鉴定细胞表型,诱导染色评估多向分化潜能。用不同浓度黄连素(0、1、3、10、30μmol/L)刺激hDPSCs,通过CCK-8法、碱性磷酸酶活性检测、q-PCR法检测各组细胞增殖和成骨/成牙本质细胞向分化能力。结果:改良组织块酶消化法成功分离hDPSCs并对其鉴定。CCK-8结果显示培养7 d内,0~10μmol/L浓度的黄连素对hDPSCs增殖无影响,30μmol/L组在第7天时抑制细胞增殖。黄连素浓度为1、3μmol/L时细胞碱性磷酸酶活性显著升高。q-PCR结果也显示黄连素能上调成骨和成牙本质相关基因mRNA表达,且促进效果在浓度为1和3μmol/L时最显著。结论:黄连素在1~3μmol/L浓度范围内能促进hDPSCs成骨/成牙本质细胞向分化。

关键词：黄连素人牙髓干细胞成骨分化成牙本质分化

黄瓜籽正丁醇提取物对人牙髓干细胞增殖及成牙向分化的影响

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口腔医学研究 2018年第4期34卷 380-383页

作者：车静怡李艳萍潘爽何丽娜牛玉梅哈尔滨医科大学口腔医学院牙体牙髓病科黑龙江哈尔滨150001

目的:探讨黄瓜籽正丁醇提取物(n-butanol extract of cucumis sativus seeds,CSB)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖及成牙向分化能力的影响。方法:体外扩增培养hDPSCs,采用细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)法检测CSB对hDPSCs增殖能力的影响;通过碱性磷酸酶(ALP)染色及活性测定、Western blot检测牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)和Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COLⅠ)等矿化相关蛋白的表达水平观察细胞成牙向分化能力的变化。结果:CCK-8结果显示,与对照组相比,100mg/L CSB可显著促进hDPSCs的增殖(P<0.05),500mg/L组则明显抑制hDPSCs的增殖(P<0.05);经矿化诱导后,100mg/L CSB组ALP染色明显加深,活性显著升高(P<0.05);Western blot结果显示100mg/L CSB组DSPP和COLⅠ的表达均高于对照组(P<0.05)。结论:适宜浓度的CSB可促进hDPSCs的增殖及成牙向分化。

关键词：黄瓜籽正丁醇提取物人牙髓干细胞增殖成牙向分化

模拟微重力对人牙髓干细胞在裸鼠体内矿化能力的影响

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口腔医学研究 2015年第3期31卷 234-236,241页

作者：徐丹丹李艳萍潘爽张巍巍何丽娜牛玉梅哈尔滨医科大学口腔医学院牙体牙髓病科黑龙江哈尔滨150001

目的:研究模拟微重力环境对聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架上的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)在裸鼠体内矿化能力的影响。方法:分离、培养hDPSCs并进行鉴定,然后将hDPSCs接种到PLGA支架上培养72h后随机分为两组,普通... 详细信息

目的:研究模拟微重力环境对聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架上的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)在裸鼠体内矿化能力的影响。方法:分离、培养hDPSCs并进行鉴定,然后将hDPSCs接种到PLGA支架上培养72h后随机分为两组,普通重力组和模拟微重力组,经矿化诱导液培养1周后分别将细胞支架复合物移植到裸鼠体内,植入术后4周取材,进行组织学(HE和Vonkossa)和免疫组织化学(DSPP)检测。结果:HE染色均可见有血管生成,Vonkossa染色均为阳性,模拟微重力组DSPP的表达水平明显高于普通重力组(P<0.05)。结论:模拟微重力有利于hDPSCs在裸鼠体内的矿化。

关键词：人牙髓干细胞旋转细胞培养系统支架矿化

载柚皮苷羟基磷灰石胶原支架对人牙髓干细胞体外增殖及成骨向分化的影响

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口腔医学研究 2019年第8期35卷 744-747页

作者：侯婷婷潘爽李艳萍何丽娜肖婉鲁牛玉梅哈尔滨医科大学口腔医院牙体牙髓病科

目的:探讨载柚皮苷羟基磷灰石胶原复合支架对人牙髓干细胞体外增殖以及成骨向分化的影响。方法:体外扩增人牙髓干细胞与复合支架联合培养。采用CCK-8法检测人牙髓干细胞在支架上的增殖能力,通过检测碱性磷酸酶活性、茜素红染色和蛋白质... 详细信息

目的:探讨载柚皮苷羟基磷灰石胶原复合支架对人牙髓干细胞体外增殖以及成骨向分化的影响。方法:体外扩增人牙髓干细胞与复合支架联合培养。采用CCK-8法检测人牙髓干细胞在支架上的增殖能力,通过检测碱性磷酸酶活性、茜素红染色和蛋白质印迹法观察支架对细胞体外成骨向分化能力的影响。结果:载柚皮苷羟基磷灰石胶原复合支架能促进牙髓干细胞增殖(P人牙髓干细胞的增殖能力以及成骨分化的潜能。

关键词：柚皮苷羟基磷灰石胶原支架人牙髓干细胞成骨向分化增殖