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邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对离体人成熟精子功能的影响

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中国细胞生物学学报 2015年第10期37卷 1394-1399页

作者：陈雯罗韬南昌大学高等研究院南昌330031 南昌大学生命科学研究院南昌330031

该文研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]在体外对人成熟精子功能的影响。用0,0.1,1,10,100μmol/L DEHP处理离体人成熟精子后,利用伊红苯胺黑染色、计算机辅助精子分析系统、精子穿甲基纤维素实验、金霉... 详细信息

该文研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]在体外对人成熟精子功能的影响。用0,0.1,1,10,100μmol/L DEHP处理离体人成熟精子后,利用伊红苯胺黑染色、计算机辅助精子分析系统、精子穿甲基纤维素实验、金霉素染色等方法检测精子存活率、运动、超活化、获能、顶体反应等生理功能。结果显示,DEHP在短时间内不影响精子存活率,但是抑制精子运动、超活化以及孕酮诱导的获能和顶体反应。推测DEHP体外急性染毒会抑制人成熟精子功能。

关键词：邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯人成熟精子运动超活化顶体反应

人免疫缺陷病毒-1 gag基因在人成熟精子中的表达

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癌变．畸变．突变 2010年第6期22卷 455-457,461页

作者：王典康祥锦谢庆东黄天华汕头大学医学院生殖医学研究中心汕头大学医学院法医学教研室广东汕头515041

目的:探讨人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)gag基因在人成熟精子中实现mRNA水平表达的可能性。方法:构建含HIV-1gag基因DNA的质粒,转染入人成熟精子,培养24 h后用RT-PCR法检测精子gag mRNA的表达。结果:在转染质粒后的人成熟精子中检测到HIV-1 g... 详细信息

目的:探讨人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)gag基因在人成熟精子中实现mRNA水平表达的可能性。方法:构建含HIV-1gag基因DNA的质粒,转染入人成熟精子,培养24 h后用RT-PCR法检测精子gag mRNA的表达。结果:在转染质粒后的人成熟精子中检测到HIV-1 gag mRNA的表达。结论:HIV基因可在人成熟精子中实现mRNA水平的表达。

关键词：人免疫缺陷病毒-1 人成熟精子 mRNA

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胞外ADP作用人成熟精子的机制研究

胞外ADP作用人成熟精子的机制研究

作者：王强南昌大学

学位级别：硕士

人成熟精子进入女性生殖道后,需要经历一系列生理生化过程,包括获能、超活化运动、趋化运动和顶体反应等,最终才能和卵细胞结合形成受精卵。其中,雌性生殖道内的生理因子是调节上述生理生化过程的重要因素。有研究表明,胞外ATP(ATPe)对... 详细信息

人成熟精子进入女性生殖道后,需要经历一系列生理生化过程,包括获能、超活化运动、趋化运动和顶体反应等,最终才能和卵细胞结合形成受精卵。其中,雌性生殖道内的生理因子是调节上述生理生化过程的重要因素。有研究表明,胞外ATP(ATPe)对人成熟精子的运动、超活化运动和顶体反应均有显著影响。ADP是一种ATP的天然代谢物,胞外ADP(ADPe)是否影响人精子的生理功能以及相关的机制目前都尚未探究。钙离子在精子功能调节中发挥重要作用的第二信使。利用多功能酶标仪检测胞内Ca浓度([Ca]),本课题首先考察了ADPe对人精子[Ca]的影响。结果表明,ADPe(50,100,200,500,1000,2500μM)浓度依赖性的增加人精子[Ca],并在1000μM处达到饱和。利用Ca螯合剂BAPTA使精子处在无钙环境中,ADPe不能引起[Ca]增加,表明ADPe引起的[Ca]增加是由外Ca内流导致。由于P2Y受体是与ADPe结合的膜受体,本课题通过western-blot检测发现人成熟精子中P2Y(1,2,13,14)受体表达,而广谱型P2Y受体抑制剂suramin和PPADs显著抑制ADPe诱导的精子[Ca]增加。进一步考察P2Y(1,2,13,14)抗体对ADPe所诱导的人精子[Ca]增加的影响,结果显示只有P2Y13抗体体现出显著的抑制作用,提示P2Y13受体介导了ADPe导致的人精子[Ca]增加。P2Y13受体作为一种G蛋白偶联受体,并不能直接介导Ca内流。基于CatSper是目前已知的唯一公认的精子特异性钙离子通道,本课题进一步研究ADPe所导致的人精子[Ca]增加是否由CatSper介导。膜片钳检测结果表明,ADPe显著的增加CatSper电流,而P2Y受体的抑制剂PPADs和suramin、以及P2Y13抗体均能显著的抑制ADPe导致的CatSper电流增加。此结果表明:ADPe与P2Y13结合后通过激活CatSper通道而导致了人精子[Ca]升高。然而,其中P2Y13活化后如何激活CatSper的信号机制仍有待进一步研究。本课题还考察了ADPe对人成熟精子功能的影响,发现上述浓度的ADPe能促进人成熟精子的超活化运动,表明ADPe导致[Ca]增加具有显著的生理效应,也与CatSper是调控精子超活化运动的主要分子的观点一致。综上所述,ADPe通过激活人成熟精子细胞膜表面的P2Y13受体,继而激活CatSper通道,使[Ca]显著增加。与此同时,ADPe促进人成熟精子超活化。本课题对深入认识生理条件下胞外ATP/ADP在受精过程中的作用与机制具有重要意义。

关键词：胞外ADP 人成熟精子 P2Y13受体 CatSper 超活化运动

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胞外ATP作用人成熟精子的机制研究

胞外ATP作用人成熟精子的机制研究

作者：邹乾兴南昌大学

学位级别：硕士

人成熟精子进入女性生殖道后,需经历一系列生理生化变化过程包括获能、超活化运动和顶体反应等,最终才能与卵细胞完成受精。精子这些生理过程受到女性生殖道内多种生理因子的调控。其中,胞外ATP(ATPe)作为一种重要的生理调节因子被报道... 详细信息

人成熟精子进入女性生殖道后,需经历一系列生理生化变化过程包括获能、超活化运动和顶体反应等,最终才能与卵细胞完成受精。精子这些生理过程受到女性生殖道内多种生理因子的调控。其中,胞外ATP(ATPe)作为一种重要的生理调节因子被报道存在于女性生殖道中,并且体外研究表明其对人成熟精子超活化运动、顶体反应和受精能力均具有显著促进作用。然而,ATPe作用人成熟精子生理功能的具体机制目前尚未阐明。基于胞内Ca信号在成熟精子功能调控中的核心作用,因此我们首先利用多功能酶标仪检测ATPe对人精子胞内Ca浓度([Ca])的影响。结果显示ATPe(0.05,0.1,0.2,0.5,1,2.5,5 mM)浓度依赖的增加[Ca],并且在2.5 mM时达到饱和。通过利用BAPTA将精子胞外溶液中Ca螯合之后,发现ATPe不再引起精子[Ca]增加,表明ATPe增加的[Ca]来自于外Ca内流。ATPe的效应主要由细胞膜上的P2受体介导。我们选择两种广谱的P2受体抑制剂PPADs和suramin,发现它们能显著抑制ATPe诱导的人精子[Ca]增加。为验证具体是哪种P2受体介导ATPe对人精子的效应,western-blot揭示多种P2受体包括P2X(2,3,4,7)和P2Y(1,2)在人成熟精子中有表达。由于小鼠精子中的ATPe效应被认为是由P2X2受体通道介导,但我们利用膜片钳技术在人精子中并未检测到ATPe激活的P2X2电流。另外,抗体阻断实验结果显示在P2X(2,3,4,7)和P2Y(1,2)这些抗体中,只有P2Y1抗体显著抑制ATPe增加的[Ca],表明ATPe对人精子的效应通过作用于P2Y1受体。由于P2Y1是一种G蛋白偶联受体,而ATPe诱导的人精子[Ca]来自于外Ca内流,因此我们猜想受ATPe激活后的P2Y1可能作用于细胞膜上的Ca通道。精子特异的CatSper通道,因其在调控胞内Ca信号以及精子功能中的重要作用,而成为最可能的候选Ca通道。确实,我们发现ATPe能增加CatSper电流,并且CatSper抑制剂mibefradil和AR720均显著抑制ATPe增加的[Ca]和CatSper电流,说明CatSper介导了ATPe诱导的人精子外Ca内流。此外,ATPe增加的CatSper电流能被P2Y1抗体抑制;并且P2Y1和CatSper在人精子中有相似的定位,均定位在精子尾部;以及在精子胞内增加GTP浓度可以加强ATPe对CatSper电流的增加效应;表明ATPe激活CatSper是一种由P2Y1受体介导的间接作用。我们进一步分析了P2Y1与人精子运动的关系,结果发现P2Y1蛋白的表达水平在正常人精子中显著高于弱精症患者精子中。另外,正常人精子[Ca]对ATPe的响应也显著高于弱精症患者精子[Ca]对ATPe的响应。人精子中P2Y1蛋白表达和ATPe诱导[Ca]与人精子运动相关的一致性,表明P2Y1的表达和功能与人精子运动呈正相关。综上所述,ATPe通过作用于人精子质膜上P2Y1受体,继而激活CatSper通道,引起Ca内流,导致胞内[Ca]增加。本研究一定程度的阐明了ATPe作用人成熟精子的分子机制;首次揭示了P2Y1受体在人成熟精子中的功能;并且在人精子CatSper通道的激活机制中提出了一种新的作用方式。

关键词：胞外ATP 人成熟精子 [Ca2+]i P2Y1 CatSper 精子运动膜片钳

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正常生育男性成熟精子mRNA的种类和特征

中华男科学杂志 2006年第10期12卷 900-903页

作者：赵仰星李巧丽王朝霞王一飞王莲芸乔中东上海交通大学医学院上海200240 上海交通大学生命科学与技术学院上海200240 上海交通大学农业与生物学院上海200240

目的:剖析具有正常生育能力男性成熟精子mRNA的种类和丰度。方法:健康并育有后代的成年男性10例,禁欲1周后取精液,上游法优化精子,Trizol试剂提取精子总RNA。混合所有总RNA进行基因表达系列分析(SAGE)。结果:所建SAGE文库共获877个克隆... 详细信息

目的:剖析具有正常生育能力男性成熟精子mRNA的种类和丰度。方法:健康并育有后代的成年男性10例,禁欲1周后取精液,上游法优化精子,Trizol试剂提取精子总RNA。混合所有总RNA进行基因表达系列分析(SAGE)。结果:所建SAGE文库共获877个克隆,测序得到21 052个标签,出现两次以上的独特性标签有2 712种。经与SAGEm ap数据库比对,19.7%的独特性标签没有基因匹配,代表新基因;其余能匹配的基因中,67%具有蛋白质结合或核酸结合能力,41%具有催化活性,13%与信号转导有关,与细胞运输、精子结构、转录调节相关者分别达到10%左右。结论:人成熟精子中存在数量庞大、种类繁多的mRNA。

关键词：人成熟精子 mRNA表达谱基因表达系列分析男性生殖