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c-Jun、c-Fos对人牙本质基质蛋白1基因转录调控作用的研究

第十三次全国老年口腔医学学术年会

作者：王润夫黄舒恒黄绮婷宋智吴金燕林正梅中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院广东省口腔医学重点实验室

目的:研究叉头框蛋白1(Forked box protein 1, FoxO1)对牙髓细胞(human dental pulp cells, hDPCs)成牙本质向分化的作用及其潜在下游信号通路。方法:酶消化法分离培养后用组织矿化液诱导hDPCs成牙本质向分化;Western blot及RT-PCR检测F... 详细信息

目的:研究叉头框蛋白1(Forked box protein 1, FoxO1)对牙髓细胞(human dental pulp cells, hDPCs)成牙本质向分化的作用及其潜在下游信号通路。方法:酶消化法分离培养后用组织矿化液诱导hDPCs成牙本质向分化;Western blot及RT-PCR检测FoxO1在hDPCs成牙本质向分化时的表达趋势;在慢病毒转染构建FoxO1稳定过表达/低表达的细胞模型后,用Western blot、茜素红染色评估FoxO1对成牙本质向分化关键基因DSPP表达的影响;利用生物信息学及双荧光素酶实验明确FoxO1与DSPP启动子的结合关系。结果:在hDPCs成牙本质向分化0d, 3d, 7d, 14d,FoxO1持续表达上调;低表达FoxO1下调DSPP蛋白表达及矿化基质形成,高表达产生相反效果;生物信息学及双荧光素酶验证FoxO1激活DSPP的转录。结论:FoxO1可激活DSPP转录来促进hDPCs成牙本分化,或为再生修复性牙本质提供新的治疗思路。

关键词：叉头框蛋白1 人牙髓干细胞成牙本质向分化

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现代口腔医学杂志 2010年第6期24卷 443-447页

作者：逄键梁邓天政朱晓茹李冬霞李晓华柯杰空军总医院口腔科北京100142

目的观察c-Jun和c-Fos对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)基因转录活性的影响。方法将pRSV-c-Jun和pRSV-c-Fos瞬时转染至HDPSCs中,检测转染后不同时间c-Jun、c-Fos蛋白的表达变化。将重组报告基因载体pGL3-P-505～+86与pRSV-c-Jun、pRSV-c-Fos分别共转染至细胞中,报告基因检测系统检测荧光素酶活性变化。结果瞬时转染c-Jun、c-Fos后,蛋白主要表达于HDPSCs细胞胞浆中,并且在转染48h后表达量均达到最高值;c-Jun和c-Fos能够降低pGL3-P-505～+86的荧光素酶活性,c-Jun降低DMP1启动子区-505～+86bp片段的荧光素酶活性更为显著(P人DMP1基因转录活性,是HDPSCs向成牙本质细胞方向分化重要的调节因子,DMP1基因启动子序列-110～-100bp区可能是c-Jun、c-Fos有效作用位点。

关键词： c-Jun c-Fos 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞转录活性

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Cbfα1在人牙本质基质蛋白1基因启动子结合位点的初步定位

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现代口腔医学杂志 2013年第3期27卷 163-166页

作者：逄键梁邓天政熊亚茸朱晓茹李晓华柯杰空军总医院口腔科北京100142

目的对核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)在人牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)基因启动子上结合位点进行初步定位。方法 DMP1基因启动子-505^+86 bp区存在成牙本质细胞分化重要的转录调控因子Cbfα1的作用... 详细信息

目的对核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)在人牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)基因启动子上结合位点进行初步定位。方法 DMP1基因启动子-505^+86 bp区存在成牙本质细胞分化重要的转录调控因子Cbfα1的作用位点,为验证它对DMP1是否具有直接的转录调控作用,将计算机分析结果Cbfα1结合位点(TTGGGAACCACAAGA,-199^-185 bp)进行体外定点基因突变,双酶切和DNA测序鉴定突变效果,突变后的质粒pGL3-P’-505^+86和PCMV-Osf2共转染至体外培养的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)中,报告基因检测系统检测虫萤光素酶活性的改变,单纯转染pGL3-P-505^+86组作为空白对照。结果与PCMV-Osf2共转染后,突变pGL3-P’-505^+86共转染组在HDPSCs中的荧光素酶活性较未突变pGL3-P-505^+86共转染组明显下降(P0.05)。结论 Cbfα1对DMP1基因转录具有直接的调控作用,DMP1启动子-199^-185 bp区是Cbfα1的结合位点之一。

关键词：核心结合因子α1 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞结合位点

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内源性GDF11调控牙髓干细胞成牙本质向分化的研究

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内源性GDF11调控牙髓干细胞成牙本质向分化的研究

2015年《牙体牙髓牙周病学杂志》作者名索引

2020年中华口腔医学会口腔生物医学专业委员会第十次全国口腔生物医学学术年会暨第六次全国口腔杰青优青论坛

作者：祁星颖肖清月盛睿姜爽袁泉刘蔚晴四川大学华西口腔医学院口腔疾病国家重点实验室四川大学华西口腔医院口腔种植科四川大学华西口腔医院修复2科

目的:基于牙源性干细胞的牙再生是未来修复缺失牙的治疗方向之一。大鼠切牙牙髓中提取获得的生长分化因子11(Growth differentiation factor 11, GDF11)在调控多种干细胞分化过程中发挥重要作用。GDF11作为TGF-β超家族的成员之一,其成... 详细信息

目的:基于牙源性干细胞的牙再生是未来修复缺失牙的治疗方向之一。大鼠切牙牙髓中提取获得的生长分化因子11(Growth differentiation factor 11, GDF11)在调控多种干细胞分化过程中发挥重要作用。GDF11作为TGF-β超家族的成员之一,其成熟的分泌蛋白可与内源性前体蛋白形成复合体,发挥不同的作用。外源性给予GDF11可诱导修复性牙本质的形成,而内源性GDF11在牙体组织修复再生中的作用目前尚不明确。因此本实验拟研究内源性GDF11在人牙源性干细胞成牙本质向分化中发挥的作用。材料与方法:首先采用免疫荧光染色法检测内源性GDF11在健康成人第三磨牙牙髓组织及野生型小鼠第一磨牙牙髓组织中的表达与分布。接着,提取原代人牙髓间充质干细胞,通过siRNA转染敲降人牙髓干细胞中内源性GDF11,并进行成牙本质向分化诱导,观察敲降人牙髓干细胞内源性GDF11后是否影响细胞的增殖、迁移和成牙本质向分化及矿化。最后通过RNA测序和生物信息学分析探索内源性GDF11影响牙髓干细胞功能的相关通路和分子机制。结果:成人及野生型小鼠的牙髓组织(特别是牙髓最外层的成牙本质细胞)中均有内源性GDF11的高表达。敲降人牙髓干细胞中的内源性GDF11后,成牙本质向分化潜能、矿化能力和成牙本质相关基因(RUNX2、DSPP、OCN、COL1a1等)表达均显著下降,但细胞的增殖和迁移无显著改变。RNA-Seq测序结果提示,敲降人牙髓干细胞中内源性GDF11后明显影响了细胞分化及矿化,其中经典的Wnt/β-catenin通路相关因子显著下调,细胞免疫荧光染色进一步证实敲降人牙髓干细胞中内源性GDF11后β-catenin的表达及核转位显著下调。结论:本研究通过一系列体内外实验证实内源性GDF11通过Wnt/β-catenin信号通路正向调控人牙髓干细胞的成牙本质向分化。

关键词：生长分化因子11 人牙髓干细胞成牙本质向分化

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牙体牙髓牙周病学杂志 2015年第12期 764-767页

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口腔生物医学 2012年第2期 77-77页

1.猪牙胚细胞条件培养基可诱导人牙髓干细胞的牙向分化(英)/Wang YX…//J Tissue Eng Regen Med.-2011,5(5).-354～362牙源性干细胞的分化受其所处的局部微环境所调控。以往研究表明牙胚细胞条件培养基可诱导牙髓干细胞向成牙的细胞谱... 详细信息

1.猪牙胚细胞条件培养基可诱导人牙髓干细胞的牙向分化(英)/Wang YX…//J Tissue Eng Regen Med.-2011,5(5).-354～362牙源性干细胞的分化受其所处的局部微环境所调控。以往研究表明牙胚细胞条件培养基可诱导牙髓干细胞向成牙的细胞谱系分化。然而,采用人牙胚细胞条件培养基诱导在实际操作中不可行,所以推测异种的牙胚细胞条件培养基可能对人牙髓干细胞产生类似的效应。本研究采用猪的牙胚细胞条件培养基(pTGC-CM)来诱导人牙髓干细胞,评估其诱导前后的

关键词：人牙髓干细胞牙向分化牙胚细胞英文文摘

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口腔生物医学 2014年第4期5卷 188-188页

作者：刘根霞(摘译) 于金华(校)

3．丙戊酸抑制组蛋白去乙酰化酶使人牙髓干细胞和成骨细胞骨钙素基因表达下调：为 HDAC2参与这一过程提供依据（英）由于成体间充质干细胞（如牙髓干细胞）可向多种组织特异性细胞分化（尤其是成骨细胞向分化），因此研究者们将这些干... 详细信息

3．丙戊酸抑制组蛋白去乙酰化酶使人牙髓干细胞和成骨细胞骨钙素基因表达下调：为 HDAC2参与这一过程提供依据（英）由于成体间充质干细胞（如牙髓干细胞）可向多种组织特异性细胞分化（尤其是成骨细胞向分化），因此研究者们将这些干细胞用于组织工程研究。近年来，干细胞表观遗传学研究表明，特定的组蛋白改变和修饰酶在细胞分化过程中起重要作用。丙戊酸（VPA ）是一种组蛋白脱乙酰基酶（HDAC）的选择性抑制剂，研究表明，VPA 可增强成骨细胞向分化，但骨钙素作为分化后期标志，其表达下降。本研究旨在探讨 VPA 对牙髓干细胞分化的影响。低浓度的 VPA不会降低细胞活力、增殖和细胞周期分布，但它足以通过上调骨桥蛋白和骨涎蛋白的表达，使基质矿化明显增加。与之相反，在转录水平上来看，骨钙素水平降低，这与 HDAC2受到抑制密切相关。事实上，通过 shRNA 介导的 HDAC2沉默对成骨细胞相关标记物表达的影响与 VPA 刺激的影响相类似。我们得出结论，VPA 不会诱导成骨细胞的终末分化，但可刺激不完全成熟细胞的产生。此外，通过 RNA 干扰可特异性抑制单个 HDAC，从而使成骨向分化能力增强，表现出一种选择效应。

关键词：组蛋白去乙酰化酶人牙髓干细胞性细胞分化组蛋白脱乙酰基酶成骨细胞 shRNA 文摘英文

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口腔生物医学 2014年第2期5卷 85-85页

作者：马姝

1．人血清在体内外可促进人牙髓干细胞的成骨分化（英）／Pisciotta A…／／PLoS One．-2012，7（11）．-e50542人牙髓干细胞（hDPSCs）是以细胞为基础的组织工程研究中很有前途的种子细胞来源，易获取，对病人侵袭性低，细胞可自我更... 详细信息

1．人血清在体内外可促进人牙髓干细胞的成骨分化（英）／Pisciotta A…／／PLoS One．-2012，7（11）．-e50542人牙髓干细胞（hDPSCs）是以细胞为基础的组织工程研究中很有前途的种子细胞来源，易获取，对病人侵袭性低，细胞可自我更新和多向分化。目前，间充质干细胞体外培养通常添加含胎牛血清（FCS）的培养基。FCS 含大量生长因子，可促进细胞在塑料表面的附着、增殖和分化。然而，动物源性的 FCS 可能传播疾病，甚至导致异体免疫反应。因此， FCS 的替代物可避免 FCS 的上述不足。我们的研究证实人血清（HS）是 FCS 合适的代替者，将其加入培养基中可提高hDPSCs的增殖率，并促进其在体外的成骨分化。将 hDPSCs在体外 HS 培养基中预分化培养10 d后植入大鼠的颅骨区，能够修复临界大小颅骨缺损。这些研究表明，hDPSCs 体外培养及分化过程中，HS 是 FCS 的有效代替品。

关键词：人牙髓干细胞细胞体外培养成骨分化文摘英文颅骨缺损 FCS 培养基

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