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畜牧兽医科技信息 2024年第4期 59-62页

作者：高之煜曹鑫艳顾兰英范文雨张镱娴杜非凡曹继睿蒋松盛金良孙延鸣张彦兵石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆泰昆集团股份有限公司新疆昌吉831203

动植物人工miRNAs(artificial miRNAs,amiRNAs)在抗病毒感染中发挥重要作用。然而,有关amiRNAs靶向抑制重症急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的相关研究未见报道。目的:本研究旨在设计靶向SARS-CoV-2的amiRNAs,进一步分析amiRNAs对不同变异株的匹配程度。方法:利用Invitrogen Block-iT RNAi Designer成功设计靶向SARS-CoV-2的amiRNAs。结果:分别命名为amiR-Cov23utr-1、2、3、4;其中amiR-Cov23utr-1、3和4在Omicron BA.5/2022中靶向区域序列十分保守;amiR-Cov23utr-2在Omicron BA.5/2022中的靶点缺失。结论:本研初步设计和分析了靶向SARS-CoV-2的amiRNAs,为后续深入研究amiRNAs抗SARS-CoV-2感染提供了重要基础资料。

关键词：重症急性呼吸综合征冠状病毒2 靶向人工micrornas 抗病毒 3′非翻译区

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人工micrornas干扰At3A06基因增强了拟南芥对菌核病的敏感性

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中国油料作物学报 2010年第3期32卷 345-348页

作者：黄军艳许李明张学江刘胜毅农业部油料作物生物学重点开放实验室中国农业科学院油料作物研究所湖北武汉430062 中南民族大学生命科学院湖北武汉430074

基于本研究室自主开发的油菜防御cDNA芯片分析结果,油菜基因Bn3A06受菌核病诱导后特异上调表达。序列比对发现,该基因与拟南芥基因At3A06高度同源,后者编码289个氨基酸,功能未知。本研究用花序浸染法将At3A06基因的人工微RNA(amiRNA)干... 详细信息

基于本研究室自主开发的油菜防御cDNA芯片分析结果,油菜基因Bn3A06受菌核病诱导后特异上调表达。序列比对发现,该基因与拟南芥基因At3A06高度同源,后者编码289个氨基酸,功能未知。本研究用花序浸染法将At3A06基因的人工微RNA(amiRNA)干扰载体(该载体包含一个除草剂草胺磷抗性基因)转化拟南芥。经草胺磷筛选获得3株T1代转基因植株,PCR检测均为阳性;荧光定量PCR检测表明,与野生型对照相比,3个转基因植株的At3A06基因的表达量均显著降低;对其T2代进行菌核病抗性鉴定,结果显示转基因株系对菌核病的敏感性均显著增强(P<0.05)。推测At3A06基因可能参与了植物的防御反应,与植株对核盘菌抗性相关。

关键词：拟南芥核盘菌防御反应人工micrornas 荧光定量PCR

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拟南芥At5g01510和At5g49820基因人工micrornas的构建与鉴定

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植物生理学报 2012年第5期48卷 442-448页

作者：郭凯华李文超李思敏赵淑清山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006

以拟南芥内源MIR319a前体为骨架,构建沉默DUF647家族基因At5t01510和At5g49820表达的人工micrornas,研究其对目的基因表达的抑制效果。利用WMD平台设计分别靶向At5g01510和At5g49820的amiRNAs序列,通过重叠PCR改造拟南芥MIR319a骨架序列... 详细信息

以拟南芥内源MIR319a前体为骨架,构建沉默DUF647家族基因At5t01510和At5g49820表达的人工micrornas,研究其对目的基因表达的抑制效果。利用WMD平台设计分别靶向At5g01510和At5g49820的amiRNAs序列,通过重叠PCR改造拟南芥MIR319a骨架序列,使其包含我们设计的特异amiRNAs序列。构建35S::amiR-At5g0150和35S::amiR-At5g49820融合基因,以农杆菌介导的花苞浸染法转化获得转基因拟南芥。RT-PCR分析表明,人工micrornas能够显著抑制靶基因的表达,获得了抑制效果明显的转基因植株。本工作为进一步研究这两个基因的功能奠定了良好的基础。

关键词：拟南芥 At5g01510 At5g49820 人工micrornas 基因表达

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油菜菌核病抗性相关基因EIN3及3A06和6C02的功能研究

油菜菌核病抗性相关基因EIN3及3A06和6C02的功能研究

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作者：许李明中南民族大学

学位级别：硕士

由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum (Lib. ) de Bary)引起的菌核病是油菜(Brassica napus)的主要病害之一。利用抗病品种是该病害防治的经济有效措施。然而目前高抗材料缺乏,抗病分子机制尚不清楚,需要发展或采用新技术寻找关键的抗病... 详细信息

由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum (Lib. ) de Bary)引起的菌核病是油菜(Brassica napus)的主要病害之一。利用抗病品种是该病害防治的经济有效措施。然而目前高抗材料缺乏,抗病分子机制尚不清楚,需要发展或采用新技术寻找关键的抗病基因,进行抗病育种。近年来植物功能基因组学和基因工程的研究进展迅速,特别是在模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)中抗病性功能基因与抗病分子机制研究取得了突破性进展。在油菜中嫁接和发展这些技术,克隆和研究油菜抗病性功能基因,以提高油菜对菌核病的抗性具有重要的理论和实践意义。本研究以本实验室建立的油菜抗病相关的Unigene库/cDNA文库及其芯片表达谱结果为基础,选择了4个与油菜抗菌核病相关的基因,克隆了这些基因的全长,从病原诱导表达测定、转基因功能鉴定的角度研究了这些基因的功能。主要结果如下:1、BnEIN3全长序列克隆和病原诱导表达研究。已有研究表明,植物EIN3是乙烯信号转导途径中的一个关键调节因子,能激活乙烯诱导的防御相关基因的表达。本研究以本实验的油菜Unigene库为基础,通过同源克隆法克隆得到一个1947 bp的片段,该片段包含一个甘蓝型油菜EIN3(BnEIN3)基因,序列分析表明;该基因序列与拟南芥EIN3一致性高达82%,有完整的开放阅码框,编码614个氨基酸,其中包含一个EIN3结构域。诱导表达研究表明,在油菜高抗品种D083中,菌核病侵染后期快速诱导BnEIN3上调表达,且显著高于中抗(中双9号)及高感品种(84039)中该基因的表达,预示着BnEIN3在油菜对菌核病的抗性中行使功能。2、通过基因沉默鉴定油菜同源基因At3A06、At6C02和AtEIN3的功能。在基因功能研究中,基于微RNA(micrornas,miRNAs)作用机制而发展起来的人工miRNAs(artificial miRNAs,amiRNAs)干扰技术是一种新型的、高效的、高通量的基因沉默新技术。本研究基于油菜菌核病抗性相关基因芯片表达谱分析结果,从油菜防御cDNA文库中选择了Bn3A06、Bn6C02和BnEIN3,以其对应的同源基因At3A06(AT2G43945)、At6C02(AT2G33860)和AtEIN3(AT3G20770)为基础,构建了这些侯选基因的amiRNA干扰载体amiRNAi-3A06、amiRNAi-6C02和amiRNAi-EIN3,并获得了一批PCR检测为阳性的转基因拟南芥。利用荧光定量PCR的检测结果表明,导入amiRNAs干扰载体的转基因株系中,目的基因At3A06、At6C02和AtEIN3的表达量均分别显著降低。转基因株系对菌核病的抗性鉴定表明,内源基因At3A06的表达被显著干扰后,拟南芥对菌核病的敏感性显著增强。初步说明At3A06基因可能参与了植株对核盘菌的防御反应,为进一步探讨该基因在油菜抗病中的作用奠定了基础,对发掘油菜新的菌核病抗性基因源具有重要意义。3、油菜基因Bn6C02和Bn3E09的过表达研究。基于油菜菌核病抗性相关基因芯片表达谱分析结果,本研究从油菜防御cDNA文库中选择了2个抗病相关的基因Bn6C02和Bn3E09,构建了这些基因的植物表达载体pG6C和pGB3E,并转化拟南芥,获得了转基因植株,为下一步研究其功能奠定了基础。

关键词：菌核病防御反应人工micrornas 过表达荧光定量PCR

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人工microRNA干扰At3A06基因增强了拟南芥对菌核病的敏感性

人工microRNA干扰At3A06基因增强了拟南芥对菌核病的敏感性

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中国植物病理学会2009年学术年会

作者：黄军艳许李明张学江刘胜毅中国农业科学院油料作物研究所中南民族大学生命科学院

核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）属于子囊菌亚门（Ascomycotina）,核盘菌属（Sclerotinia fuck）,可导致400多个植物种或亚种发生菌核病,该病是粮油作物、蔬菜等农作物上分布最广、为害最严重的病害之一,尤其在油菜上,严重地影响其... 详细信息

核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）属于子囊菌亚门（Ascomycotina）,核盘菌属（Sclerotinia fuck）,可导致400多个植物种或亚种发生菌核病,该病是粮油作物、蔬菜等农作物上分布最广、为害最严重的病害之一,尤其在油菜上,严重地影响其产量和品质。基于甘蓝型油菜抗菌核病相关基因芯片表达谱分析结果,油菜基因Bn3A06受菌核病诱导后特异上调表达,序列比对表明该基因与拟南芥基因At3A06高度同源,一致性达85%,但功能未知。本研究利用拟南芥At3A06基因的序列设计并构建了新兴的人工微RNA（artificial microRNA,amiRNA）干扰载体,该载体包含一个抗除草剂草胺磷的基因bar。利用农杆菌介导的花序侵染方法转化拟南芥,经除草剂草胺磷筛选获得3株T1代转基因株系,PCR检测均为阳性。荧光定量PCR检测表明,与野生型Co1-0相比,3个转基因株系中At3A06基因的相对表达量分别下降至0.27、0.24、0.31,表明At3A06基因的表达受到了显著干扰（P＜0.05）,且3个株系中At3A06基因的表达被抑制的程度十分接近。对3个转基因株系的T2代植株进行菌核病抗性鉴定,结果显示,转基因植株对菌核病的敏感性均显著增强（P＜0.05）。因此推测,At3A06基因可能参与了植物的防御反应,与植株对核盘菌抗性密切相关,对其作用机制的研究正在进行中。

关键词：人工micrornas 菌核病拟南芥防御反应

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人工microRNA干扰At3A06基因增强了拟南芥对菌核病的敏感性

人工microRNA干扰At3A06基因增强了拟南芥对菌核病的敏感性

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湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：黄军艳许李明张学江刘胜毅中国农业科学院油料作物研究所中南民族大学生命科学院

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)属于子囊菌亚门(Ascomycotina),核盘菌属(Sclerotinia fuck),可导致400多个植物种或亚种发生菌核病,该病是粮油作物、蔬菜等农作物上分布最广、为害最严重的病害之一,尤其在油菜上,严重地影响其产量和... 详细信息

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)属于子囊菌亚门(Ascomycotina),核盘菌属(Sclerotinia fuck),可导致400多个植物种或亚种发生菌核病,该病是粮油作物、蔬菜等农作物上分布最广、为害最严重的病害之一,尤其在油菜上,严重地影响其产量和品质。基于甘蓝型油菜抗菌核病相关基因芯片表达谱分析结果,油菜基因Bn3A06受菌核病诱导后特异上调表达,序列比对表明该基因与拟南芥基因At3A06高度同源,一致性达85%,但功能未知。本研究利用拟南芥At3A06基因的序列设计并构建了新兴的人工微RNA(artificial microRNA,amiRNA)干扰载体,该载体包含一个抗除草剂草胺磷的基因bar。利用农杆菌介导的花序浸染方法转化拟南芥,经除草剂草胺磷筛选获得3株T1代转基因株系,PCR检测均为阳性。荧光定量PCR检测表明,与野生型Col-0相比,3个转基因株系中At3A06基因的相对表达量分别下降至0.27、0.24、0.31,表明At3A06基因的表达受到了显著干扰(P<0.05),且3个株系中At3A06基因的表达被抑制的程度十分接近。对3个转基因株系的T2代植株进行菌核病抗性鉴定,结果显示,转基因植株对菌核病的敏感性均显著增强(P<0.05)。因此推测,At3A06基因可能参与了植物的防御反应,与植株对核盘菌抗性密切相关,对其作用机制的研究正在进行中。

关键词：人工micrornas 菌核病拟南芥防御反应

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