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千层纸素诱导人慢性粒细胞白血病K562的凋亡作用

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中国药科大学学报 2014年第2期45卷 232-236页

作者：王玉赵丽缪瀚驰李志裕郭青龙江苏省肿瘤发生与干预重点实验室天然药物活性组分与药效国家重点实验室中国药科大学药物化学教研室南京210009

探讨千层纸素对人慢性粒细胞白血病细胞K562的凋亡诱导作用及其可能机制。采用MTT法检测细胞存活率;电镜下观察细胞超微结构的改变;DAPI染色观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法分析凋亡相关蛋白caspase 9、survivin... 详细信息

探讨千层纸素对人慢性粒细胞白血病细胞K562的凋亡诱导作用及其可能机制。采用MTT法检测细胞存活率;电镜下观察细胞超微结构的改变;DAPI染色观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法分析凋亡相关蛋白caspase 9、survivin及ERK1/2的表达变化情况。结果表明千层纸素呈浓度依赖地抑制K562细胞的增殖作用,诱导K562细胞发生凋亡,上调K562细胞中cleaved-caspase 9蛋白,下调survivin、pro-caspase 9及p-ERK1/2蛋白的表达水平。千层纸素可诱导K562凋亡,这可能与下调survivin蛋白表达,激活caspase 9蛋白,抑制ERK信号通路有关。

关键词：千层纸素人慢性粒细胞白血病凋亡抗肿瘤活性

蟾毒它灵诱导人慢性粒细胞白血病K562细胞衰老样表型的机制研究

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蟾毒它灵诱导人慢性粒细胞白血病K562细胞衰老样表型的机制研究

作者：周程成陕西中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究以人慢性粒细胞白血病K562细胞为研究对象,探讨蟾毒它灵对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖影响、衰老样表型的诱导作用及其机制研究。通过检测蟾毒它灵对K562细胞的增殖以及衰老相关分子mRNA水平、蛋白质水平变化以及细胞形... 详细信息

目的:本研究以人慢性粒细胞白血病K562细胞为研究对象,探讨蟾毒它灵对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖影响、衰老样表型的诱导作用及其机制研究。通过检测蟾毒它灵对K562细胞的增殖以及衰老相关分子mRNA水平、蛋白质水平变化以及细胞形态的影响,进而探讨蟾毒它灵诱导K562细胞衰老样表型的机制。方法:1.将对数生长期的K562细胞分为对照组和实验组（0.0078125μg/mL,0.015625μg/mL,0.03125μg/mL,0.0625μg/mL,0.125μg/mL,0.25μg/mL,0.5μg/mL,1μg/mL蟾毒它灵）培养24 h,48 h,72 h,96 h,利用CCK-8试剂盒检测蟾毒它灵对K562细胞的增殖能力的影响。2.将对数生长期的K562细胞分为对照组和实验组（0.01μg/mL,0.05μg/mL,0.1μg/mL蟾毒它灵）培养24 h,48 h,72 h,96 h,每天使用显微镜观察增殖情况变化并拍照。3.将对数生长期的K562细胞分为对照组和实验组（0.01μg/mL蟾毒它灵,0.01μg/mL蟾毒它灵+NAC,0.01μg/mL蟾毒它灵+PFT-α）培养96 h,每天使用显微镜观察其形态变化并拍照。4.将对数生长期的K562细胞分为对照组和实验组（0.01μg/mL蟾毒它灵,0.01μg/mL蟾毒它灵+NAC,0.01μg/mL蟾毒它灵+PFT-α）培养96 h,利用Real-Time PCR方法检测ROS抑制剂NAC,p53抑制剂PFT-α对蟾毒它灵诱导的衰老相关分子p53、p21的mRNA表达水平的影响。5.将对数生长期的K562细胞分为对照组和实验组（0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL蟾毒它灵）培养96 h,利用蛋白质免疫印迹法检测不同浓度蟾毒它灵对衰老相关分子p53、p21、p16、pRb的蛋白质表达的影响。6.将对数生长期的K562细胞分为对照组和实验组（使用浓度为0.01μg/mL的蟾毒它灵分别培养K562细胞24 h,48 h,72 h,96 h）,利用蛋白质免疫印迹法检测蟾毒它灵作用不同时间对衰老相关分子p53、p21、p16、pRb、B-myb的蛋白质表达的影响。7.将对数生长期的K562细胞分为对照组和实验组（0.01μg/m L蟾毒它灵,0.01μg/mL蟾毒它灵+NAC,0.01μg/mL蟾毒它灵+PFT-α）培养96 h,利用蛋白质免疫印迹法检测NAC,PFT-α对蟾毒它灵衰老相关分子p53、p21、p16、pRb、B-myb的蛋白质表达的影响。结果:***-8结果及增殖情况拍照显示,蟾毒它灵对K562细胞具有显著的抑制增殖作用,并且随着蟾毒它灵的浓度升高以及时间的延长,其抑制作用越明显。2.根据形态学拍照结果显示,蟾毒它灵可以诱导K562细胞衰老样表型,这种结果通过使用ROS抑制剂或p53抑制剂预处理K562细胞可以有所减弱。3.实时荧光定量PCR结果显示,衰老相关分子p53/p21的mRNA表达水平增高,这种结果通过使用ROS抑制剂和p53抑制剂预处理K562细胞可以有所减弱。4.蛋白质免疫印迹法结果显示,蟾毒它灵可以诱导衰老相关分子蛋白的表达。衰老相关分子p53、p21、p16的蛋白质表达水平与蟾毒它灵浓度成正相关,pRb、B-myb的蛋白质表达水平与蟾毒它灵浓度成负相关。这种结果通过使用ROS抑制剂和p53抑制剂预处理K562细胞可以有所减弱。结论:1.蟾毒它灵可以显著抑制人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖,并且其抑制作用随着浓度的增加、时间的延长逐渐增强。2.蟾毒它灵可以显著诱导K562细胞衰老样表型,其机制与p53/p21、p16/pRb信号通路的激活、抑制B-myb的表达相关。

关键词：人慢性粒细胞白血病蟾毒它灵衰老样表型 p53 p16

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老年人慢性粒细胞白血病组织细胞变一例

中华老年医学杂志 1998年第1期17卷 15-15页

作者：段红梅高春文顾惜春郑天林卫生部北京医院血液科

老年人慢性粒细胞白血病组织细胞变一例段红梅高春文顾惜春郑天林患者男性，６７岁。因白细胞升高１年于１９８８年诊断为慢性粒细胞白血病，先后予异靛甲、羟基脲、干扰素等治疗，病情稳定。１９９６年初左髋部疼痛并进行性加重，多次... 详细信息

老年人慢性粒细胞白血病组织细胞变一例段红梅高春文顾惜春郑天林患者男性，６７岁。因白细胞升高１年于１９８８年诊断为慢性粒细胞白血病，先后予异靛甲、羟基脲、干扰素等治疗，病情稳定。１９９６年初左髋部疼痛并进行性加重，多次Ｘ线片未见异常，同年５月收入我院。...

关键词：人慢性粒细胞白血病红梅高春天林梅花组织细胞抗癌药羟基脲老年

CRKL、CRKⅡ与人慢性粒细胞白血病临床相关性及各自调控作用机制及相关性

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CRKL、CRKⅡ与人慢性粒细胞白血病临床相关性及各自调控作用机制...

作者：张秋玲大连医科大学

学位级别：硕士

背景:慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)约占所有成人白血病的20%,仅次于急粒和急淋白血病,处于白血病的第三位,一般具有BCR-ABL特征性的Ph染色体,是一种具有浸润特征的恶性克隆性疾病。其能够使细胞过度增长、凋亡受... 详细信息

背景:慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)约占所有成人白血病的20%,仅次于急粒和急淋白血病,处于白血病的第三位,一般具有BCR-ABL特征性的Ph染色体,是一种具有浸润特征的恶性克隆性疾病。其能够使细胞过度增长、凋亡受到抑制、迁移侵袭能力发生改变、细胞分化受到干扰等。K562是从CML病人红白细胞中分离得到,具有肿瘤干细胞的特征,不具有分化能力,是研究CML理想的细胞模型。CRK接头蛋白在禽类肉瘤病毒CT10(chicken tumor 10)中被发现,由SH2和SH3结构域构成,是致癌基因v-CRK的产物。CRK蛋白家族包括CRKⅠ、CRKⅡ和CRKL,三者均在各种组织中表达。CRK家族通过酪氨酸激酶和小G蛋白等信号分子来调控细胞的转录、增殖、分化和凋亡等生物学行为。CRKL和CRKⅡ作为CRK家族的成员,结构相似,具有高度同源性,可通过SH2和SH3结构域招募信号分子。CRKL和CRKⅡ的异常表达与肿瘤有密切联系,但两者共同对肿瘤的作用研究较少。本组前期研究发现,CRKL影响K562的增殖、迁移侵袭和巨核分化等生物学功能,CRKL下调可引起CRKⅡ表达增加,但具体机制尚不清楚。本论文通过下调K562中CRKL的表达来研究对K562分化的影响、下调CRKⅡ和双敲降CRKⅡ和CRKL来研究两者对K562分化、增殖、迁移和侵袭能力的影响,进而探讨CRKⅡ和CRKL各自功能、作用机制及相互间关联。目的:1、探讨CRKL对K562红系分化影响及分子机制;2、探讨CRKⅡ下调对K562增殖、迁移侵袭和红系分化的影响;3、CRKⅡ和CRKL功能及机制间联系。方法:1、qRT-PCR检测CRKL和CRKⅡ在14例非恶性(各种非恶性血液疾病)、33例初发、5例配对(初发-缓解CR)患者组和正常人组中的表达;2、Hemin诱导和联苯胺染色检测CRKL在K562红系分化中的作用、基因芯片和蛋白质组学检测CRKL下调对K562红系分化特征分子表达水平的影响;3、WB法检测CRKL下调对Raf/MEK/ERK/Elk-1通路中分子表达水平的影响;4、WB法和qRT-PCR检测CRKⅡ蛋白在K562中的下调表达水平;5、CCK-8法检测CRKⅡ下调对K562体外恶性增殖能力的影响、Transwell法检测K562的迁移和侵袭能力、qRT-PCR检测CRKⅡ下调对K562红系分化影响;6、WB法检测CRKⅡ下调对p130Cas/CRK/Rac1和Raf/MEK/ERK/Elk-1通路中分子表达水平的影响;7、免疫共沉淀分析CRKL和CRKⅡ在K562的相互作用;8、台盼蓝计数法检测CRKL+CRKⅡ双敲降K562的增殖能力、Transwell法检测K562的迁移和侵袭能力、qRT-PCR检测K562红系分化影响;9、WB法检测CRKL+CRKⅡ双敲降后,ERK、p-ERK和Rac1的表达。结果:1、qRT-PCR结果显示CRKL在CML初发患者骨髓样本中显著高表达,比正常组高出6.2倍(P=0.009),在CR中低表达。CRKL在5例配对样本中,有5例在CML初发患者中高表达,CR时低表达(P=0.0165)。与正常组相比,CR组CRKL水平降低(P=0.0258)。CRKⅡ在初发患者骨髓样本中略高表达,比正常人高出1.8倍(P=0.0855),在CR中低表达。在5例配对样本中,有3例在CML初发患者中高表达,CR时低表达(P=0.1014)。与正常组相比,CR组CRKⅡ无变化(P=0.1051);2、Hemin诱导K562后CRKL表达量降低,在诱导后的1、2 d时蛋白水平分别降低了52.8%(P=0.0007)和54.6%(P=0.0004),CRKⅡ表达变化不明显;与NC阳性细胞率3.4%相比,CRKL下调引起红系阳性细胞率增加10.5%(P=0.0239),标志分子GPA和γ-globin表达水平分别上升了59.4%(P=0.0096)和96.9%(P=0.0006),出现了HBA和HBD等血红蛋白;3、CRKL下调使GATA-1和HMGB2表达水平升高;4、CRKL下调激活Raf/MEK/ERK/Elk-1通路;5、CRKⅡ下调使K562体外迁移和侵袭能力分别降低了54.7%(P=0.0221)和56.1%(P=0.013),对红系分化无明显影响;6、CRKⅡ下调抑制p130Cas/CRK/Rac1通路,对Raf/MEK/ERK/Elk-1通路影响不大;7、CRKL和CRKⅡ在K562中可以结合形成复合物;8、与CRKL下调细胞相比,CRKL+CRKⅡ双敲降抑制K562增殖能力,细胞迁移侵袭能力又降低了35.9%(P=0.0024)和44.8%(P=0.0115),对红系分化影响不大;9、CRK

关键词： CRKL CRKⅡ 人慢性粒细胞白血病 K562

干扰α烯醇化酶对耐药细胞株K562/A02耐药性的影响

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中国药理学通报 2014年第11期30卷 1521-1526页

作者：高雪叶舟吴克雄范冬梅杨铭张砚君张益枝中国医学科学院北京协和医学院天津血液病医院(血液学研究所) 天津300000

目的肿瘤耐药的产生是肿瘤治疗失败的主要原因之一,α烯醇化酶(eno1)与肿瘤细胞耐药产生和发展密切相关。探究eno1对人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02生长及耐药的影响。方法筛选3株稳定干扰eno1的细胞系K562/A02-sheno1和对照细胞... 详细信息

目的肿瘤耐药的产生是肿瘤治疗失败的主要原因之一,α烯醇化酶(eno1)与肿瘤细胞耐药产生和发展密切相关。探究eno1对人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02生长及耐药的影响。方法筛选3株稳定干扰eno1的细胞系K562/A02-sheno1和对照细胞系K562/A02-shcon;采用细胞计数法测定细胞生长速率,MTT法测定细胞增殖能力,细胞内罗丹明123含量测定细胞外排药物能力,real-time PCR反应测定基因mRNA表达水平,Western blot实验测定基因蛋白表达水平。结果与敏感性细胞株K562相比,eno1在耐药细胞株K562/A02中为高表达状态,其在mRNA水平和蛋白水平表达分别增高(2.85±0.56)倍和(1.43±0.05)倍;而K562/A02细胞生长速率与K562细胞相比差异无显著性。K562/A02-sheno1细胞系与对照组K562/A02-shcon相比生长速率降低,对抗肿瘤药物紫杉醇和阿霉素的敏感性均增强,且K562/A02-sheno1细胞系中罗丹明123含量也明显增高。K562/A02-sheno1细胞系中耐药相关基因MDR1表达水平降低。结论稳定干扰eno1表达能抑制K562/A02细胞生长,有效逆转K562/A02细胞耐药性,提高其对药物的敏感性,其机制与MDR1基因表达相关。

关键词：人慢性粒细胞白血病肿瘤耐药 K562/A02 细胞生长 eno1 MDR1

PTEN基因转染对白血病细胞VEGF调控作用的影响

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肿瘤 2010年第10期30卷 815-821页

作者：成志勇潘崚牛志云梁文同贾志强颜晓燕姚丽杨敬慈河北医科大学第二医院血液内科石家庄050000 保定市第一医院血液内科保定071000 四川大学华西医院血液内科成都610041

目的:探讨在白血病细胞中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology dele-ted on chromosome ten gene,PTEN)对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)调控作用的影响。方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562,实时荧光定量PCR法检测不同转染组细胞中PTEN、VEGF和VEGF1 mRNA表达水平,Western印迹法检测PTEN、VEGF、Akt和磷酸化Akt蛋白的表达水平,并采用Transwell小室侵袭实验检测不同转染组细胞的侵袭性。通过MTT实验及FCM法检测PTEN基因对脐静脉内皮细胞株ECV304增殖和凋亡的影响。通过鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)体内血管生长实验检测PTEN基因对鸡胚血管生成的影响。结果:与空载体腺病毒(Ad-GFP)相比,Ad-PTEN-GFP转染人白血病细胞K562后,VEGF及其受体的表达被明显抑制,并呈剂量依赖性负相关;同时,Ad-PTEN-GFP转染后K562细胞侵袭能力明显减弱。PTEN基因转染能够抑制血管内皮细胞ECV304增殖,并促进其细胞凋亡,细胞周期阻滞在S期。PTEN基因转染可明显抑制CAM血管生长。结论:肿瘤抑制基因PTEN能够抑制内皮细胞增殖和白血病细胞侵袭,其作用机制可能是负调控白血病细胞VEGF表达以及抑制肿瘤血管新生。

关键词： PTEN基因基因转染人白血病细胞 VEGF 调控作用 endothelial growth factor gene transfection 肿瘤抑制基因实验检测腺病毒人慢性粒细胞白血病 GFP 血管生长血管内皮生长因子细胞侵袭脐静脉内皮细胞株及其受体表达水平 Western印迹法 Transwell小室

转染CDX2-siRNA并加入人参皂苷Rh2培养的K562细胞增殖抑制率、凋亡率变化

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山东医药 2016年第47期56卷 81-84页

作者：李建厂孙维梅贾秀红唐慎华李晓花滨州医学院附属医院山东滨州256603

目的观察转染尾型同源盒基因(CDX2)siRNA并加入人参皂苷Rh2培养的人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞增殖抑制率、凋亡率变化。方法将对数生长期的人慢性粒细胞白血病K562细胞,分为实验组和对照组,实验组包括A、B、C组,A组不转染,B、C组... 详细信息

目的观察转染尾型同源盒基因(CDX2)siRNA并加入人参皂苷Rh2培养的人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞增殖抑制率、凋亡率变化。方法将对数生长期的人慢性粒细胞白血病K562细胞,分为实验组和对照组,实验组包括A、B、C组,A组不转染,B、C组分别转染CDX2-siRNA和阴性对照序列(CDX2-siRNA-NC),然后实验组均加入60μmol/L的人参皂苷Rh2培养。对照组K562细胞常规培养。培养6、12、24、36、48 h采用MTT法测算各实验组细胞增殖抑制率;培养48 h采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法和流式细胞术测算各实验组细胞凋亡率。培养48 h时采用实时荧光定量PCR法检测各实验组细胞CDX2、Ph标记染色体或(和)BCR/ABL基因重排(BCR-ABL融合基因)mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞CDX2、BCR-ABL融合蛋白。结果培养6、12、24、36、48 h时B组细胞增殖抑制率均高于A、C组(P均细胞凋亡率分别为26.50%±0.72%、73.20%±1.06%、32.00%±1.34%,B组细胞凋亡率均高于A、C组。培养48 h时,B组细胞CDX2、BCR-ABL融合基因mRNA及蛋白相对表达量均低于A、C组,P均人参皂苷Rh2培养的人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞增殖抑制率、凋亡率升高,这可能是转染CDX2-siRNA降低K562细胞CDX2表达,然后降低BCR-ABL融合基因表达导致的。

关键词：基因系尾型同源盒基因白血病人慢性粒细胞白血病人参皂苷细胞增殖细胞凋亡 Ph标记染色体或(和)BCR/ABL基因