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人牙周韧带细胞成骨诱导分化后的超微结构观察

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解剖学报 2007年第3期38卷 343-346页

作者：韩劼孟焕新唐军民唐岩李盛林张凤秋北京大学口腔医学院牙周科北京100081 北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083 北京大学口腔医学院口腔颌面外科实验室北京100081

目的观察成骨诱导分化培养前后,人牙周韧带细胞超微结构的变化。方法对人牙周韧带细胞进行体外培养,并进行成骨诱导分化,14d后行透射电子显微镜观察。结果体外成骨诱导分化培养后,人牙周韧带细胞内细胞器发达,数目较常规培养条件下明显... 详细信息

目的观察成骨诱导分化培养前后,人牙周韧带细胞超微结构的变化。方法对人牙周韧带细胞进行体外培养,并进行成骨诱导分化,14d后行透射电子显微镜观察。结果体外成骨诱导分化培养后,人牙周韧带细胞内细胞器发达,数目较常规培养条件下明显增多。细胞内可见大量的基质小泡、髓样结构及中、低电子密度的圆形和椭圆形小泡样结构。结论人牙周韧带细胞是一种具有成骨潜能的细胞,经成骨诱导分化培养后,其超微结构具有成骨细胞和成牙骨质细胞的特点。

关键词：人牙周韧带细胞超微结构成骨诱导分化体外培养人

人牙周韧带细胞-聚羟基乙酸支架复合体修复牙周组织缺损

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中国组织工程研究 2016年第12期20卷 1718-1724页

作者：李敏王瑶于华龙王双双李蓓杨琳河北省中医院河北省石家庄市050000 河北医科大学第一医院河北省石家庄市050030 武邑县医院口腔科河北省衡水市053400

背景:近年来,组织工程技术作为新型组织再生模式,为牙周缺损修复提供了新的思路和方法。目的:观察人牙周韧带细胞-聚羟基乙酸支架复合体修复牙周组织缺损的效果。方法:采用多次沉淀法将第4代人牙周韧带细胞以1.5×109 L-1的浓度接种于... 详细信息

背景:近年来,组织工程技术作为新型组织再生模式,为牙周缺损修复提供了新的思路和方法。目的:观察人牙周韧带细胞-聚羟基乙酸支架复合体修复牙周组织缺损的效果。方法:采用多次沉淀法将第4代人牙周韧带细胞以1.5×109 L-1的浓度接种于聚羟基乙酸支架上,制备细胞-支架复合体。取10只杂种犬,建立牙周组织缺损模型后随机分组,实验组牙周组织缺损处植入细胞-支架复合体,对照组牙周组织缺损处直接直接龈瓣冠向复位缝合。术后4周内,检测两组牙周组织缺损处胶原组织、新生毛细血管、新生牙骨质、新生牙槽骨与新生牙周膜组织;术后8周,进行牙周组织缺损处苏木精-伊红染色。结果与结论:实验组术后1,2,3,4周的胶原含量、新生毛细血管数量、新生牙骨质、新生牙槽骨、新生牙周膜组织均显著多于对照组(P牙槽骨的结缔组织面存在较多血管排列,牙槽骨与牙周膜的链接呈锯齿状,可看见薄层牙骨质沉积;对照组仅见新生牙槽骨和牙骨质形成,部分位于切迹以下。结果表明,人牙周韧带细胞-聚羟基乙酸支架复合体可促进牙周组织再生。

关键词：牙周组织牙周疾病牙周修复体组织工程生物材料口腔生物材料聚羟基乙酸支架人牙周韧带细胞牙周组织缺损修复效果新生毛细血管

人牙周韧带细胞体外培养及其与两种生物材料体外三维培养的实验研究

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人牙周韧带细胞体外培养及其与两种生物材料体外三维培养的实验研...

作者：刘平武汉大学

学位级别：硕士

目的：本实验采用组织块法体外培养了人牙周韧带细胞（periodontal ligament cells，PDLC），研究了不同浓度的重组人类骨形态发生蛋白（recombinant human bone morphogenetic protein-2，rhBMP-2）对PDLC体外增殖的影响。本实验着重... 详细信息

目的：本实验采用组织块法体外培养了人牙周韧带细胞（periodontal ligament cells，PDLC），研究了不同浓度的重组人类骨形态发生蛋白（recombinant human bone morphogenetic protein-2，rhBMP-2）对PDLC体外增殖的影响。本实验着重探讨了PDLC分别与β—磷酸三钙（β—calcium phosphate，β—TCP）、可吸收性明胶海绵（absorbable gelatin sponge or gelfoam）复合三维培养后PDLC的附着增殖情况，以及这两种材料对PDLC的生物相容性。方法：本研究分三个部分：一、PDLC的体外培养取因正畸而拔除的健康第一前磨牙的牙周膜，用组织块培养法体外培养PDLC。通过倒置显微镜观察、HE染色、丫啶橙染色等手段研究PDLC的体外生长形态特征。采用MTT法检测经过不同浓度BMP刺激后的PDLC的增殖情况。二、PDLC与β—TCP多孔生物陶瓷的体外三维培养将4—7代PDLC接种到β—TCP上，培养两周后，通过倒置显微镜、扫描电镜和硬组织切片技术观察PDLC在β—TCP上的附着增殖情况。三、PDLC与可吸收性明胶海绵的体外三维培养将4—7代PDLC接种到可吸收性明胶海绵上，培养两周后，通过倒置显微镜、扫描电镜和丫啶橙染色观察PDLC在可吸收性明胶海绵上的附着增殖情况。结果：1．体外培养的PDLC呈长梭形，胞体丰满，伸展良好，胞浆均匀，核圆，核仁清晰，细胞排列均匀，有一定的排列方向，呈漩涡状，火焰状。20一Zoop叭的BMP 溶液对PDLC增殖有明显的促进作用。 2.PDLC在p一TCP上贴附生长，紧密结合。细胞伸展良好，大部分为长梭形。梭形细胞的两端抓住并深入p一TCP颗粒中，可见细胞跨孔隙贴附，并向孔内生长，细胞间可伸出突起相互连接，其间有明显的基质分泌。 3.PDLC在明胶海绵上贴附生长，伸展良好。大部分细胞为长梭形，梭形细胞平行于纤维走行或者交错生长，有的包绕纤维生长，细胞间可伸出突起相互连接呈片状，生长密集。结论:1.采用组织块培养法，可以获得大量的、高活力的、同源性好的PDLC。 .20一20ou留L的BMP一2溶液可促进PDLC的增殖。 .p一飞℃P对PDLC具有良好的生物相容性，有望成为牙周组织工程的支架材料。 4.可吸收性明胶海绵对PDLC具有良好的生物相容性，有望用于牙周组织工程。

关键词：人牙周韧带细胞骨形态发生蛋白 β-磷酸三钙可吸收性明胶海绵

四环素和多西环素对人牙周韧带细胞生物学活性的影响

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上海口腔医学 2003年第4期12卷 269-272页

作者：赵宁杨丕山葛少华戚向敏孙钦峰山东大学口腔医学院山东济南250012

目的探讨四环素及多西环素对体外培养的人牙周韧带成纤维细胞(HPDLCs)的生物学作用。方法将不同浓度的2种药物(1、5、20、100、500、2500滋g/ml)加入体外培养的HPDLCs中,共孵育2d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用MTT法、... 详细信息

目的探讨四环素及多西环素对体外培养的人牙周韧带成纤维细胞(HPDLCs)的生物学作用。方法将不同浓度的2种药物(1、5、20、100、500、2500滋g/ml)加入体外培养的HPDLCs中,共孵育2d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用MTT法、考马司亮蓝法及3H-TdR掺入法,分别检测其对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果在1～100滋g/ml的浓度范围内,2种药物对细胞形态无影响。在20～100滋g/ml的浓度范围内,四环素显著促进HPDLCs的增殖及生物合成(P﹤0.01),而多西环素只在20滋g/ml时,能显著促进细胞DNA的合成(P﹤0.01)。当2种药物的浓度增至2500滋g/ml时,不仅使细胞的镜下形态发生明显改变,而且严重抑制细胞的生物学活性。结论在合适的浓度范围内,四环素能显著促进HPDLCs的增殖及生物合成,多西环素的促进作用不明显,而浓度过高时两者均具有细胞毒性。

关键词：细胞培养人牙周韧带细胞四环素多西环素生物学活性牙周病

纤维结合蛋白对人牙周韧带细胞DNA合成及超微结构的影响

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上海口腔医学 1994年第2期3卷 87-89页

作者：万玲吴织芬周以钧刘斌第四军医大学口腔医学院牙周科

采用显微分光光度计图像分析技术及透射电镜观察纤维结合蛋白与人牙周韧带细胞作用后，细胞ＤＮＡ合成和超微结构的变化，结果显示：加纤维结合蛋白组的牙周韧带细胞核面积值、核总吸收值和核平均吸收值均较对照组高（Ｐ＜０．０１），... 详细信息

采用显微分光光度计图像分析技术及透射电镜观察纤维结合蛋白与人牙周韧带细胞作用后，细胞ＤＮＡ合成和超微结构的变化，结果显示：加纤维结合蛋白组的牙周韧带细胞核面积值、核总吸收值和核平均吸收值均较对照组高（Ｐ＜０．０１），提示纤维结合蛋白可促进牙周细胞ＤＮＡ的合成。超微结构示纤维结合蛋白组细胞核内常染色质含量明显较对照组丰富，且胞浆中含有更多量的微丝、线粒体等细胞器，表明在促进牙周愈合时，纤维结合蛋白可能通过调节微丝聚合度、刺激某些蛋白质合成而起作用。

关键词：纤维结合蛋白超微结构人牙周韧带细胞对照组 DNA合成胞浆显微面积促进微分

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米诺环素对人牙周韧带细胞矿化能力的影响

现代口腔医学杂志 2005年第1期19卷 63-66页

作者：葛少华杨丕山赵宁戚向敏孙钦峰山东大学口腔医院济南250012

目的探讨米诺环素对人牙周韧带细胞(periodontal Iigament cells,PDLCs)碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及矿化结节形成能力的影响。方法将不同浓度的米诺环素(0,1,5,20,100,200mg/L)加入体外培养的第4代HPDLcs中,孵育4天后,检测其对细胞ALP活性的影响;将第4代的PDLCs在体外进行长期培养,实验组加入矿化液和米诺环素(20mg/L或100mg/L),对照组只加矿化液。28天后用茜素红与VonKossa染色检测矿化结节的形成。结果20mg/L和100mg/L的米诺环素能显提高PDLCsS的ALP活性,其中20mg/L具有最大的促进效应,对体外矿化结节的形成,亦有一定程度的促进作用。结论米诺环素有促进牙周韧带细胞向成骨细胞方向转化的趋势,从而有助于牙周新附着的形成。

关键词：米诺环素结节人牙周韧带细胞矿化液体外 ALP 影响矿化能力长期培养形成能力

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人牙周韧带细胞膜片的体外实验研究

中华口腔医学研究杂志（电子版） 2013年第1期7卷 31-34页

作者：张剑英付云俞少杰中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院广东省口腔医学重点实验室广州510055

目的观察体外培养人牙周韧带细胞(hPDLCs)的成骨、成脂能力;构建hPDLCs膜片并鉴定膜片细胞外基质的主要结构蛋白。方法通过酶联组织块法分离并纯化培养hPDLCs;免疫细胞化学法鉴定hPDLCs来源及干细胞标志物STRO-1表达情况;取第2～4代细... 详细信息

目的观察体外培养人牙周韧带细胞(hPDLCs)的成骨、成脂能力;构建hPDLCs膜片并鉴定膜片细胞外基质的主要结构蛋白。方法通过酶联组织块法分离并纯化培养hPDLCs;免疫细胞化学法鉴定hPDLCs来源及干细胞标志物STRO-1表达情况;取第2～4代细胞分别用成骨诱导培养基和成脂诱导培养基培养,茜素红及油红O染色检测hPDLCs的成骨、成脂能力;制备成熟的hPDLCs膜片,苏木素-伊红(HE)及免疫组织化学染色法鉴定膜片细胞外基质主要结构蛋白Ⅰ型胶原、层黏蛋白及纤连蛋白的表达情况。结果经原代培养的hPDLCs抗波形蛋白染色阳性,干细胞标志物STRO-1染色阳性,证实hPDLCs来源于间充质并具有干细胞潜在分化能力;hPDLCs在诱导成骨、成脂分化培养14～16d后,茜素红及油红O染色结果阳性提示hPDLCs具有良好的成骨及成脂分化能力;HE染色及免疫化学染色发现hPDLCs膜片高表达细胞外基质主要结构蛋白Ⅰ型胶原、层黏蛋白及纤连蛋白。结论本研究从细胞分离培养,来源鉴定、多向分化潜能诱导及细胞膜片技术等方面证实PDLCs中存在成体干细胞,提示hPDLCs膜片能为牙周组织再生种子细胞提供新来源,可进一步深入研究。

关键词：人牙周韧带细胞细胞膜片牙周组织再生

人牙周韧带细胞与β-磷酸三钙多孔生物陶瓷三维培养的实验研究

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临床口腔医学杂志 2004年第4期20卷 198-200页

作者：刘平王贻宁武汉大学口腔医学院修复科湖北武汉430079

目的 :通过将人牙周韧带细胞 (humanperiodontalligamentcells ,PDLCs)接种到三维多孔 β -磷酸三钙( β -tricalciumphosphate ,β -TCP)陶瓷支架材料上 ,探讨以 β -TCP为牙周组织工程支架材料的可能性。方法 :取新鲜拔除的健康第一... 详细信息

目的 :通过将人牙周韧带细胞 (humanperiodontalligamentcells ,PDLCs)接种到三维多孔 β -磷酸三钙( β -tricalciumphosphate ,β -TCP)陶瓷支架材料上 ,探讨以 β -TCP为牙周组织工程支架材料的可能性。方法 :取新鲜拔除的健康第一前磨牙牙周膜 ,用组织块培养法培养PDLCs。β -TCP多孔陶瓷加工成片状 ,作为细胞支架 ,将 4-7代PDLCs与 β -TCP进行体外三维培养 ,2周后观察细胞生长状况。结果 :PDLCs在 β -TCP支架材料上附着、增殖并复层生长。结论 :β -TCP具有良好的生物相容性。

关键词：人牙周韧带细胞 β-磷酸三钙组织工程

根面牙骨质对人牙周韧带细胞分化影响的实验研究

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根面牙骨质对人牙周韧带细胞分化影响的实验研究

作者：蔡军滨州医学院

学位级别：硕士

目的:牙骨质是覆盖在牙根表面的薄层矿化结缔组织,近年研究表明牙骨质基质含有牙骨质附着蛋白(cementum attachment proteins,CAP)和牙骨质蛋白-23(cementum protein-23,CP-23),被认为是牙骨质特异性分子,具有促进细胞增殖、分化等多种... 详细信息

目的:牙骨质是覆盖在牙根表面的薄层矿化结缔组织,近年研究表明牙骨质基质含有牙骨质附着蛋白(cementum attachment proteins,CAP)和牙骨质蛋白-23(cementum protein-23,CP-23),被认为是牙骨质特异性分子,具有促进细胞增殖、分化等多种生物学作用,因此牙骨质本身在促进牙周组织再生中的作用越来越受到重视。因此,本研究拟用人牙周韧带细胞(human periodontal ligamentcells,HPDLCs)探讨根面原位保留的牙骨质对其分化的影响,以期进一步揭示牙骨质的功能,并为临床应用中根面保留牙骨质提供理论依据。方法:1.选用因正畸拔除的牙齿,组织块法培养人牙周韧带细胞。2.根片制备:将刮除了牙周韧带的牙齿的牙根纵辟为两半,去除牙髓组织。一半彻底刮除根面牙骨质,暴露牙本质,作为牙本质根片组(PDLCs+D);另一半保留牙骨质,不暴露其下的牙本质,作为牙骨质根片组(PDLCs+C)。3.接种第二代牙周韧带细胞至根片表面,复合培养7天后,收集根片上细胞,提取RNA,RT-PCR检测两组细胞中牙骨质附着蛋白(CAP)和牙骨质蛋白23(CP-23)基因表达情况,用β-action作为内参照,用软件测量标准曲线,获得每组mRNA的表达量,以每组检测的mRNA与β-action mRNA之比值表示CAP和CP-23的基因表达量。4.取与PDLCs复合培养7天的牙骨质片和牙本质片各20个,分别放入半透膜袋内,植入裸鼠皮下,八周后处死裸鼠取出标本,固定、脱钙,HE染色,观察牙本质片和牙骨质片上新生组织形成,透射电镜观察新生组织的超微结构。结果:1.PDLCs+C和PDLCs+D中CAPmRNA的表达量分别是0.00375和0.00325;对CP-23,PDLCs+C和PDLCs+D中CP-23mRNA的表达量分别是0.000073和0.000000662。统计分析表明两组间的CAP和CP-23mRNA表达量均有显著性差异。2.HE染色观察显示20个牙骨质片中有16牙骨质片表面有淡染的牙骨质样基质形成,牙本质片表面无此结构形成,仅有纤维组织形成,与其表面有较大的间隙。3.透射电镜表明细胞附着在新形成的组织表面,核仁深染,细胞的胞浆内有大量的粗面内质网,新形成的硬组织与原有牙骨质之间有明显的界限,连接紧密,没有间隙形成。结论:我们的研究结果表明根面保留的牙骨质可能促进体外培养的人牙周韧带细胞向成牙骨质细胞方向分化,提示根面保留牙骨质可能有利于牙周组织再生。

关键词：牙骨质人牙周韧带细胞牙骨质附着蛋白牙骨质蛋白分化