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人牙髓干细胞成骨分化前后相关基因的表达分析

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口腔医学研究 2018年第4期34卷 375-379页

作者：林文珍高丽牛晨光胡戌琛苑克勇马瑞黄正蔚上海交通大学医学院附属第九人民医院牙体牙髓病科上海市口腔医学重点实验室/上海市口腔医学研究所国家口腔疾病临床研究中心上海200011

目的:分析人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨诱导后相关基因的表达变化。方法:使用改良组织块法体外培养hDPSCs并检测其多向分化能力。hDPSCs成骨诱导后对其进行基因表达谱芯片技术和实时荧光定量PCR分析相关基因的表达情况。结果:hDPSCs能够进... 详细信息

目的:分析人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨诱导后相关基因的表达变化。方法:使用改良组织块法体外培养hDPSCs并检测其多向分化能力。hDPSCs成骨诱导后对其进行基因表达谱芯片技术和实时荧光定量PCR分析相关基因的表达情况。结果:hDPSCs能够进行成骨细胞和脂肪细胞分化。基因表达谱芯片技术分析得出hDPSCs在成骨诱导前后有1284个基因上调或下调2倍以上。其中,骨调节蛋白(osteomodulin,OMD)基因转录上调约50倍。实时荧光定量PCR显示OMD基因在成骨诱导过程中转录呈逐渐增加趋势。结论:hDPSCs成骨分化涉及多个基因调控。OMD基因也参与其中,其表达变化具有时间规律性,与成骨过程呈正相关。

关键词：人牙髓干细胞成骨分化骨调节蛋白

人牙髓干细胞在不同HA含量的PLGA/HA复合支架材料上的粘附研究

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口腔医学研究 2015年第12期31卷 1171-1173页

作者：王冉旭潘爽何丽娜牛玉梅哈尔滨医科大学口腔医院牙体牙髓科黑龙江哈尔滨150001

目的：构建不同质量构成比的PLGA/HA复合支架并评价材料机械性能;探讨不同比例PLGA/HA复合生物学支架对牙髓干细胞粘附能力的影响。方法：采用溶液浇筑/颗粒沥析技术构建出分别含有10%HA、20%HA及30%HA的PLGA/HA复合支架,对照组采用单纯... 详细信息

目的：构建不同质量构成比的PLGA/HA复合支架并评价材料机械性能;探讨不同比例PLGA/HA复合生物学支架对牙髓干细胞粘附能力的影响。方法：采用溶液浇筑/颗粒沥析技术构建出分别含有10%HA、20%HA及30%HA的PLGA/HA复合支架,对照组采用单纯PLGA支架。应用电子万能测验机检测支架的拉伸强度,扫描电镜观察表面结构。将牙髓干细胞与不同比例的PLGA/HA支架复合培养,应用DAPI染色细胞计数法检测细胞粘附能力。结果：在对3组实验组的拉伸强度测试中,10%HA组拉伸强度最高,20%组次之,两组均高于对照组,而30%HA组拉伸强度低于对照组（P〈0.05）。扫描电镜观察支架表面,显示支架孔径在100-250μm之间,孔隙间连通性良好,孔隙率较高。细胞接种于支架2、6、12h后,荧光染色显示细胞与3种支架紧密贴合,粘附良好,细胞计数结果显示各实验组细胞粘附数量均多于对照组,其中在30%HA组中细胞粘附性能最佳（P〈0.05）。结论：3种不同构成比的HA/PLGA复合支架均为良好的组织工程支架材料,其中10%HA组具有良好的机械性能,30%HA组细胞粘附性能更佳。

关键词： PLGA HA 复合支架人牙髓干细胞组织工程

Hsa＿circ＿0001599通过hnRNPA2B1/ITGα2轴和miR-889-3p/ITGα2轴促进人牙髓干细胞成牙本质向分化的机制研究

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Hsa＿circ＿0001599通过hnRNPA2B1/ITGα2轴和miR-889-3p/ITGα2...

低氧预处理人牙髓干细胞对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经元自噬及ATG7的影响

第十六次全国牙体牙髓病学学术大会

作者：杨叶青曾俊开姜翀陈嘉文郭小兰陈明吴补领南方医科大学口腔医院南方医科大学口腔医学院广东省人民医院南方医科大学深圳口腔医院(坪山)

目的:人牙髓干细胞（Human dental pulp stem cells,hDPSCs）在牙髓再生中起着重要作用。越来越多的研究也证明环状RNA（circular RNAs,circRNAs）在许多间充质干细胞的多向分化中起着关键的调节作用,但具体的功能和机制尚不明确,本文... 详细信息

目的:人牙髓干细胞（Human dental pulp stem cells,hDPSCs）在牙髓再生中起着重要作用。越来越多的研究也证明环状RNA（circular RNAs,circRNAs）在许多间充质干细胞的多向分化中起着关键的调节作用,但具体的功能和机制尚不明确,本文旨在阐明hsairc001599在hDPSCs成牙本质向分化中的潜在分子机制。方法:根据前期实验筛选出hsairc001599,使用qRT-PCR检测hDPSCs和牙髓组织中hsairc001599的表达。通过一系列体外和体内实验研究了hsairc001599对hDPSCs成牙本质向分化的影响。最后,通过western blot、RNA测序、双荧光素酶、RIP、Chirp、MazF、放线菌素D实验和回复实验揭示了hsairc001599的潜在机制。结果:在hDPSCs及牙髓组织中发现hsairc001599表达增加。体外实验证明过表达hsairc001599可激活PI3K/AKT信号通路促进hDPSCs成牙本质向分化,体内裸鼠异位实验也得到同样的结果。在机制上,hsairc001599可以通过竞争性吸附miR-889-3p调控靶基因ITGα2的表达。此外,hsairc001599可能通过与hnRNPA2B1的m6A修饰位点结合后促进其从细胞核到细胞质的易位,增强ITGα2的稳定性,激活PI3K/AKT信号通路,促进hDPSCs成牙本质向分化。结论:hsairc001599的上调通过hsairc001599/miR-889-3p/ITG α 2轴和hsairc001599/hnRNPA2B1/ITGα2轴双通路共同促进hDPSCs成牙本质向分化。这项研究揭示了hsairc001599在成牙本质向分化中的重要作用。因此,hsairc001599可能是hDPSCs牙髓再生医学的有效潜在靶点。

关键词：人牙髓干细胞成牙本质向分化环状非编码RNA PI3K/AKT信号通路异质核核糖核蛋白A2/B1

来源： cnki会议评论

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中国儿童保健杂志 2023年第8期31卷 851-857页

作者：高淑君张浩武沐洋张新月肖培伦王晓莉王凡涛潍坊医学院口腔医学院山东潍坊261053 潍坊医学院医学影像学院山东潍坊261053 潍坊医学院基础医学院解剖学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院附属医院口腔科山东潍坊261053

目的探讨低氧预处理人牙髓干细胞(hDPSCs)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑神经元自噬及ATG7的影响,为hDPSCs临床应用提供理论依据。方法2021年6月-2022年9月选取7日龄SD大鼠72只随机分为假手术组(Sham组)、HIBD组、常氧预处理hDPSCs... 详细信息

目的探讨低氧预处理人牙髓干细胞(hDPSCs)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑神经元自噬及ATG7的影响,为hDPSCs临床应用提供理论依据。方法2021年6月-2022年9月选取7日龄SD大鼠72只随机分为假手术组(Sham组)、HIBD组、常氧预处理hDPSCs组(N-hDPSCs组)及低氧预处理hDPSCs组(H-hDPSCs组)。采用Rice-Vannucci法制备新生大鼠HIBD模型,造模后24h侧脑室移植N-hDPSCs与H-hDPSCs。移植24h后,采用免疫荧光双标染色结合Western Blots检测H-hDPSCs对损伤侧大脑皮层神经元自噬的影响;移植4d,采用苏木素-伊红(hematoxylin and eosin stain,HE)染色法和尼氏染色法观察损伤侧大脑皮层组织病理学变化。结果免疫荧光染色结果示,H-hDPSCs组与N-hDPSCs组大脑皮层神经元LC3-Ⅱ、Beclin-1、ATG7阳性细胞数量显著低于HIBD组,且H-hDPSCs组显著低于N-hDPSCs组(F=326.87、205.87、229.59,P细胞数量显著高于HIBD组,且H-hDPSCs组显著高于N-hDPSCs组(F=124.07,P细胞形态不规则,排列不整齐;N-hDPSCs组和H-hDPSCs组大脑皮层神经细胞形态较规则,排列较整齐;尼氏染色结果示,N-hDPSCs组和H-hDPSCs组大脑皮层神经细胞数均较HIBD组增加,且H-hDPSCs组显著高于N-hDPSCs组(F=312.44,P<0.05)。结论hDPSCs移植可下调HIBD新生大鼠脑神经元自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ、ATG7的表达,上调P62的表达,从而抑制自噬,减轻新生大鼠HIBD,促进脑损伤修复,其中,低氧预处理hDPSCs移植的疗效更优。

关键词：低氧人牙髓干细胞新生大鼠缺氧缺血性脑损伤自噬

人牙髓干细胞成牙本质向分化中关键环状RNA的筛选及功能研究

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人牙髓干细胞成牙本质向分化中关键环状RNA的筛选及功能研究

作者：杨叶青南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景牙髓病和根尖周病是最常见的口腔疾病,通过摘除病变牙髓并用人工合成材料修复组织缺损是目前主要的治疗方法。但这些材料具有局限性,不能完全恢复组织的功能。随着组织工程再生医学的发展,牙髓再生已成为一种理想的治疗方法。... 详细信息

研究背景牙髓病和根尖周病是最常见的口腔疾病,通过摘除病变牙髓并用人工合成材料修复组织缺损是目前主要的治疗方法。但这些材料具有局限性,不能完全恢复组织的功能。随着组织工程再生医学的发展,牙髓再生已成为一种理想的治疗方法。人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)是目前最常用的种子细胞,在牙髓再生中发挥着重要的作用。尽管许多学者已经在研究如何实现hDPSCs成牙本质向分化,但确切的分子机制尚未得到。因此,如果能找到一种新的生物学标志物,揭示hDPSCs成牙本质向分化的分子机制,对牙髓再生有着重要的意义。环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种特殊的非编码RNA,研究发现circRNA不仅分布广泛、保守性高、在组织细胞中特异性表达、还可以调节胚胎干细胞的多能性和分化能力。因此,circRNA被学者们认为是理想的疾病诊断标志物和治疗靶点,有重要的研究意义和临床应用价值。但目前hDPSCs成牙本质向分化过程中circRNA的研究鲜有报道。本课题旨在研究circRNA对hDPSCs成牙本质向分化的作用,为将来牙髓再生提供新思路。研究目的1.明确hDPSCs矿化诱导前后circRNA的表达水平。2.利用生物信息学分析基因芯片结果并构建circRNA-miRNA-mRNA网络图。3.初步探索hsairc001599对hDPSCs成牙本质向分化的影响。材料与方法1.采用改良酶组织块消化法分离培养hDPSCs,并鉴定其生物学特性。2.采用基因芯片技术分析矿化诱导前后hDPSCs中circRNA表达变化水平,通过定量实时聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术对结果进行验证。接着利用生物信息学方法对基因芯片结果进行分析,并构建circRNA-miRNA-mRNA的内源性竞争RNA(competing endogenous RNAs,ceRNA)网络,筛选出在hDPSCs成牙本质向分化过程中的关键circRNA。3.构建hsairc001599 shRNA慢病毒并沉默其表达,同时检测其对hDPSCs成牙本质向分化的能力。结果1.改良酶组织块消化法分离培养出hDPSCs,单克隆实验检测其具有克隆形成能力;CCK8试剂检测其生长状态良好;矿化、成脂及成软骨诱导实验证明其有多向分化能力;流式检测结果示,阳性表达间充质干细胞表面标记物CD29(99.96%),CD44(99.99%),CD90(99.99%)和 Stro-1(18.39%)。2.基因芯片结果筛选出差异表达的187个circRNAs,其中43个上调、144个下调(变化倍数≥1.5或≤-1.5,P细胞通讯、信号转导等多个生物学过程相关,并参与调节了 Wnt、TGF-β等信号通路。ceRNA网络图结果示,差异表达的circRNA与miRNA及成牙本质向分化相关mRNA之间可能存在潜在调控关系。3.成功构建sh-circ1599慢病毒并转染细胞,ALP染色及茜素红染色结果示,矿化诱导7d后,hsairc001599干扰慢病毒组细胞的ALP活性降低、矿化结节形减少。qRT-PCR与Western Blot结果示沉默hsairc001599表达会抑制成牙本质/成骨相关基因牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白(Dentinmatrixprotein,DMP)-1、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)的表达。结论1.本实验从人牙髓组织中经组织块酶消化法分离纯化出的细胞,高表达间充质干细胞表面标记物,证明其为间充质来源。且具有克隆形成能力及多向分化能力,可确定为hDPSC。***成牙本质向分化过程中确实存在着大量circRNA的差异表达。利用生物信息学初步分析示,差异表达的circRNA靶基因参与多种与hDPSCs成牙本质向分化相关的信号通路,并且可能存在circRNA-miRNA-mRNA调控网络。3.沉默hsairc001599表达时,hDPSCs的成牙本质向分化能力受到抑制,证明hsa circ001599可以促进hDPSCs成牙本质向分化。

关键词：人牙髓干细胞环状RNA 成牙本质向分化生物信息学分析

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新型纳米生物陶瓷材料对人牙髓干细胞的影响

新型纳米生物陶瓷材料对人牙髓干细胞的影响

人牙髓干细胞增殖及血管内皮生长因子表达与低氧预处理的关系

2023年中华口腔医学会老年口腔医学专业委员会第十八次...

作者：葛欣婷黄馨慧张宗豪伏炜皓吕红兵福建医科大学附属口腔医院

目的:探究n Root BP根管充填修复糊剂(Enpunuo Putty,nRoot BP)对人牙髓干细胞(Human dental pulp stem cells,hDPSCs)体外黏附、增殖、迁移和分化能力的影响。方法:在nRoot BP和iRoot BP Plus存在下培养72小时,检测hDPSCs的黏附、增殖... 详细信息

目的:探究n Root BP根管充填修复糊剂(Enpunuo Putty,nRoot BP)对人牙髓干细胞(Human dental pulp stem cells,hDPSCs)体外黏附、增殖、迁移和分化能力的影响。方法:在nRoot BP和iRoot BP Plus存在下培养72小时,检测hDPSCs的黏附、增殖、迁移和分化。用免疫荧光罗丹明-鬼笔环肽染色和扫描电镜(scanning electron microscopy SEM)观察细胞黏附。在荧光倒置显微镜下观察细胞密度和迁移区域的变化。应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-timefluorescentquantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测与成牙和成骨分化相关的基因。结果:黏附在nRoot BP和iRoot BP Plus表面的细胞呈现出相似的不规则多边形形态,细胞伸出不规则的伪足黏附在材料上。细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)结果显示,nRoot BP和i Root BP Plus在培养第3天和第5天的活细胞密度低于空白对照组,两组间细胞迁移无显著性差异(p>0.05)。nRoot BP和iRoot BP Plus的细胞迁移能力与对照组相似。nRoot BP和iRoot BP Plus均能增加Runx2基因的表达,但两组间无显著差异。nRoot BP和iRoot BP Plus下调DSPP基因的表达,但差异无统计学意义(p>0.05)。结论:nRoot BP对hDPSCs的增殖有一定的抑制作用,但不影响hDPSCs黏附和迁移。nRoot BP对hDPSCs成骨和成牙分化的影响与iRoot BP Plus相似。

关键词：硅酸钙人牙髓干细胞细胞毒性黏附分化

来源： cnki会议评论

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中国老年学杂志 2015年第22期35卷 6328-6329页

作者：田晓蓓黎婷宋文婷孙晋虎徐州医学院口腔医学院江苏徐州221004

目的探讨人牙髓干细胞(h DPSCs)增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达与低氧预处理的关系。方法收集健康完整恒牙,采用组织块酶消化法培养h DPSCs,取3~5代生长良好的h DPSCs分为低氧组(30 ml/O2)和常氧组(210 ml/O2)培养,采用MMT、qRT-PCR... 详细信息

目的探讨人牙髓干细胞(h DPSCs)增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达与低氧预处理的关系。方法收集健康完整恒牙,采用组织块酶消化法培养h DPSCs,取3~5代生长良好的h DPSCs分为低氧组(30 ml/O2)和常氧组(210 ml/O2)培养,采用MMT、qRT-PCR和ELISA等技术检测细胞增殖、VEGF表达量。结果低氧组培养第2、3天h DPSCs的增殖活性OD值分别为(0.69±0.13)和(0.90±0.22),明显高于常氧组(P0.05);h DPSCs分别培养24、48、72 h后,低氧组细胞形态仍呈长梭形,同常氧组的细胞形态相似,两组细胞活性良好,均未发现有细胞坏死的现象发生;低氧组培养24、48和72 h VEGF mRNA相对表达量分别为(2.47±0.08)、(15.07±2.10)和(4.10±0.12),明显高于常氧组(P<0.05);低氧组培养24、48和72 h VEGF表达量分别为(598.10±43.18)、(674.84±23.32)和(802.31±23.07)pg/ml,明显高于常氧组(P<0.05)。结论低氧预处理能显著促进h DPSCs增殖及VEGF表达,提示低氧预处理可能对h DPSCs体内移植有利。

关键词：人牙髓干细胞低氧预处理血管内皮生长因子细胞增殖

缺氧环境下miR-143-5p/HIF-1α信号轴调控人牙髓干细胞促血管生成潜能的机制研究

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临床误诊误治 2022年第10期35卷 106-112页

作者：孟紫君何璇庞彩凤刘春萍黄春艳陈文霞广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院牙体牙髓科南宁530021

目的探讨氯化钴诱导的化学缺氧对人牙髓干细胞促血管生成潜能的影响及miR-143-5p/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号轴在其中的作用。方法体外分离培养人牙髓干细胞,流式细胞术检测细胞表面标志物。使用含不同浓度氯化钴(0、50、100、200μ... 详细信息

目的探讨氯化钴诱导的化学缺氧对人牙髓干细胞促血管生成潜能的影响及miR-143-5p/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号轴在其中的作用。方法体外分离培养人牙髓干细胞,流式细胞术检测细胞表面标志物。使用含不同浓度氯化钴(0、50、100、200μmol/L)的培养基处理细胞24 h或48 h。通过CCK-8和Transwell小室实验检测缺氧对人牙髓干细胞增殖和迁移的影响;qRT-PCR检测miR-143-5p及HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达;Western Blot检测细胞HIF-1α蛋白表达;ELISA检测培养液上清中VEGF浓度。构建过表达miR-143-5p慢病毒(miR-143-5p mimics)、过表达阴性对照(mimics-NC)、沉默miR-143-5p慢病毒(miR-143-5p inhibitor)、沉默阴性对照(inhibitor-NC)载体转染人牙髓干细胞,qRT-PCR检测miR-143-5p及HIF-1α、VEGF mRNA表达。结果原代培养人牙髓干细胞表面抗原CD29、CD90呈阳性表达,CD34、CD45呈阴性表达。50μmol/L组和100μmol/L组细胞增殖活性高于对照组(P细胞迁移能力均高于对照组,且100μmol/L组和200μmol/L组高于50μmol/L组(P人牙髓干细胞HIF-1α、VEGF mRNA表达水平降低(P人牙髓干细胞HIF-1α和VEGF mRNA表达水平升高(P人牙髓干细胞血管生成潜能,该作用呈浓度依赖性,miR-143-5p/HIF-1α信号轴可能参与调控该作用机制。

关键词：人牙髓干细胞氯化钴缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子 miR-143-5p

前列腺素E1联合碱性成纤维细胞生长因子干预人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的变化

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中国组织工程研究 2020年第25期24卷 4006-4011页

作者：项海东程东梅郭晗高琪河北医科大学第二医院口腔内科河北省石家庄市050000

背景:前列腺素E1及碱性成纤维细胞生长因子可促使人牙髓干细胞增殖,但两者联合应用对人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的影响还未见研究。目的:探究前列腺素E1联合碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的影响。方法:... 详细信息

背景:前列腺素E1及碱性成纤维细胞生长因子可促使人牙髓干细胞增殖,但两者联合应用对人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的影响还未见研究。目的:探究前列腺素E1联合碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的影响。方法:①体外分离培养人牙髓干细胞,经表面标志物检测鉴定后,分别以5,10,20,50,100μg/L前列腺素E1及5,10,20,50,100μg/L碱性成纤维细胞生长因子单独作用于体外培养的人牙髓干细胞,以未加药物处理的细胞作为空白对照组,采用CCK-8法分别在1,2,3 d检测人牙髓干细胞增殖情况,筛选最佳药物作用质量浓度和时间。②将体外培养的人牙髓干细胞分为4组:空白对照组、前列腺素E1组、碱性成纤维细胞生长因子组、前列腺素E1+碱性成纤维细胞生长因子组,采用CCK-8法检测人牙髓干细胞增殖情况,然后提取人牙髓干细胞条件培养基,以ELISA测定条件培养基中血管内皮生长因子、内皮抑素水平,以小管形成实验检测人牙髓干细胞条件培养基干预后人脐静脉血管内皮细胞的体外小管形成能力。结果与结论:①前列腺素E1、碱性成纤维细胞生长因子的最佳作用质量浓度均为20μg/L,最佳作用时间为2 d;②与空白对照组相比,前列腺素E1组、碱性成纤维细胞生长因子组、前列腺素E1+碱性成纤维细胞生长因子组人牙髓干细胞相对增殖率、血管内皮生长因子水平、人脐静脉血管内皮细胞体外血管生成能力均显著升高(P细胞生长因子组上述各指标均优于前列腺素E1组、碱性成纤维细胞生长因子组(P细胞生长因子可促进人牙髓干细胞增殖,增强人脐静脉血管内皮细胞体外小管形成能力。

关键词：前列腺素E1 碱性成纤维细胞生长因子人牙髓干细胞细胞增殖血管生成