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人巨细胞病毒再活化在非免疫抑制机械通气重症肺炎患者中的发生及预后分析

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中华危重病急救医学 2021年第3期33卷 286-292页

作者：张志辉刘学松陈思蓓伍湛孙艺凝桑岭徐永昊何为群黎毅敏刘晓青呼吸疾病国家重点实验室广州呼吸健康研究院广州医科大学附属第一医院重症医学科广东广州510120

目的分析人巨细胞病毒(HCMV)再活化在非免疫抑制机械通气重症肺炎患者中的发生情况、危险因素及对临床结局的影响。方法采用前瞻性观察性研究方法,选择广州医科大学附属第一医院重症医学科2017年6月30日至2018年7月1日因重症肺炎需有创... 详细信息

目的分析人巨细胞病毒(HCMV)再活化在非免疫抑制机械通气重症肺炎患者中的发生情况、危险因素及对临床结局的影响。方法采用前瞻性观察性研究方法,选择广州医科大学附属第一医院重症医学科2017年6月30日至2018年7月1日因重症肺炎需有创机械通气的非免疫抑制患者48例作为研究对象,并随访至90 d,纳入对象均需每周检测1次血清HCMV DNA载量直至转入重症监护病房(ICU)28 d。根据任意时间点HCMV DNA水平将患者分为HCMV再活化组(≥5×105拷贝/L)和非再活化组(细胞计数(NEU)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、血红蛋白(Hb)、血尿素氮(BUN)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)外的感染指标、免疫指标、血常规、肝肾功能、循环指标比较差异均无统计学意义。HCMV再活化组身高(cm:160±6比166±8)、体重(kg:49.4±11.2比57.6±10.5)、Hb(g/L:87±18比104±24)水平均明显低于HCMV非再活化组,转入ICU 24 h内NEU 〔×10^(9)/L:12.7(9.9,22.5)比8.9(6.2,13.8)〕、hs-CRP 〔mg/L:115.5(85.2,136.6)比39.9(17.5,130.2)〕、BUN〔mmol/L:13.7(8.9,21.5)比7.1(4.9,10.5)〕、NT-proBNP〔ng/L:6 751(2 222,25 449)比1 469(419,4 571)〕、罹患脓毒症比例〔60.0%(6/10)比15.8%(6/38)〕、输血率〔100.0% (10/10)比60.5% (23/38)〕、住院费用〔万元:35.7(25.3,67.1)比15.2(10.4,22.0)〕、90 d全因病死率〔70.0%(7/10)比21.1%(8/38)〕、入住ICU院时间〔d:26(16,66)比14(9,19)〕、机械通气时间〔d:26(19,66)比13(8,18)〕均明显大于HCMV非再活化组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归分析显示:脓毒症是影响非免疫抑制机械通气重症肺炎患者HCMV再活化的独立危险因素〔优势比(OR)=9.35,95%可信区间(95%CI)为1.72~50.86,P=0.010〕。结论 HCMV感染在非免疫抑制机械通气重症肺炎患者中非常普遍,其再活化发生率较高。HCMV再活化可对临床预后产生不良影响,罹患脓毒症可能是HCMV再活化的危险因素。

关键词：人巨细胞病毒再活化重症患者发生率预后

人巨细胞病毒即刻早期蛋白IE2在Tet-On系统调控下的表达及其抗凋亡作用

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病毒学报 2009年第3期25卷 190-195页

作者：白志强王斌刘志军李玲王海涛钱冬萌闫志勇赵巍宋旭霞丁守怡青岛大学医学院青岛市医药生物技术重点实验室青岛266071

即刻早期蛋白IE2是人巨细胞病毒(HCMV)感染后最先表达的蛋白质,具有调节细胞周期和抑制细胞凋亡的作用。但IE2蛋白的表达水平与其抗凋亡活性之间的关系尚不清楚。本实验通过建立Tet-On系统调控下表达HCMVIE2蛋白的细胞株,在不同诱导条... 详细信息

即刻早期蛋白IE2是人巨细胞病毒(HCMV)感染后最先表达的蛋白质,具有调节细胞周期和抑制细胞凋亡的作用。但IE2蛋白的表达水平与其抗凋亡活性之间的关系尚不清楚。本实验通过建立Tet-On系统调控下表达HCMVIE2蛋白的细胞株,在不同诱导条件下检测IE2蛋白对细胞凋亡和p53表达的影响。结果发现IE2蛋白能抑制TNF-α诱导的细胞凋亡,其抑制效应与IE2蛋白的表达量相关,而原位杂交结果显示IE2蛋白不影响p53的表达,提示IE2蛋白可能通过多种途径抑制细胞凋亡。

关键词：人巨细胞病毒即刻早期蛋白2 凋亡 Tet—On系统 HeLa细胞

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人巨细胞病毒潜伏感染机制的研究进展

病毒学报 2016年第1期32卷 82-87页

作者：高慧慧陶然俞惠民尚世强浙江大学医学院附属儿童医院杭州310003

人巨细胞病毒(HCMV)的潜伏感染在人群中极为普遍。在儿科学领域,潜伏感染的巨细胞病毒激活后,可能导致死胎、流产、胎儿畸形、生长发育迟缓等一系列严重后果。在病毒潜伏感染过程中,机体会通过免疫反应或诱导宿主细胞凋亡等方式清除病... 详细信息

人巨细胞病毒(HCMV)的潜伏感染在人群中极为普遍。在儿科学领域,潜伏感染的巨细胞病毒激活后,可能导致死胎、流产、胎儿畸形、生长发育迟缓等一系列严重后果。在病毒潜伏感染过程中,机体会通过免疫反应或诱导宿主细胞凋亡等方式清除病毒。然而,在病毒与宿主共同进化的漫长过程中,病毒会调控自身基因的表达、宿主细胞微环境及免疫杀伤作用,从而达到与长期宿主共存的目的。目前研究揭示,HCMV的潜伏感染可能与病毒立即早期启动子沉默、病毒干扰宿主细胞凋亡、病毒免疫逃逸及非编码RNA调控机制有关。本文将从以上四个方面对HCMV潜伏感染相关机制的研究进展进行总结。

关键词：人巨细胞病毒潜伏感染立即早期启动子免疫反应

人巨细胞病毒临床病毒株UL148基因的体外表达及功能位点预测

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第2期38卷 94-97页

作者：胡兢晶伍苑宾谭琪琪苏海浩丁俊彩郭媛媛谢斌华蔡丽君郭梦杰王波广东省妇幼保健院儿科广州511442

目的体外获得人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）临床病毒株 UL148 RNA及探讨其基因功能.方法将感染HCMV的新生儿尿液接种人胚肺细胞,分离HCMV临床病毒株,并经多重PCR鉴定.扩增UL148基因,经双酶切后克隆入pGEM-T-Easy质粒,... 详细信息

目的体外获得人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）临床病毒株 UL148 RNA及探讨其基因功能.方法将感染HCMV的新生儿尿液接种人胚肺细胞,分离HCMV临床病毒株,并经多重PCR鉴定.扩增UL148基因,经双酶切后克隆入pGEM-T-Easy质粒,构建重组质粒,并置于T7启动子下游,经重组质粒、PCR产物、双酶切产物电泳鉴定及序列测定.克隆成功的质粒以32P标记,进行体外转录RNA.根据UL148序列特征应用生物信息学分析其翻译后修饰位点.结果成功在体外获得HCMV临床病毒株,经电泳及序列测定证实重组质粒构建成功,在T7 RNA聚合酶作用下,体外获得UL148 RNA.翻译后修饰位点显示UL148基因存在1个与细胞黏附相关的特征序列,1个豆荚外源凝集素β-链标记位点、2个N-豆蔻酰化位点,1个酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点,7个蛋白激酶C磷酸化位点,1个cAMP/cGMP-依赖性蛋白激酶磷酸化位点和2个N-糖基化位点,1个跨膜区域.结论 UL148基因编码产物可能为一个病毒黏附分子,参与宿主细胞的信号转导作用.

关键词：人巨细胞病毒临床病毒株 UL148 信号转导

人巨细胞病毒UL148A、UL148B、UL148C、UL148D基因在临床株中的多态性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第12期27卷 1107-1111页

作者：吉耀华孙峥嵘阮强何蓉齐莹马艳萍刘庆陈淑荣王继东中国医科大学附属第二医院病毒研究室沈阳110004

目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)UL148A、UL148B、UL148C和UL148D基因序列在临床低传代分离株中的多态性。方法对22株经荧光定量PCR方法(Q-PCR)检测HCMV-DNA为阳性的临床株进行HCMV UL148A、UL148B、UL148C和UL148D基因全序列PCR扩增,并对PCR扩增产物进行序列测定及分析。结果22株临床株序列与Merlin株相比.临床分离株UL148A基因的核苷酸变异率为0.5%～8.3%,氨基酸变异率为1.3%～6.3%;UL148B基因核苷酸变异率为0.5%～4.6%,氨基酸变异率为1.3%～5.0%;UL148C基因核苷酸变异率为0.5%～3.0%,氨基酸变异率为1.3%～3.9%;UL148D基因核苷酸变异率为0.6%～8.5%,氨基酸变异率为1.7%～8.1%。22株HCMV UL148A和UL148D序列均分为3个型。与Merlin株比较,除U96株外,来自未经传代的尿标本中的UL148A、UL148B、UL148C和UL148D基因编码产物含有的翻译后修饰位点均保守。结论UL148C基因无论在核苷酸序列还是在蛋白的氨基酸结构上均较为保守。统计学分析显示HCMV UL148A和UL148D基因呈现一定的相关性。

关键词：人巨细胞病毒 UL148A-D基因多态性临床低传代分离株

人巨细胞病毒UL144基因克隆表达及其对树突状细胞功能的影响

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第二军医大学学报 2009年第8期30卷 874-878页

作者：汪怀周蔡刚沈茜第二军医大学长海医院实验诊断科上海200433

目的:构建携带人巨细胞病毒(hCMV)UL144基因的重组腺病毒,研究UL144基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能变化。方法:从hCMV-DNA阳性患者外周血提取cDNA,采用PCR技术扩增出UL144基因。采用AdEasy系统构建携带hCMVUL144基因的... 详细信息

目的:构建携带人巨细胞病毒(hCMV)UL144基因的重组腺病毒,研究UL144基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能变化。方法:从hCMV-DNA阳性患者外周血提取cDNA,采用PCR技术扩增出UL144基因。采用AdEasy系统构建携带hCMVUL144基因的重组腺病毒载体pAd-UL144,转染HEK293细胞后包装产生重组腺病毒Ad-UL144。通过RT-PCR检测目的基因的表达。将此重组腺病毒转染小鼠骨髓来源的DC,采用流式细胞术检测DC表面分子,采用ELISA技术分析DC培养上清中的细胞因子,采用3H-TdR掺入法检测UL144基因修饰的DC激活T细胞增殖的能力。结果:成功将UL144基因片段克隆至载体上,并经HEK293细胞包装出病毒颗粒,经测定病毒滴度为3×1010pfu/ml。流式细胞术检测显示,UL144基因修饰的DC表面分子CD80、CD86和I-Ad表达水平低于对照组(P细胞增殖功能明显低于DC对照组(P细胞的刺激功能。

关键词：人巨细胞病毒 UL144基因疱疹病毒侵入介体树突状细胞免疫耐受

人巨细胞病毒pp150蛋白片段与MDBP蛋白片段的融合表达及初步应用

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生物工程学报 2006年第6期22卷 956-961页

作者：郭大东高雪芹韩金祥刘毅张华宁山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室济南250062

人巨细胞病毒(HCMV)感染是临床上常见的一种病毒性传播疾病,正常人群常无明显的临床症状,而对器官移植患者、免疫力低下及孕妇等人可产生严重的危害。以HCMVAD169病毒株基因为模板,经PCR扩增了编码pp150蛋白片段的UL32基因和编码MDBP蛋... 详细信息

人巨细胞病毒(HCMV)感染是临床上常见的一种病毒性传播疾病,正常人群常无明显的临床症状,而对器官移植患者、免疫力低下及孕妇等人可产生严重的危害。以HCMVAD169病毒株基因为模板,经PCR扩增了编码pp150蛋白片段的UL32基因和编码MDBP蛋白片段的UL57基因,目的基因转化入pMD18-T克隆载体后再经酶切与表达载体pET-11a连接构建出融合基因表达载体,然后转入大肠杆菌BL21,重组大肠杆菌经诱导表达融合蛋白pp150/MDBP。经SDS-PAGE分析,其相对分子量约为27kD,表达量约占菌体蛋白的17.45%,Westernblot鉴定为阳性,ELISA及蛋白芯片检测表明融合蛋白具有良好的抗原性,经过初步应用表明其对血清IgG及IgM的检出率与全抗原相比一致,具有进一步开发应用的价值。

关键词：人巨细胞病毒融合蛋白原核表达 Western blot 蛋白芯片

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人巨细胞病毒博弈宿主免疫进展

病毒学报 2013年第1期29卷 85-91页

作者：郑琪陶然尚世强浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室杭州310003

人巨细胞病毒(HCMV)感染在人群中极其普遍,病毒一旦侵入机体,将长期存在于体内,且具有潜伏-活化的生物学特性。在病毒与宿主共同进化的漫长过程中,病毒靶向性的产生了多种免疫逃避机制,通过编码病毒自身免疫调节分子,参与调控机体主要... 详细信息

人巨细胞病毒(HCMV)感染在人群中极其普遍,病毒一旦侵入机体,将长期存在于体内,且具有潜伏-活化的生物学特性。在病毒与宿主共同进化的漫长过程中,病毒靶向性的产生了多种免疫逃避机制,通过编码病毒自身免疫调节分子,参与调控机体主要组织相容性复合体、细胞免疫、体液免疫、细胞因子及趋化因子等方面的功能,以躲避宿主的免疫杀伤作用。HCMV的免疫调节基因被认为在病毒的致病机制中扮演重要角色。本文将对近年来有关HCMV的免疫调控机制研究作一综述,从病毒编码的免疫调节分子功能的角度并结合本实验室的相关研究成果,探讨病毒与宿主免疫的相互作用过程,从病毒干预宿主免疫关键分子作用的角度映射机体对抗病毒的免疫机理。

关键词：人巨细胞病毒免疫逃避趋化因子炎症反应

人巨细胞病毒pp65对系统性红斑狼疮诱导作用的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第8期32卷 689-695页

作者：张园潘阳张括张瑞谢洁红李金明北京大学第三医院检验科 100191 卫生部北京医院卫生部临床检验中心 100730 北京协和医学院研究生院

目的探究人巨细胞病毒（HCMV）pp65是否可以诱发正常C57BL／6小鼠产生系统性红斑狼疮（SLE）相关实验室诊断指标的变化。方法构建HCMVpp65原核表达质粒与真核表达质粒，然后进行HCMVpp65原核蛋白表达与纯化。间接法ELISA检测***65IgG、d... 详细信息

目的探究人巨细胞病毒（HCMV）pp65是否可以诱发正常C57BL／6小鼠产生系统性红斑狼疮（SLE）相关实验室诊断指标的变化。方法构建HCMVpp65原核表达质粒与真核表达质粒，然后进行HCMVpp65原核蛋白表达与纯化。间接法ELISA检测***65IgG、dsDNA、抗核抗体（ANA），竞争法ELISA检测血浆中IL-1b、IL-6、TNF-仪浓度。结果成功获得HCMVpp65原核表达蛋白和真核表达质粒，免疫小鼠后血清中anti—pp65、抗dsDNA抗体、ANA、IL-6均有明显上升趋势。结论HCMVpp65可以使C57BL／6小鼠SLE相关检测指标发生明显改变，这一结果有助于进一步研究自身免疫病的发病机制与影响因素。

关键词：自身免疫病人巨细胞病毒系统性红斑狼疮低基质磷蛋白pp65