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紫外线照射对人晶状体上皮细胞内ALDH1蛋白表达的影响

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中南大学学报（医学版） 2012年第6期37卷 572-577页

作者：石晶明贾松柏陈翾唐罗生中南大学湘雅二医院眼科长沙410011

目的:通过对紫外线(ultraviolet,UV)照射后人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)ALDH1蛋白表达变化的观察,探讨UV诱导HLEC凋亡的可能机制。方法:以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一UV光源对HLEC进行照射。按UV... 详细信息

目的:通过对紫外线(ultraviolet,UV)照射后人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)ALDH1蛋白表达变化的观察,探讨UV诱导HLEC凋亡的可能机制。方法:以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一UV光源对HLEC进行照射。按UV照射时间将HLEC分为0,5,10,15及30 min组,用AO/EB染色法检测细胞凋亡,用免疫组织化学的方法观察ALDH1在各组的表达,用Western印迹对其蛋白含量进行测定。结果:ALDH1免疫组织化学染色阳性细胞率随着UV照射时间延长而降低(P<0.05),与HLEC凋亡率间呈负相关(r=–0.92,P<0.05);Western印迹灰度值随UV照射时间延长逐渐下降(P<0.05)。结论:HLEC内ALDH1含量随UV照射时间及剂量增加而下降,这可能与UV导致的HLEC凋亡相关。

关键词：紫外线人晶状体上皮细胞醛脱氢酶1 凋亡白内障

小干扰RNA-Pax6对人晶状体上皮细胞生物学行为和上皮-间质转化的抑制作用

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中华实验眼科杂志 2022年第6期40卷 499-506页

作者：郑宇星杨筱曦易果果吴淑端冯志贞夏朝霞中山大学附属第六医院眼科广州510655

目的探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组,siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6,siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率;转染后48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例;转染后24 h,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率;转染后48 h,采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。结果2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义(F_(分组)=4.776,P细胞存活率均明显低于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(均P细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,差异均有统计学意义(t=9.971、-5.063,均P细胞迁移率为(19.73±6.07)%,低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%,差异有统计学意义(t=-7.245,P细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组,E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(t=-23.254、-5.294、6.062,均P细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(t=5.521、8.270,均P细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01,低于siRNA-NC组的1.00±0.05,差异有统计学意义(t=-14.456,P细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05,低于siRNA-NC组的1.14±0.10,差异有统计学意义(t=-4.458,P人LECs的增生及EMT过程,维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。

关键词：小干扰RNA 人类同源配对盒基因6 后发性白内障人晶状体上皮细胞上皮-间质转化

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地塞米松对人晶状体上皮细胞核转录因子κB及其抑制蛋白α的表达和细胞凋亡的影响

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中华实验眼科杂志 2011年第2期29卷 145-150页

作者：王钧蔚王林葛红岩刘平哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院 150001

背景长期全身或眼局部应用糖皮质激素可诱导皮质类固醇性白内障，但其作用机制尚不明确。目的研究地塞米松作用于人晶状体上皮细胞（LECs）后对LECs中核转录因子κB（NF—κB）／NF—κB抑制蛋白κ（IκBκ）表达的影响及LECs凋亡的发... 详细信息

背景长期全身或眼局部应用糖皮质激素可诱导皮质类固醇性白内障，但其作用机制尚不明确。目的研究地塞米松作用于人晶状体上皮细胞（LECs）后对LECs中核转录因子κB（NF—κB）／NF—κB抑制蛋白κ（IκBκ）表达的影响及LECs凋亡的发生情况，了解皮质类固醇性白内障的发病机制。方法取人LECs系（HLE283）在含质量分数20％胎牛血清的DMEM中进行培养和传代。将不同浓度的地塞米松（0．01、0．1、1、10、100μmol／L）分别加入DMSO无血清DMEM培养液中作为不同浓度地塞米松组，不含地塞米松的DMSO无血清DMEM培养液培养的LECs作为空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、Western blot、流式细胞术等方法，分别在基因水平、蛋白水平检测LECs中NF—κB／IκB α浓度的改变及LECs凋亡率的变化。结果扩增的基因片段与所设计片段大小一致。地塞米松作用后NF—α核蛋白在LECs中的表达量随着地塞米松浓度的增加而下降，差异有统计学意义（F=36．077，P=0．004）；IκBα蛋白的表达随着地塞米松浓度的增加而上升，差异有统计学意义（F=35．741，P=0．002）。在同浓度地塞米松组，NF—κB核蛋白在LECs中的表达量随作用时间的不同差异有统计学意义（F=16．606，P=0．01），与地塞米松作用24h时的表达量比较，36h和48h时的NF—κB核蛋白表达量明显下降，差异有统计学意义（P=0．002；P=0．01）。与地塞米松作用24h时的表达量比较，36h和48hIκBα蛋白在LECs中的表达量明显增加，差异均有统计学意义（P=0．014；P=0．002）。流式细胞仪检测显示LECs的凋亡率随着地塞米松浓度的增加明显上升，与空白对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论地塞米松通过上调IκBα的表达而过度抑制了NF—κB的活性，并导致LECs凋亡，其作用呈浓度依赖性，这可能是皮质类固醇性白内障发生发展的细胞学和分子生物学机制之一。

关键词：皮质类固醇性白内障地塞米松核转录因子κB 核转录因子κB抑制蛋白α 凋亡人晶状体上皮细胞

石斛酚在人晶状体上皮细胞中跨膜吸收机制研究

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中国中药杂志 2023年第7期48卷 1936-1942页

作者：胡小红魏小勇广州中医药大学基础医学院广东广州510006

石斛酚为中药石斛的酚类成分,具有抗肿瘤、抗糖尿病性白内障等多种药理活性。该文探索其在人晶状体上皮细胞(HLECs)中跨膜转运的分子机制。体外培养永生化的HLECs,按5000个/mL细胞接种于激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)培养皿中,通过LSCM观... 详细信息

石斛酚为中药石斛的酚类成分,具有抗肿瘤、抗糖尿病性白内障等多种药理活性。该文探索其在人晶状体上皮细胞(HLECs)中跨膜转运的分子机制。体外培养永生化的HLECs,按5000个/mL细胞接种于激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)培养皿中,通过LSCM观察荧光标记的石斛酚在HLECs内的荧光分布和荧光强度,以荧光强度表示石斛酚的吸收量,监测石斛酚在HLECs内的跨膜转运过程,比较时间、温度、浓度、转运抑制剂以及不同细胞系对石斛酚跨膜吸收和转运的影响;HLECs接种于6孔培养板的爬片上,原子力显微镜(AFM)检测非荧光标记的石斛酚跨膜吸收过程中HLECs表面超微结构的变化。结果显示,石斛酚跨膜吸收存在时间、温度、浓度依赖性,并能够专一性地靶向识别HLECs;能量及载体转运抑制剂降低HLECs对石斛酚的吸收量;在石斛酚跨膜过程中,HLECs细胞膜表面变得更粗糙,并呈现不同程度的凹坑。结果表明,石斛酚跨膜转运方式是通过能量及载体介导的胞吞作用主动吸收实现的。

关键词：石斛酚跨膜转运转运方式人晶状体上皮细胞

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紫外线对人晶状体上皮细胞凋亡的诱导及Bcl-2,Bax基因的影响

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中南大学学报（医学版） 2012年第7期37卷 730-736页

作者：贾松柏石晶明陈翾唐罗生中南大学湘雅二医院眼科长沙410011

目的:研究紫外线照射体外培养人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)对凋亡的诱导、凋亡调控基因(Bax,Bcl-2)表达的变化,探讨紫外线诱导HLEC凋亡的机制。方法:以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一紫外线光源对HLE... 详细信息

目的:研究紫外线照射体外培养人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)对凋亡的诱导、凋亡调控基因(Bax,Bcl-2)表达的变化,探讨紫外线诱导HLEC凋亡的机制。方法:以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一紫外线光源对HLEC进行照射。按紫外线照射时间将HLEC分为0,5,10,15及30 min组。采用Annexin V+PI双染流式细胞计数对HLEC凋亡进行检测,用原位杂交的方法检测各组Bax,Bcl-2 mRNA的表达。结果:随紫外线照射时间的延长HLEC凋亡率增加,Bcl-2阳性细胞率逐渐降低;而Bax阳性细胞率逐渐增加。HLEC凋亡率与Bcl-2和Bax的比率呈负相关(r=-0.874,P<0.05)。结论:紫外线照射可诱导HLEC凋亡,Bax和Bcl-2可能参与了紫外线诱导的HLEC凋亡的基因调控过程。

关键词：紫外线人晶状体上皮细胞白内障凋亡 Bax Bcl-2

紫外线对人晶状体上皮细胞端粒酶活性和氧化损伤蛋白表达水平的影响

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中华眼科杂志 2005年第5期41卷 459-463页

作者：吴志鸿张劲松中国医科大学附属第一医院眼科沈阳110001

目的探讨在紫外线诱导的人晶状体上皮细胞DNA损伤修复过程中端粒酶活性和氧化损伤蛋白的变化和作用.方法采用照射剂量为0.0(对照组)及0.5、1.5、2.5、3.5、5.0、7.5、10.0 mJ/cm2(实验1～7组)的紫外线照射人晶状体上皮细胞,采用端粒酶... 详细信息

目的探讨在紫外线诱导的人晶状体上皮细胞DNA损伤修复过程中端粒酶活性和氧化损伤蛋白的变化和作用.方法采用照射剂量为0.0(对照组)及0.5、1.5、2.5、3.5、5.0、7.5、10.0 mJ/cm2(实验1～7组)的紫外线照射人晶状体上皮细胞,采用端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法检测端粒酶活性,采用免疫印迹法检测p53、DNA损伤诱导生长停顿基因(GADD45)、增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期依赖激酶抑制剂p16的蛋白表达水平.结果对照组和实验1～7组的端粒酶活性呈上调趋势,8组比较差异有统计学意义(F=45.65,P人晶状体上皮细胞DNA损伤修复过程中,端粒酶活性上调,氧化损伤蛋白的表达水平上升.端粒酶活性的上调既加强了保护细胞的作用,又增强了增殖作用;氧化损伤蛋白表达水平的提高在紫外线诱导的人晶状体上皮细胞DNA损伤修复过程中挥关键作用;端粒酶活性上调与氧化损伤蛋白表达水平提高有关.

关键词：蛋白表达水平氧化损伤细胞端粒酶活性增殖细胞核抗原(PCNA) 细胞周期依赖激酶抑制剂细胞DNA损伤酶联免疫吸附测定法人晶状体上皮细胞紫外线诱导修复过程重复序列扩增紫外线照射免疫印迹法对照组照射剂量上升趋势

circZNF292靶向miR-23b-3p/SIRT1轴调节人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的机制分析

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眼科新进展 2022年第7期42卷 514-519页

作者：邢媛鲍宁安徽医科大学第二附属医院眼科安徽省合肥市230601

目的探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞(LECs)氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法收集单纯年龄相关性白内障(ARC)患眼的晶状体前囊膜组织(ARC组)和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织(对照组)各3例,进行RNA提取及... 详细信息

目的探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞(LECs)氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法收集单纯年龄相关性白内障(ARC)患眼的晶状体前囊膜组织(ARC组)和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织(对照组)各3例,进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染,48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)含量。结果ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证,最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显;且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关(r=-0.935,-0.951,均为P细胞活力、细胞凋亡率及ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。应用H_(2)O_(2)刺激后,与NC siRNA组相比,NC siRNA组+H_(2)O_(2) HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高(均为P细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低(均为P细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H_(2)O_(2)均进一步升高(均为P细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低(均为P人LECs氧化应激损伤,从而有望为ARC提供新的治疗靶标。

关键词： circZNF292 miR-23b-3p SIRT1基因人晶状体上皮细胞氧化应激损伤

紫外线B照射对人晶状体上皮细胞质膜钙ATP酶3表达的影响

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中华实验眼科杂志 2014年第6期32卷 485-491页

作者：吴秋欣郭大东毕宏生王道光山东中医药大学附属眼科医院山东中医药大学第二附属医院山东中医药大学济南250002 山东省高校中西医结合眼病防治技术重点实验室山东中医药大学眼科研究所济南250002 山东中医院大学第二临床学院济南250014

背景细胞质膜钙ATP酶3（PMCA3）参与维持晶状体上皮细胞（LECs） Ca2＋的平衡,可能与白内障的病理过程有关,紫外线B（UVB）是引起白内障的重要因素之一,但UVB对LECs中PMCA3表达的影响少有报道. 目的研究UVB对人LECs系B-3（HLE B-3） P... 详细信息

背景细胞质膜钙ATP酶3（PMCA3）参与维持晶状体上皮细胞（LECs） Ca2＋的平衡,可能与白内障的病理过程有关,紫外线B（UVB）是引起白内障的重要因素之一,但UVB对LECs中PMCA3表达的影响少有报道. 目的研究UVB对人LECs系B-3（HLE B-3） PMCA3表达的影响. 方法对HLE B-3细胞进行培养和传代,当细胞达80％以上融合时分别暴露于用不同剂量（0、5、10、20 mJ·s/cm2）的UVB分别照射0、20、40和80 s,然后继续培养24、48和72 h,用MTT法检测不同剂量UVB照射后细胞的生存率;用JC-1染色法检测UVB照射后细胞线粒体膜电位（△ψm）的变化;以DCFH-DA染色法检测UVB照射后细胞内活性氧簇（ROS）的变化;采用annexin V-FITC/PI染色法检测UVB照射后细胞的凋亡情况;用Fluo-3/AM染色法检测细胞内Ca2＋浓度的变化;分别采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）法和Western blot法检测UVB照射后细胞中PMCA3 mRNA及PMCA蛋白的表达变化. 结果随着UVB照射剂量的增加和照射时间的延长,细胞生存率均明显下降,差异均有统计学意义（F分组=72.411,P=0.000; F时间=36.588,P=0.000）,其中10 mJ·s/cm2、20 mJ·s/cm2 UVB照射后24 h HLE B-3细胞的生存率分别为（75.3±2.2）％和（48.7±4.5）％,明显低于对照组的（100.0±0.0）％,差异均有统计学意义（P=0.001、0.000）;5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后48 h细胞的生存率分别为（84.9±1.2）％、（69.3±17.4）％和（32.8±4.5）％,均明显低于对照组的（100.0±0.0）％,差异均有统计学意义（P=0.047、0.000、0.000）;5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后72 h细胞的生存率分别为（55.1±3.0）％、（42.1±1.9）％和（26.1±4.7）％,与对照组的（100.0±0.0）％相比生存率明显降低,差异均有统计学意义（均P=0.000）.JC-1染色法检测表明,对照组细胞内可见红色荧光,5mJ·s/cm2 UVB照射后细胞内出现绿色荧光,10 mJ·s/cm2及20 mJ·s/cm2 UVB照射组出现绿色荧光增强,红色荧光减弱.5、10、20 mJ· s/cm2 UVB照射后细胞内的ROS由0.4％分别增加至35.8％、51.9％和76.7％.0 mJ·s/cm2 UVB照射组凋亡和坏死细胞比例为2.0％,5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射组凋亡和坏死细胞率分别为4.2％、7.6％和15.1％.10 mJ·s/cm2和20 mJ·s/cm2 UVB照射组细胞内Ca2＋水平分别为0 mJ·s/cm2照射组的（1.2±0.1）倍和（1.3±0.1）倍,差异均有统计学意义（P=0.039、0.004）.5、10和20 mJ·s/cm2 UVB照射组HLE B-3细胞PMCA3 mRNA表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义（P=0.001、0.004、0.000）,各组细胞中的PMCA蛋白相对表达量也均明显低于对照组,差异均有统计学意义（P=0.000、0.000、0.001）. 结论 UVB照射可导致白内障发生的机制可能与人LECs中PMCA3表达量下降和诱导LECs凋亡有关,UVB的作用呈剂量和时间依赖性.

关键词：紫外线B 钙稳态质膜钙ATP酶3 细胞凋亡人晶状体上皮细胞

MicroRNA-34a通过上调Cdc42和Rac1促进人晶状体上皮细胞衰老和凋亡

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国际眼科杂志 2020年第5期20卷 768-772页

作者：兰文陈志钧周璐南京医科大学附属儿童医院眼科中国江苏省南京市210000

目的:观察MicroRNA-34a对人晶状体上皮细胞系SRA01/04衰老和凋亡的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测年龄相关性白内障(ARC)晶状体和透明晶状体上皮细胞中MicroRNA-34a表达水平,采用脂质体转染试剂盒将MicroRNA-34a mimics(过表达组)、M... 详细信息

目的:观察MicroRNA-34a对人晶状体上皮细胞系SRA01/04衰老和凋亡的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测年龄相关性白内障(ARC)晶状体和透明晶状体上皮细胞中MicroRNA-34a表达水平,采用脂质体转染试剂盒将MicroRNA-34a mimics(过表达组)、MicroRNA-34a inhibitors(抑制组)和空脂质体(对照组)转染至SRA01/04细胞,qRT-PCR检测MicroRNA-34a的表达量;采用β-半乳糖苷酸(SA-β-gal)染色检测转染后细胞的衰老情况。Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测MicroRNA-34a对人晶状体细胞系SRA01/04细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹检测Cdc42、Rac1蛋白的表达。结果:透明晶状体前囊膜组织中MicroRNA-34a的表达量显著低于ARC晶状体前囊膜组织(P细胞凋亡率分别为(5.87±1.22)%、(12.26±2.14)%、(29.45±3.12)%,MicroRNA-34a抑制组细胞凋亡率明显低于对照组,而MicroRNA-34a过表达组细胞凋亡率明显高于对照组(P人晶状体上皮细胞衰老和凋亡。

关键词： MicroRNA-34a 人晶状体上皮细胞 Cdc42 Rac1 衰老凋亡