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人参皂甙Rg1对人牙周膜细胞生物学活性及大鼠牙周组织相关细胞因子表达的影响

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人参皂甙Rg1对人牙周膜细胞生物学活性及大鼠牙周组织相关细胞因...

作者：杨倩兰州大学

学位级别：硕士

目的: 1、研究玻片覆盖法原代培养人牙周膜细胞的成功率及生物学性状;在此基础上研究人参皂甙Rg1对原代培养的人牙周膜细胞生物学活性的影响。 2、通过给Wistar大鼠肌注糖皮质激素及牙间结扎钢丝建立一种近似人类临床牙周炎的动物模型,... 详细信息

目的: 1、研究玻片覆盖法原代培养人牙周膜细胞的成功率及生物学性状;在此基础上研究人参皂甙Rg1对原代培养的人牙周膜细胞生物学活性的影响。 2、通过给Wistar大鼠肌注糖皮质激素及牙间结扎钢丝建立一种近似人类临床牙周炎的动物模型,研究人参皂甙Rg1对大鼠实验性牙周炎模型的牙周组织中白介素6(IL-6)、骨钙素(BGP)表达的影响。方法: 1、利用形态学、免疫组化方法来观察玻片覆盖法原代培养人牙周膜细胞的成功率及其生物学特性,并鉴定其来源。 2、在体外培养人牙周膜细胞的基础上,采用噻唑蓝(MTT)比色法、考马斯亮蓝法、酶动力学方法探讨人参皂甙Rg1对原代培养的人牙周膜细胞增殖活性、蛋白合成、碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。 3、采用流式细胞技术观察人参皂甙Rg1对体外培养人牙周膜细胞细胞周期的影响。 4、体外培养人牙周膜细胞经钙荧光指示剂Fluo-3负载后,用激光扫描共聚焦显微镜测定人参皂甙Rg1影响前后的细胞内游离钙离子浓度随时间变化情况。 5、选用100只体重160-200g Wistar大白鼠,随机分成10组,每组10只。A组:正常对照组,于实验开始(0周)时处死。B-E组:人参皂甙Rg1治疗组。F-J组:牙周炎对照组。B-E组分别于牙周炎模型建立并给药后第1、2、3、4周处死,每次一组。F-J组分别于牙周炎模型建立后第0、1、2、3、4周处死,每次一组。切取大鼠上颌磨牙牙周组织标本作切片,免疫组织化学方法对IL-6、BGP进行染色,光镜观察,测量灰度值,进行统计学分析。结果: 1、玻片覆盖法可显著提高人牙周膜细胞原代培养的成功率。 2、人参皂甙Rg1对牙周膜细胞生长增殖的影响与对照组相比人参皂甙Rg10.005μmol/L,0.01μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L组均能明显促进细胞增殖(P＜0.05),且在0.01-0.05μmol/L浓度范围内作用时间最长。 3、人参皂甙Rg1对牙周膜细胞蛋白含量的影响与对照组相比人参皂甙Rg10.01μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L组72小时细胞培养液中蛋白含量均明显高于对照组(P＜0.05)。 4、人参皂甙Rg1对牙周膜细胞ALP活性的影响: 与对照组相比人参皂甙Rg10.01μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L组72小时细胞培养液中ALP活性均明显高于对照组(P＜0.05)。 5、人参皂甙Rg1对牙周膜细胞内游离钙离子浓度的影响: 人参皂甙Rg1(0.01μmol/L)使人牙周膜细胞内游离钙离子降低,最后维持在比加药前低的静息钙水平上。 6、人参皂甙Rg1对细胞周期的影响: FCM检测显示经0.01μmol/L人参皂甙Rg1作用48h后,牙周膜细胞G期细胞降低(P＜0.05),S期细胞升高且细胞增殖指数PrI值(S+G/M)%显著增高(P＜0.05)。 7、大鼠实验性牙周炎动物模型的成功建立: 动物采用牙间结扎加激素注射第4天后便出现了进食减少、倦怠少动等表现,符合中医肾虚的症状,并且出现了牙槽骨疏松、牙槽嵴吸收、牙周袋形成等病理性改变。正常组大鼠则无上述表现。牙周炎组牙周组织中BGP表达明显低于正常组,IL-6表达明显高于正常组(P＜0.05)。 8、人参皂甙Rg1对大鼠牙周组织中有关细胞因子表达的影响: 从治疗第二周起,治疗组较牙周炎对照组牙周组织中的BGP水平明显升高(P＜0.05);治疗第三周起,治疗组较对照组牙周组织中的IL-6水平显著降低(P＜0.05),经治疗后的实验动物全身状况也显著改善。结论: 玻片覆盖法可显著提高人牙周膜细胞原代培养的成功率。人参皂甙Rg1在一定浓度范围内能提高牙周膜细胞的增殖活性、蛋白合成及碱性磷酸酶活性。人参皂甙Rg1使牙周膜细胞G期细胞减少,S期细胞增加,细胞增殖指数PrI值(S+G/M)%增高,促进更多的细胞进人增殖状态,且人参皂甙Rg1可能通过改变细胞内游离钙离子的浓度,达到其促进细胞增殖的作用。牙间结扎加糖皮质激素注射的方法可成功地建立近似于人类临床牙周炎的动物模型,为下一步研究中药防治牙周炎提供了很好的实验基础。大鼠实验性牙周炎模型牙周组织中IL-6含量较正常对照组明显升高,BGP含量较正常对照组明显降低,应用人参皂甙Rg1能显著抑制实验性牙周炎模型牙周组织中IL-6的表达,同时升高BGP的含量。根据上述结果证实人参皂甙Rg1可促进创伤愈合和组织再生,具有治疗牙周炎并改善全身状况的作用,从而为人参皂甙Rg1治疗牙周病的临床合理用药提供科学依据。

关键词：人牙周膜细胞人参皂甙Rg1 碱性磷酸酶细胞增殖细胞蛋白合成钙离子流式细胞仪牙周炎模型白介素6 骨钙素

Er:YAG激光对人牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响

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Er:YAG激光对人牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响

作者：程群南京大学

学位级别：硕士

背景人牙周膜中含有一群异质性较强的复杂的牙周膜细胞群,主要包括成纤维细胞、成骨细胞、破骨细胞以及未分化的间充质细胞。hPDLCs为该细胞群中最常见的细胞类型,牙周膜细胞具有较强的自我更新及增殖能力,并有较强的分化能力,能不断形... 详细信息

背景人牙周膜中含有一群异质性较强的复杂的牙周膜细胞群,主要包括成纤维细胞、成骨细胞、破骨细胞以及未分化的间充质细胞。hPDLCs为该细胞群中最常见的细胞类型,牙周膜细胞具有较强的自我更新及增殖能力,并有较强的分化能力,能不断形成新的纤维及牙骨质,在牙槽骨改建与牙周再生中起重要作用。铒激光(erbium-doped:yttrium-aluminium-garnet, Er:YAG laser)是波长为2940 nm的近红外激光,极易被水吸收,故产热少,对组织损伤小,同时由于其具有良好的切割软硬组织的功效,近年来逐渐被认为是牙周治疗时最具应用前景的激光之一。尽管目前对Er:YAG激光的研究报道较多,然而,关于Er:YAG激光对hPDLCs影响的研究报道尚不多见。鉴于牙周膜细胞在牙周组织修复中的重要作用,本实验拟通过噻唑蓝(methyl-thiazolyl-tetrazolium, MTT)法、克隆形成实验、划痕实验、酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)等不同实验方法,观察不同输出功率、相同照射时间和不同照射时间、相同照射功率的Er:YAG激光照射对hPDLCs增殖和分化的影响,为Er:YAG激光在牙周病治疗中的应用提供理论基础。目的1.比较不同输出功率和照射时间Er:YAG激光照射对体外培养的hPDLCs增殖和迁移的影响2.比较不同输出功率和照射时间Er:YAG激光照射对体外培养的hPDLCs成骨向分化的影响。方法首先收集就诊于南京医科大学附属口腔医院颌面外科因阻生需要拔除的健康第三磨牙(所选牙齿均无龋坏、根尖周炎及牙周炎),采用胰酶加胶原酶消化法分离培养hPDLCs,传至第3代细胞行角蛋白、波形丝蛋白染色,鉴定hPDLCs来源,第3-6代用于后续实验。然后按不同的输出功率、相同照射时间(0 W、0.45 W、0.6 W、0.75 W,10 s)及不同照射时间、相同输出功率(0s、10s、30s、60s,0.6W)对接种细胞行Er:YAG激光照射,通过MTT法、克隆形成实验、划痕实验、Elisa实验、Western blot观察Er:YAG激光照射对hPDLCs增殖、克隆形成能力、细胞迁移、转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)分泌及成骨相关蛋白碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、骨钙素(osteocalcin, OCN)、核心结合蛋白因子2(runt-related transcription factor-2, Runx2)表达的影响。结果 1.光学显微镜下观察,用胰酶加胶原酶消化法能成功分离得到长梭形、胞体丰满、胞浆均匀的细胞。免疫细胞化学染色波形丝蛋白呈阳性,角蛋白呈阴性,证明细胞来源于中胚层。2.输出功率为0.45 W、0.6 W,照射时间10s时,可促进细胞的增殖及克隆形成(P细胞增殖及克隆形成率明显高于未接受激光照射组(P细胞镜下形态及免疫细胞化学染色结果,可确定为hPDLCs。2.在适度的功率和照射时间时,Er:YAG激光对hPDLCs增殖、克隆形成、迁移、TGF-β1分泌具有促进作用。3.在适度的功率和照射时间时,Er:YAG激光对hPDLCs ALP、OCN、Runx2表达具有促进作用。

关键词： Er:YAG激光人牙周膜细胞细胞增殖细胞迁移克隆形成转化生长因子β1 成骨分化

TIMP-1对人牙周膜细胞增殖及其ALP活性表达的影响

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TIMP-1对人牙周膜细胞增殖及其ALP活性表达的影响

作者：高晓林山西医科大学

学位级别：硕士

[目的]本实验旨在探讨金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)对人牙周膜细胞(HPDLC)的增殖与碱性磷酸酶(ALP)活性表达的影响。优选其最佳显效时间和浓度,为寻求体外简便、高效的促进人牙周膜细胞增殖的方法提供理论基础。 [方法]从第3代人牙... 详细信息

[目的]本实验旨在探讨金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)对人牙周膜细胞(HPDLC)的增殖与碱性磷酸酶(ALP)活性表达的影响。优选其最佳显效时间和浓度,为寻求体外简便、高效的促进人牙周膜细胞增殖的方法提供理论基础。 [方法]从第3代人牙周膜细胞开始体外培养,取第5-7代细胞用于实验。分为1个对照组和4个实验组,对照组采用含10%FBS的DMEM培养液,实验组采用分别为含不同浓度TIMP-1 (1ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)的DMEM培养液。采用MTT和ALP活性检测法,观察不同浓度的TIMP-1在第24、48和72小时对体外培养的人牙周膜细胞的作用,并对实验数据进行统计分析。 [结果](1)细胞增殖：与对照组比较,1ng／ml的TIMP-1在24、48和72小时,10ng／ml的TIMP-1在48、72小时均可显著促进PDLC的增殖。 (2)ALP活性：1ng／ml的TIMP-1在24、48和72小时,10ng／ml的TIMP-1在48小时,对PDLC中ALP的活性有显著增强作用。 [结论]本实验证实了TIMP-1有促进人牙周膜细胞生长和分化的作用,最佳浓度为1ng／ml～10ng／ml。这一结论表明,在牙周炎的康复阶段TIMP-1可以促进人牙周膜细胞的增殖和分化,具有正向调节作用。这为牙周炎后新附着的形成和牙周组织的修复、重建提供了实验依据。

关键词：人牙周膜细胞金属蛋白酶组织抑制剂-1 MTT 碱性磷酸酶

低频磁刺激对高糖诱导人牙周膜细胞损伤的保护作用

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口腔医学研究 2019年第12期35卷 1177-1181页

作者：郑广明张健张文怡天津市津南医院口腔科天津300350 天津医科大学附属口腔医院口腔颌面外科天津300070 天津医科大学附属口腔医院修复科天津300070

目的:探讨低频磁刺激对高糖介导人牙周膜细胞损伤的保护作用。方法:体外复苏培养人牙周膜细胞,随机分为正常对照组和高糖模型组以及低频磁刺激组(3个亚组)共5个实验组。流式细胞术的方法检测细胞周期的变化,TUNEL法检测细胞的凋亡情况,... 详细信息

目的:探讨低频磁刺激对高糖介导人牙周膜细胞损伤的保护作用。方法:体外复苏培养人牙周膜细胞,随机分为正常对照组和高糖模型组以及低频磁刺激组(3个亚组)共5个实验组。流式细胞术的方法检测细胞周期的变化,TUNEL法检测细胞的凋亡情况,比色法检测Caspase-3、6、9活性,逆转录PCR及Western-blot检测CXCL1、CXCL2及其受体CXCR2基因和蛋白的表达水平。结果:与正常对照组比较,高糖模型中人牙周膜细胞凋亡增加;Caspase-3、6、9活性均得到了显著提高(P细胞凋亡率降低,Caspase-3、6、9活性降低(P细胞周期的影响不明显(P>0.05),3个亚组比较时,刺激强度为1.5 T时以上变化最明显(P人牙周膜细胞凋亡,低频磁刺激对高糖诱导人牙周膜细胞损伤有保护作用。

关键词：低频磁刺激人牙周膜细胞高糖损伤

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BMP4对人牙周膜细胞骨钙素分泌的影响

现代口腔医学杂志 2008年第4期22卷 376-378页

作者：袁伟李鑫李丽华王昭领济南军区总医院口腔科 250031 山东大学口腔医院

目的观察体外培养的人牙周膜细胞转染骨形成蛋白4基因(bone morphogenetic protein,Bmp4)后,骨钙素(osteocalcin,OCN)的分泌变化,为深入探讨BMP4在牙周再生中的调控作用奠定基础。方法Bmp4基因转染体外培养的第四代人牙周膜细胞,经原位... 详细信息

目的观察体外培养的人牙周膜细胞转染骨形成蛋白4基因(bone morphogenetic protein,Bmp4)后,骨钙素(osteocalcin,OCN)的分泌变化,为深入探讨BMP4在牙周再生中的调控作用奠定基础。方法Bmp4基因转染体外培养的第四代人牙周膜细胞,经原位杂交检测确定Bmp4成功转染细胞后,计数并统计转染组和未转染组人牙周膜细胞中骨钙素的表达变化。结果Bmp4基因转染后的人牙周膜细胞上清液中骨钙素的含量明显高于未转染组细胞。结论Bmp4基因能够促进人牙周膜细胞分泌非胶原蛋白,因此,对牙周组织的再生具有一定的调控作用。

关键词：骨形成蛋白4 人牙周膜细胞骨钙素

人牙周膜细胞在羧甲基壳聚糖和血小板衍生生长因子BB环境中的增殖

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中国组织工程研究 2012年第51期16卷 9584-9588页

作者：邓蕾余占海殷丽华吴溪溪兰州大学口腔医学院甘肃省兰州市730000

背景:羧甲基壳聚糖或血小板衍生生长因子均可促进对体外培养人牙周膜细胞的增殖。目的:观察羧甲基壳聚糖和血小板衍生生长因子BB联合应用对体外培养人牙周膜细胞增殖和分化能力的影响。方法:取生长良好的第4或5代人牙周膜细胞,分组培养... 详细信息

背景:羧甲基壳聚糖或血小板衍生生长因子均可促进对体外培养人牙周膜细胞的增殖。目的:观察羧甲基壳聚糖和血小板衍生生长因子BB联合应用对体外培养人牙周膜细胞增殖和分化能力的影响。方法:取生长良好的第4或5代人牙周膜细胞,分组培养:对照组(仅含体积分数2%FBS的DMEM培养液)、10μg/L血小板衍生生长因子BB组、100mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB组、800mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB组、100mg/L羧甲基壳聚糖组、800mg/L羧甲基壳聚糖组。结果与结论:①MTT检测:与对照组比较,其余各组均能促进人牙周膜细胞增殖,且100mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB、800mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB组细胞增殖高于其他组(P细胞周期检测:与MTT检测结果相符。③碱性磷酸酶活性:与对照组比较,除10μg/L血小板衍生生长因子BB组降低外,其余组均增强(P人牙周膜细胞增殖和骨向分化。

关键词：羧甲基壳聚糖血小板衍生性生长因子BB 人牙周膜细胞细胞增殖细胞分化碱性磷酸酶

人牙周膜细胞接种于纳米-羟基磷灰石上的形态学研究

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东南国防医药 2008年第3期10卷 161-163页

作者：毛钊毛曦储成林南京军区南京总医院口腔科江苏南京210002 南京大学生命科学院江苏南京210093 东南大学材料研究所江苏南京210096

目的观察人牙周膜细胞接种于三维多孔纳米-羟基磷灰石上的组织形态学表现。方法将原代培养的人牙周膜细胞接种于三维多孔纳米-羟基磷灰石上,培养15天后,采用扫描电子显微镜观察细胞的生长情况,探讨两者的复合情况。结果作为种子细胞的... 详细信息

目的观察人牙周膜细胞接种于三维多孔纳米-羟基磷灰石上的组织形态学表现。方法将原代培养的人牙周膜细胞接种于三维多孔纳米-羟基磷灰石上,培养15天后,采用扫描电子显微镜观察细胞的生长情况,探讨两者的复合情况。结果作为种子细胞的人牙周膜细胞接种到支架材料上后,细胞粘附充分,生长旺盛,并有钙结节和少量胶原纤维形成。结论三维多孔纳米-羟基磷灰石支架材料是一种比较符合牙周组织工程学条件的支架材料。

关键词：人牙周膜细胞三维多孔纳米-羟基磷灰石支架材料牙周组织工程

羧甲基壳聚糖和PDGF-BB联合应用对人牙周膜细胞生物活性的影响

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羧甲基壳聚糖和PDGF-BB联合应用对人牙周膜细胞生物活性的影响

作者：邓蕾兰州大学

学位级别：硕士

目的：本实验探讨CM-CTS和PDGF-BB联合应用对HPDLCs生物活性的影响,以期为牙周组织的再生和修复提供理论依据和研究基础。方法：本实验通过玻片覆盖组织块法对HPDLCs进行体外原代培养,在倒置相差显微镜下观察HPDLCs;利用免疫组织化学... 详细信息

目的：本实验探讨CM-CTS和PDGF-BB联合应用对HPDLCs生物活性的影响,以期为牙周组织的再生和修复提供理论依据和研究基础。方法：本实验通过玻片覆盖组织块法对HPDLCs进行体外原代培养,在倒置相差显微镜下观察HPDLCs;利用免疫组织化学方法对细胞来源进行鉴定;采用MTT比色法、考马斯亮蓝法、流式细胞分析法及酶动力学方法观察CM-CTS和PDGF-BB联合应用对HPDLCs生物活性的影响。结果：免疫组化结果显示,细胞波形丝蛋白染色呈阳性,角蛋白染色呈阴性。MTT结果显示,作用72h,各实验组均能促进HPDLCs增殖(P细胞增殖高于其它组(P细胞蛋白含量均升高(P细胞蛋白含量增高最显著(P细胞蛋白的合成,促进DNA的合成和分化作用,以期为进一步牙周组织的再生和修复提供理论依据和研究基础。

关键词：羧甲基壳聚糖血小板衍生性生长因子-BB 人牙周膜细胞细胞增殖蛋白合成细胞周期碱性磷酸酶

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乳铁蛋白对人牙周膜细胞增殖迁移分化的影响

乳铁蛋白对人牙周膜细胞增殖迁移分化的影响

作者：晋冰玉南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的牙周病是成年人中最常见的口腔疾病之一,可造成牙骨质、牙周膜、牙槽骨、牙龈组织的破坏,最终导致牙齿松动、脱落,是危害人类健康的重要原因。恢复牙周支持组织是牙周病治疗的最终目的。正常牙周组织具有自我更新和修复... 详细信息

研究背景及目的牙周病是成年人中最常见的口腔疾病之一,可造成牙骨质、牙周膜、牙槽骨、牙龈组织的破坏,最终导致牙齿松动、脱落,是危害人类健康的重要原因。恢复牙周支持组织是牙周病治疗的最终目的。正常牙周组织具有自我更新和修复的能力,其修复能力主要是通过人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)的多种功能来实现的。hPDLCs是牙周膜中最主要的细胞成分,具有多向分化潜能,可分泌、收缩胶原,是形成牙周膜、牙骨质、牙槽骨等牙周附着组织的主要来源,是牙周组织再生修复的基础。在牙周炎症发生发展过程中宿主的自身免疫作用已得到充分的研究和肯定,而牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)是慢性牙周炎症的主要致病菌,其脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是引发hPDLCs自身免疫反应的主要毒力因子,在牙周炎症中起着至关重要的作用。因此调节炎症与促进支持组织重建是牙周病治疗过程中不可忽视的两个要点。乳铁蛋白(lactoferrin,LF)是存在于人体多种组织中的糖蛋白,具有抗菌、抗病毒、抑制肿瘤细胞增殖等特性,参与构成宿主非特异性免疫系统,也是口腔唾液防御体系中的重要组成部分。近年来研究认为LF对骨的生长代谢也起着重要作用,其能够诱导骨髓间充质干细胞中成骨标记物的表达,抑制感染相关破骨细胞的形成,促进成骨细胞的增殖和分化的特性已得到证实。本课题组在早期的研究中已发现LF可以下调脂多糖激发的hPDLCs Toll样受体4的表达,表明LF在牙周炎的免疫治疗方面有着积极意义。牙周炎治疗的理想药物应具备调节炎症和促进成骨两方面作用,因此本研究旨在探讨LF对人牙周膜细胞增殖迁移分化的影响,以及LF对经LPS刺激的人牙周膜细胞成骨分化的影响,初步探索LF在促进牙周组织修复方面的作用,为临床上新的牙周病治疗方法提供理论依据。第一章人牙周膜细胞的体外培养和鉴定体外培养人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells, hPDLCs),观察体外培养的人牙周膜细胞的形态特征及其鉴定。方法1.取15～22岁因正畸需要拔除的健康前磨牙,要求牙体牙周牙髓健康,拔出时无污染。无菌条件下刮取根中三分之一的牙周膜组织,用组织块酶消化法将牙周膜组织进行原代培养并传代。取原代hPDLCs及培养至第3代的hPDLCs,倒置相差显微镜下观察其生长形态及特征。2.免疫组化SP(streptavidin-perosidase)法抗波形丝蛋白、角蛋白染色：选择第3代生长良好的hPDLCs制作细胞爬片,在水浴箱中用3%过氧化氢去离子水37℃孵育20min,山羊血清封闭30min,滴加一抗,37℃湿盒内放置2h,冲洗后滴加二抗,37℃孵育30min,冲洗,DAB显色反应试剂盒作用10min,脱水,封片。倒置显微镜下观察并拍照。3.取第3代hPDLCs,消化成密度为1×106 mL-1的细胞悬液,分别加入小鼠抗人CD29、CD44、CD105、CD90单抗,室温孵育1h;洗涤后加入羊抗鼠Ig-FITC,室温下避光45min;洗涤后弃上清,加PBS重悬,流式细胞仪检测细胞分子表型。***法检测hPDLCs活性：取第3代生长良好的hPDLCs以5×104mL-1的密度接种于96孔板。分别在第1d、3d、5d、7d检测OD值：在待检测细胞中加入20 μ1 MTT液,孵箱避光孵育4 h;吸弃原培养液,加入150μl二甲基亚砜,振荡15min;分光光度计测定各孔OD值并绘制生长曲线。5.茜素红染色法检测hPDLCs的矿化能力：以5×104mL-1的密度将第3代hPDLCs接种于六孔板,待细胞长至70%-80%时,加入矿化诱导培养基,连续培养14 d,茜素红染色,倒置显微镜下观察并拍照。结果1.组织块酶消化法分离培养hPDLCs成活率较高。观察显示：游出细胞为梭形和星形,体积较大,细胞核居中,为成纤维细胞样细胞。传代后细胞可于24h内贴壁,贴壁后部分hPDLCs伸展为不规则星形或圆形,大部分仍为梭形,呈放射状或漩涡状增殖。***法抗波形丝蛋白、角蛋白染色结果显示,波形丝蛋白染色后细胞质深染,显阳性：角蛋白染色胞质浅染,为阴性。3.流式细胞仪分析hPDLCs分子表型显示：CD29、CD44、CD90、CD105标志的阳性细胞率分别为98.17%、99.13%、100%和78.21%,与结果2共同表明所培养细胞为间充质来源。4. hPDLCs接种第3d细胞增长迅速,进入对数生长期,第5-7d处于平台期,符合成纤维细胞生长规律。5.矿化诱导14d的hPDLCs,茜素红染色后显微镜下可见若干大小不等的红褐色结节形成。第二章乳铁蛋白对人牙周膜细胞增殖、迁移的影响采用MT

关键词：人牙周膜细胞乳铁蛋白增殖迁移成骨分化