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去甲肾上腺素对人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞l-02增殖、凋亡的影响

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山东医药 2017年第47期57卷 5-8页

作者：施媛萍罗光华郑璐魏江于洋苏州大学附属第三医院江苏常州213003 常州市第一人民医院

目的观察去甲肾上腺素(NE)对人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞l-02增殖、凋亡的影响。方法体外培养HepG2细胞和l-02细胞,分别加入不同浓度NE处理,继续培养,采用MTT法观察细胞增殖情况,HE染色和Annexin V-FITC/PI染色法观察细胞形态学变化... 详细信息

目的观察去甲肾上腺素(NE)对人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞l-02增殖、凋亡的影响。方法体外培养HepG2细胞和l-02细胞,分别加入不同浓度NE处理,继续培养,采用MTT法观察细胞增殖情况,HE染色和Annexin V-FITC/PI染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术观察细胞凋亡情况。结果经0.1、1、10、50μmol/l NE处理24、48 h,HepG2细胞OD值显著下降(P均l-02细胞OD值无明显变化。10μmol/l NE作用于HepG2细胞可见典型的凋亡形态学改变,胞质收缩、深染,核染色质浓缩;l-02细胞在NE作用前后形态学均无明显改变。HepG2细胞加入10μmol/l NE后部分细胞呈绿色(为早期凋亡表现),加入50μmol/l NE后部分细胞膜呈绿色,细胞核呈红色(为晚期凋亡表现);l-02细胞均未显示有荧光。0.1、1、10μmol/l NE作用于HepG2细胞24 h后,其凋亡率均显著高于对照组(0μmol/l NE),且呈剂量依赖关系(P均l-02细胞24 h后,其凋亡率较对照组先增高后降低(P均细胞增殖并诱导其凋亡,而对l-02细胞增殖和凋亡没有影响,提示其在特定类型肝癌临床治疗中具有潜在价值。

关键词：去甲肾上腺素人肝癌细胞HepG2 人正常肝细胞l-02 细胞增殖细胞凋亡

山豆根主要成分苦参碱诱导人正常肝细胞l-02凋亡及其对细胞周期和细胞能量代谢的影响

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山豆根主要成分苦参碱诱导人正常肝细胞L-02凋亡及其对细胞周期和...

马尾松树皮提取物对四氯化碳损伤肝细胞的保护作用

中国毒理学会第七次全国会员代表大会暨中国毒理学会第六次...

作者：耿娅王清然邵珍邓中平上海中医药大学药物安全评价研究中心

目的:探索山豆根及主要成分苦参碱诱导人肝（实质）细胞l-02凋亡的作用及其对细胞周期和细胞代谢的影响。方法:以人肝细胞株l-02为模型,采用CCK-8法测定药物对细胞增殖的影响,采用FITC Annexin V/PI双染法在流式细胞仪检测药物对细胞凋... 详细信息

目的:探索山豆根及主要成分苦参碱诱导人肝（实质）细胞l-02凋亡的作用及其对细胞周期和细胞代谢的影响。方法:以人肝细胞株l-02为模型,采用CCK-8法测定药物对细胞增殖的影响,采用FITC Annexin V/PI双染法在流式细胞仪检测药物对细胞凋亡的影响,采用PI/RNase法在流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响,采用线粒体压力及糖酵解压力测试方法在Seahorse XF细胞外流量分析仪检测药物对细胞糖代谢及有氧呼吸的影响,系统比较山豆根及苦参碱（山豆根水提物含5%左右的苦参碱）在不同时间与浓度对人正常细胞l-02的增殖的影响以及15hr对l-02细胞凋亡、细胞周期及细胞代谢的影响。结果:（1）山豆根水提物及苦参碱均抑制l-02细胞增殖,具有毒时关系及量效关系,IC50分别为10.95mg/ml、2.19mg/ml。（2）二者均能诱导l-02细胞的凋亡,与细胞共孵育15h后,和空白对照组相比,山豆根水提物12、18 mg/ml组以诱导早期凋亡为主,凋亡比例分别为13.62%,14.89%;而20mg/ml组细胞则主要表现为晚期凋亡,凋亡比例为20.52%;苦参碱在浓度为1、1.33 mg/ml没有明显凋亡,1.67、2 mg/ml早期凋亡比例分别为17.27%和32.83%。（3）山豆根在浓度8、12、18和20 mg/ml时,G2/M期细胞的比例分别为17.3%,31.6%,23.40%和18.89%,明显高于对照组（8.6%,p＜0.05）,提示G2/M期阻滞。同时随着山豆根的浓度增加,细胞S期延长（S期细胞比例分别为10.76%,15.77%,23.49%,27.11%,对照组为14.87%）。苦参碱浓度为1、1.33、1.67mg/ml时G0/G1期细胞约85%,明显高于对照组（76%, p＜0.05）,提示低浓度的苦参碱导致G0/G1期阻滞。高浓度2mg/ml时, G2/M期细胞比例25.43%, S期21.14%,明显高于对照组（8.6%、14.87%）,提示高浓度苦参碱可导致G2/M期阻滞,S期延长。（4）苦参碱各浓度和高浓度山豆根（18和20 mg/ml）处理l-02细胞后,对细胞糖代谢的能力和有氧呼吸产生影响,具体来说,山豆根和苦参碱能够抑制l-02细胞的有氧呼吸和糖酵解过程,而且随着药物浓度的增加,抑制效果更明显,进而产生细胞毒性影响细胞整体的生长状态。结论:山豆根及苦参碱均能对人肝细胞l-02产生毒性,通过诱导细胞凋亡和阻滞生长周期来抑制细胞生长,其诱导凋亡的机制可能和影响了线粒体的能量代谢有关。与l-02细胞孵育15h,山豆根及苦参碱的IC50分别为10.50mg/ml,2.19mg/ml。对应浓度下,山豆根对l-02细胞的毒性作用似强于苦参碱。

关键词：山豆根苦参碱人正常肝细胞l-02 细胞凋亡细胞能量代谢

来源： cnki会议评论

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时珍国医国药 2015年第2期26卷 322-327页

作者：冯冬茹蒋婷蔡懿谢衡李若达郑光耀王金发王宏斌中山大学生命科学学院教育部基因工程重点实验室广东广州510275 广东嵩珍营养源研究所广东广州510645

目的体外探讨马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract,PMBE)对四氯化碳(CCl4)损伤人正常肝细胞(l-02)的保护作用及其对血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,细胞形态观... 详细信息

目的体外探讨马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract,PMBE)对四氯化碳(CCl4)损伤人正常肝细胞(l-02)的保护作用及其对血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,细胞形态观察、荧光染色、Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,对细胞内丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性、培养上清液中谷草转氨酶(AST)和丙谷转氨酶(AlT)水平分别进行检测,酶联免疫吸附法(ElISA)、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)及Western免疫印迹法检测细胞内HO-1活性、HO-1 m RNA及蛋白表达情况。结果与CCl4损伤组比较,PMBE预处理组细胞存活率、GSH含量和相关抗氧化酶类水平升高,细胞凋亡和坏死比率、MDA含量及上清液中AST和AlT活性降低,HO-1活性、HO-1 m RNA和蛋白表达水平均上调,但与CCl4损伤组无明显差异。结论 PMBE对CCl4损伤l-02细胞有保护作用,其机制可能与HO-1的表达密切相关。

关键词：马尾松树皮提取物人正常肝细胞l-02 四氯化碳血红素加氧酶-1 肝损伤

当归多糖对肝细胞Hepcidin表达的影响

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中国老年学杂志 2018年第19期38卷 4749-4751页

作者：任峰李健贺国洋贾昭华千新来新乡医学院护理学院河南新乡453003 新乡医学院法医学系新乡医学院病理学教研室

目的探讨当归多糖(ASP)对人肝癌细胞Hep G2和人正常肝细胞l-02 Hepcidin表达的抑制作用。方法体外培养Hep G2和l-02细胞,RT-PCR检测不同浓度(0、100、200、400 mg/l)的ASP诱导不同时间(0、24、48、72 h和96 h)对两种细胞Hepcidin mRNA... 详细信息

目的探讨当归多糖(ASP)对人肝癌细胞Hep G2和人正常肝细胞l-02 Hepcidin表达的抑制作用。方法体外培养Hep G2和l-02细胞,RT-PCR检测不同浓度(0、100、200、400 mg/l)的ASP诱导不同时间(0、24、48、72 h和96 h)对两种细胞Hepcidin mRNA影响。Western印迹观察400 mg/l ASP诱导96 h对两种细胞Hepcidin表达的抑制作用。结果与对照组(0 mg/l)相比,浓度高于200 mg/l ASP能够显著下调Hep G2和l-02细胞Hepcidin mRNA表达(Pl ASP连续作用48 h后对Hep G2和l-02细胞产生显著的Hepcidin抑制效应且抑制强度呈时间相关性; 400 mg/l ASP连续作用96 h后显著抑制Hep G2和l-02细胞Hepcidin表达(Pl-02细胞中Hepcidin的表达。

关键词：当归多糖 Hepcidin 人肝癌细胞HepG2 人正常肝细胞l-02

酪丝亮肽对线粒体损伤介导的肝癌细胞的凋亡作用

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酪丝亮肽对线粒体损伤介导的肝癌细胞的凋亡作用

作者：刘萍天津医科大学

学位级别：硕士

目的：观察三肽化合物酪丝亮肽(YSl)的抗肿瘤作用，初步探讨其影响肝癌细胞线粒体功能，诱导细胞凋亡的可能机制。方法：1．应用MTT法观察YSl体外对人肝癌BEl-7402细胞和人正常肝细胞l-02的细胞增殖的影响。2．应用流式细胞术分析YSl体... 详细信息

目的：观察三肽化合物酪丝亮肽(YSl)的抗肿瘤作用，初步探讨其影响肝癌细胞线粒体功能，诱导细胞凋亡的可能机制。方法：1．应用MTT法观察YSl体外对人肝癌BEl-7402细胞和人正常肝细胞l-02的细胞增殖的影响。2．应用流式细胞术分析YSl体外对人肝癌细胞BEl-7402和人正常肝细胞l-02细胞诱导凋亡作用，应用透射电镜观察YSl对肝癌细胞超微结构的影响。3．应用酶化学法观察YSl体外对人肝癌BEl-7402细胞和人正常肝细胞l-02的线粒体呼吸链复合体Ⅳ酶活性的影响。4．应用流式细胞术观察YSl体外对人肝癌细胞BEl-7402和人正常肝细胞l-02细胞线粒体膜电位的影响。5．Western Blot方法分析YSl体外对人肝癌细胞BEl-7402和人正常肝细胞l-02内促凋亡物质活性caspase-3蛋白含量的影响。结果：1．YSl在体外给药剂量为0.01-100μg／ml时，能够抑制人肝癌BEl-7402细胞增殖，以1μg／ml和10μg／ml的作用效果最佳，作用48hrs后抑制率分别为27.75％、28.47％。YSl对人正常肝细胞l-02的体外增殖无明显影响。2．YSl对体外培养的人肝癌细胞BEl-7402有较明显的促凋亡和死亡作用，YSl浓度为1μg／ml、10μg／ml作用48hrs后其早期凋亡率分别为19.95％和20.18％，死亡率分别为47.42％和40.51％，明显高于对照组(P＜0.05)。YSl对人正常肝细胞l-02的凋亡和死亡未见明显影响。超微结构研究显示YSl体外可引起BEl-7402细胞凋亡和死亡，胞浆明显肿胀、水肿，线粒体和粗面内质网崩解，扩张的内质网中有散在的钙颗粒。3．YSl可以显著降低人肝癌BEl-7402细胞线粒体酶复合体Ⅳ的活性，作用48hrs后，YSl(1μg／ml、10μg／ml)组复合体Ⅳ酶活性分别为3.82μmol／min／mg pro和3.58μmol／min／mg pro，与对照组相比明显降低(P＜0.05)。而YSl对人正常肝细胞l-02细胞线粒体复合体Ⅳ酶活性没有明显影响(P＞0.05)。4．YSl(1μg／ml、10μg／ml)可以显著降低人肝癌细胞BEl-7402细胞线粒体膜电位，药物作用0.5hr时，线粒体膜电位没有明显变化，作用1hr后线粒体膜电位开始下降。在48hrs的观测时期内，各观测时间点测得的表示线粒体膜电位的荧光强度值均明显低于对照(P＜0.05)。YSl体外对人正常肝细胞l-02线粒体膜电位未见明显影响。5．YSl(1μg／ml、10μg／ml)作用48hrs后，能明显增加体外培养人肝癌BEl-7402细胞中促凋亡物质活性caspase-3的蛋白含量，而对正常肝细胞l-02中的活性caspase-3则未见明显影响。结论：酪丝亮肽能特异性抑制人肝癌BEl-7402细胞线粒体呼吸链复合体Ⅳ的酶活性，降低细胞线粒体膜电位，损伤肿瘤细胞线粒体，增加细胞内促凋亡物质活性caspase-3的产生，诱导BEl-7402细胞凋亡。对正常肝细胞l-02的上述指标则没有明显影响。

关键词：酪丝亮肽(YSl) 人肝癌细胞BEl-7402 人正常肝细胞l-02 细胞凋亡线粒体膜电位线粒体呼吸链复合体IV caspase-3

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虎杖炮炙品及热炎宁合剂肝毒性研究

虎杖炮炙品及热炎宁合剂肝毒性研究

作者：席鹏河南中医药大学

学位级别：硕士

目的:虎杖生品、虎杖醋炙品、虎杖酒炙品、虎杖盐炙品、虎杖苷、虎杖蒽醌、热炎宁合剂、热炎宁合剂(不含虎杖)以小鼠可灌服最大浓度进行灌胃给药,观察灌胃后药物对小鼠的影响;运用RTCA技术及HCA技术检测虎杖经过炮制后及配伍后是否具减... 详细信息

目的:虎杖生品、虎杖醋炙品、虎杖酒炙品、虎杖盐炙品、虎杖苷、虎杖蒽醌、热炎宁合剂、热炎宁合剂(不含虎杖)以小鼠可灌服最大浓度进行灌胃给药,观察灌胃后药物对小鼠的影响;运用RTCA技术及HCA技术检测虎杖经过炮制后及配伍后是否具减毒作用;运用RTCA技术及HCA技术检测虎杖中虎杖苷以及虎杖蒽醌的毒性;使用倒置显微镜观察对照孔、阳性孔、虎杖生品、虎杖醋炙品、虎杖酒炙品、虎杖盐炙品、虎杖苷、虎杖蒽醌、热炎宁合剂、热炎宁合剂(不含虎杖)作用于人正常肝细胞l-02 24h后对细胞形态学的影响。方法:虎杖炮炙品及热炎宁合剂急性毒性实验:取虎杖生品、虎杖醋炙品、虎杖酒炙品、虎杖盐炙品、热炎宁合剂、热炎宁(不含虎杖)、虎杖苷、虎杖蒽醌8种药物,以小鼠可灌服最大浓度进行灌胃给药,给药体积0.4ml/10g,一天内(间隔8小时)给药3次,连续14天观察小鼠给药后饮食、排泄等情况并计算lD,最后进行一般解剖尸检,观察各器官有无改变;肉眼观察心脏、肺、胃、小肠、肝脏、肾脏及脾脏,对有变化的脏器需进行组织病理学检查。RTCA检测虎杖炮炙品及热炎宁合剂对人正常肝细胞l-02毒性实验:用10%FBS DMEM培养液稀释细胞悬液密度到6×10个/ml,于E-16plate中每孔加入100μl细胞悬液,大约24h后每孔加入相应浓度药物,对照孔加入10%FBS DMEM培养液,阳性孔加入对1.25mg/ml乙酰氨基酚溶液,放回三气培养箱连续检测56小时。形态学观察实验:用10%FBS DMEM培养液调整细胞悬液浓度为6×10个/ml,于96孔板中每孔加入100μl人正常肝细胞l-02悬液,大约24h后每孔加入相应浓度的药物,对照孔加入DMEM培养液,阳性孔加入1.25mg/ml对乙酰氨基酚溶液,放回三气培养箱继续培养24h后,用无菌PBS溶液轻轻清洗每孔,然后在倒置显微镜10X物镜下观察细胞形态学的变化。HCA评价虎杖炮炙品及热炎宁合剂对人正常肝细胞l-02毒性实验:用10%FBS DMEM培养液稀释细胞悬液密度到6×10个/ml,96孔板中每孔加入100μl细胞悬液,大约24h后每孔加入相应浓度药物,对照孔加入10%FBS DMEM培养液,阳性孔加入对1.25mg/ml乙酰氨基酚溶液,放回三气培养箱连续培养24h,吸弃药液及培养基,加入探针孵育30min,上机检测。结果:虎杖及热炎宁合剂急性毒性实验:虎杖生品、虎杖醋炙品、虎杖盐炙品、虎杖酒炙品、热炎宁合剂、热炎宁合剂(不含虎杖)、虎杖苷、虎杖蒽醌毒性较小,以小鼠可灌服的最大浓度以最大灌胃体积灌胃给药,各组小鼠未出现死亡,每日积累最大耐受量(MTD)分别为799.2g/kg、944.4g/kg、968.4g/kg、912g/kg、817.2g/kg、558g/kg、75.6g/kg、96g/kg,各给药组体重与空白组相比无显著性差异。RTCA技术检测虎杖炮炙品及热炎宁合剂对人正常肝细胞l-02的毒性实验:虎杖生品与蒲公英、北败酱、半枝莲配伍的复方制剂热炎宁合剂的毒性小于虎杖生品的毒性,热炎宁的毒性大于热炎宁(不含虎杖)的毒性,作用于人正常肝细胞l-02 24小时,IC分别为13.08mg/ml、11.81mg/ml、13.32mg/ml,作用于人正常肝细胞l-02 48h,IC分别为12.44mg/ml、,11.97mg/ml、13.14mg/ml。虎杖经过炮制后其毒性降低,醋炙品、酒炙品、盐炙品作用人正常肝细胞l-02 24h,IC分别为12.15mg/ml、15.23mg/ml、31.26mg/ml;作用于人正常肝细l-02 48h,IC分别为12.00mg/ml、16.10mg/ml、69.97mg/ml。通过对比分析可以得出毒性大小:生品>醋炙品>酒炙品>盐炙品;虎杖苷与虎杖蒽醌作用于人正常肝细胞l-02 IC分别为,24h为263.05μg/ml、50.62mg/ml;48h为264.25μg/ml、52.81mg/ml。细胞形态学观察:在倒置显微镜10X物镜下观察,与对照孔相比较,阳性孔显著抑制细胞的增殖,虎杖生品、虎杖醋炙品、虎杖酒炙品、虎杖盐炙品、热炎宁合剂(不含虎杖)、热炎宁合剂、虎杖苷、虎杖蒽醌类均呈现随着药物浓度增加细胞数量显著减少,形态发生明显变化。HCA评价虎杖炮炙品及热炎宁合剂对人正常肝细胞l-02毒性实验:虎杖生品、虎杖醋炙品、虎杖酒炙品、虎杖盐炙品、虎杖苷混悬液、虎杖蒽醌、热炎宁合剂、热炎宁合剂(不含虎杖)作用于人正常肝细胞24h,与阴性孔相比较,药物作用后,细胞数目减少,线粒体膜电位降低、细胞面积变小,且具有梯度依赖性。结论:虎杖炮炙品及热炎宁合剂无明显急性毒性反应;虎杖经过炮制和配伍后其毒性均降低。

关键词：虎杖人正常肝细胞l-02 RTCA IC50 HCA