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Thoc1真核表达载体构建及其与ClC-3蛋白在人宫颈癌细胞hela中的共定位观察

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山东医药 2018年第16期58卷 26-29页

作者：刘学强郑兆广王汝上钟杰何桂芳徐彬广东药科大学生命科学与生物制药学院广州510006 广州康臣药业有限公司肾病药物研究中心

目的克隆Thoc1基因并构建pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体,观察Thoc1和氯离子通道3(ClC-3)在人宫颈癌细胞hela中的共定位情况,分析ClC-3是否参与细胞转录过程。方法采用RT-PCR法扩增获得Thoc1基因的编码序列,将其克隆到p DsRed2-N1载体中... 详细信息

目的克隆Thoc1基因并构建pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体,观察Thoc1和氯离子通道3(ClC-3)在人宫颈癌细胞hela中的共定位情况,分析ClC-3是否参与细胞转录过程。方法采用RT-PCR法扩增获得Thoc1基因的编码序列,将其克隆到p DsRed2-N1载体中,构建pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体,经PCR、SacⅠ和Bam HⅠ双酶切、基因测序进行鉴定。将对数生长期hela细胞随机分为转染组、空转染组及空白对照组,分别采用Lipofectamine 2000转染pThoc1-DsRed2-N1质粒、p DsRed2-N1质粒及脂质体,转染48 h倒置荧光显微镜下观察红色荧光蛋白表达情况。取转染组细胞,采用免疫荧光技术观察Thoc1和ClC-3的共定位情况。结果 PCR鉴定结果显示在约2.1 kb处有一亮带;双酶切得到约4.7 kb和2.1 kb的两个片段,符合预期大小;基因测序结果显示与Genebank中Thoc1基因序列完全一致;证实成功构建pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体。空转染组可观察到较强的红色荧光,空白对照组没有观察到红色荧光,转染组红色荧光强度介于空转染组与空白对照组之间;证实hela细胞中存在Thoc1表达。ClC-3分布于细胞核和细胞质中,主要是细胞核中;Thoc1只分布于细胞核中;两者叠加后在细胞核呈黄色荧光,证实ClC-3和Thoc1在hela细胞核上存在共同定位。结论成功构建了pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体;Thoc1与ClC-3共定位于hela细胞核,提示ClC-3可能参与细胞转录过程。

关键词： Thoc1基因真核表达载体氯离子通道3 共定位人宫颈癌细胞hela

[Na_2(H_2O)_(10)][Cu_4(H_2O)_(12)(H_2W_(12)O_(42))]·15H_2O抑制人宫颈癌hela细胞增殖的研究

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东北师大学报（自然科学版） 2016年第2期48卷 103-107页

作者：曲小姝刘树萍宁波杨艳艳吉林化工学院化学与制药工程学院吉林吉林132022 哈尔滨商业大学旅游与烹饪学院黑龙江哈尔滨150076 长春职业技术学院食品与生物技术学院吉林长春130021

研究了过渡金属铜修饰的仲钨酸盐化合物[Na_2(H_2O)_(10)][Cu_4(H_2O)_(12)(H_2W_(12)O_(42))]·15H_2O(Na_2Cu_4W_(12))的体外抗肿瘤活性.取人宫颈癌细胞hela加入不同浓度Na_2Cu_4W_(12)处理,应用MTT法分析细胞增殖,计算了半数抑制浓度(IC_(50));采用光学显微镜观察hela细胞的凋亡形态变化;用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡,计算了各期细胞比例及细胞凋亡率.结果表明:Na_2Cu_4W_(12)对hela细胞增殖抑制的IC_(50)值为10.2μmol/L,且呈剂量依赖性;光学显微镜下可观察到Na_2Cu_4W_(12)处理组细胞数目明显减少,出现变圆、缩小、老化等形态变化;不同浓度Na_2Cu_4W_(12)处理12h后,早期凋亡细胞所占的百分比显著增加且呈剂量依赖性.

关键词： [Na_2(H_2O)(_10)][Cu_4(H_2O)(_12)(H_2W(_12)O(_42))]·15H_2O 人宫颈癌细胞hela 抗肿瘤体外研究

甘蓝型油菜基因BnRCH转染人HEK 293A和hela细胞的研究

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四川大学学报（自然科学版） 2012年第3期49卷 710-714页

作者：万谦刘志斌彭文珍王健美李旭峰杨毅四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610065 四川大学法医与基础医学院生物化学与分子生物学研究所成都610065

本研究从植物基因在动物细胞异源表达的角度入手,采用外源基因稳定转染的方法,向人胚胎肾细胞HEK 293A和人宫颈癌细胞hela导入了BnRCH基因,获得了HEK 293A和hela细胞的稳定转染子.使用RT-PCR、qPCR和Western blot等方法鉴定了获得的稳... 详细信息

本研究从植物基因在动物细胞异源表达的角度入手,采用外源基因稳定转染的方法,向人胚胎肾细胞HEK 293A和人宫颈癌细胞hela导入了BnRCH基因,获得了HEK 293A和hela细胞的稳定转染子.使用RT-PCR、qPCR和Western blot等方法鉴定了获得的稳定转染子,确认了稳定转染子的成功建立.本研究一方面说明BnRCH虽然为植物基因,却仍然能够在动物细胞中正常表达;另一方面也为开展对BnRCH基因在动物细胞中的功能研究和应用开发建立了平台.同时,使用免疫细胞化学法和绿色荧光蛋白质(GFP)示踪法分析了BnRCH蛋白质在hela细胞中的定位,结果表明:BnRCH蛋白质在hela细胞中均匀分布,实现了对BnRCH基因在hela细胞中作用的初步探索.

关键词： BnRCH 人胚胎肾细胞HEK 293A 人宫颈癌细胞hela 瞬时转染稳定转染

用光谱法研究光敏剂血卟啉单甲醚对肿瘤细胞光动力作用的分子机制

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应用激光 2012年第2期32卷 159-163页

作者：刘健郝倩云赵雪松刘婉华郑州大学信息工程学院河南郑州450001 郑州大学基础医学院河南郑州450001 郑州大学物理工程学院河南郑州450001

测定了光敏剂血卟啉单甲醚对人宫颈癌细胞hela光敏作用后的傅里叶红外光谱。结果显示:光敏作用后,hela细胞磷酸二酯基团的对称伸缩振动峰1085cm^(-1)和不对称伸缩振动峰1246cm^(-1)蓝移,强度下降:蛋白质酰胺Ⅰ带1656cm^(-1)发生蓝移,酰... 详细信息

测定了光敏剂血卟啉单甲醚对人宫颈癌细胞hela光敏作用后的傅里叶红外光谱。结果显示:光敏作用后,hela细胞磷酸二酯基团的对称伸缩振动峰1085cm^(-1)和不对称伸缩振动峰1246cm^(-1)蓝移,强度下降:蛋白质酰胺Ⅰ带1656cm^(-1)发生蓝移,酰胺Ⅱ带1546cm^(-1)出现红移;CH_2对称伸缩振动峰2858cm^(-1),峰位蓝移2cm^(-1),峰值明显减弱:细胞的蛋白质和核酸谱峰面积比值D1085/D1546降低。提示细胞中的DNA、蛋白质和磷脂结构受到损伤。结果表明:DNA、蛋白质和磷脂是血卟啉单甲醚光敏作用的主要靶分子。

关键词：光谱分析血卟啉单甲醚(HMME) 光动力作用人宫颈癌细胞hela

表皮生长因子受体抑制剂联合X线照射对人宫颈癌的体外实验研究

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表皮生长因子受体抑制剂联合X线照射对人宫颈癌的体外实验研究

作者：刘祺昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]：观察表皮生长因子受体抑制剂尼妥珠单抗(泰欣生、h-R3)联合放疗对人宫颈癌细胞系(He la);的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,及其对细胞周期的影响,为表皮生长因子受体抑制剂对宫颈癌放疗增敏的可行性提供实验依据。[方法]：四噻... 详细信息

[目的]：观察表皮生长因子受体抑制剂尼妥珠单抗(泰欣生、h-R3)联合放疗对人宫颈癌细胞系(He la);的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,及其对细胞周期的影响,为表皮生长因子受体抑制剂对宫颈癌放疗增敏的可行性提供实验依据。[方法]：四噻唑蓝对比色试验(MTT)观察不同浓度的表皮生长因子抑制剂对宫颈癌hela浓度时间抑制作用,计算出最适浓度。四噻唑蓝比色试验(MTT)观察表皮生长因子受体抑制剂联合放疗对宫颈癌hela细胞时间抑制作用,流式细胞术Annexin V/PI双染法检测对宫颈癌hela细胞凋亡和周期的影响。[结果]：1.经表皮生长因子受体抑制剂处理后,用倒置显微镜观察h-R3处理后的宫颈癌细胞,发现随药物及作用时间的增加,宫颈癌hela细胞逐渐变圆浮起,折光度降低,细胞间连接松散,增殖减慢。***法检测不同浓度的h-R3在不同时间点对宫颈癌hela细胞的增殖抑制作用：不同浓度h-R3作用于宫颈癌hela细胞,随着抑制剂作用浓度增加、作用时间的延长,肿瘤细胞存活率逐步降低。3.h-R3浓度50ug/ml,单次放疗剂量2Gy时,联合治疗对宫颈癌hela细胞的作用最强,联合作用比单独用药或者单独放疗强。4. Annexin V/PI双染色法流式细胞仪检测凋亡情况：h-R3浓度50ug/ml,单次剂量2Gy,作用72h后,对照组细胞凋亡率仅为0.06%,h-R3联合照射组细胞凋亡率为9.07%。***染色法流式细胞仪检测细胞周期变化情况：人宫颈癌细胞hela凋亡率与G2/M期百分率呈负相关,即h-R3增加了细胞G2/M期的放射敏感性。[结论]：1.表皮生长因子受体抑制剂尼妥珠单抗(h-R3)联合放疗对人宫颈癌细胞系(hela)存在放疗增敏作用,联合作用比单独用药或者单独放疗强。2.表皮生长因子受体抑制剂尼妥珠单抗(h-R3)对人宫颈癌细胞系(hela)的抑制作用主要作用于G2/M期。

关键词：表皮生长因子受体抑制剂(泰欣生、h-R3) 放疗增敏人宫颈癌细胞hela

长链非编码RNA FAL1对宫颈癌hela细胞增殖、侵袭与迁移的影响

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现代肿瘤医学 2015年第15期23卷 2096-2099页

作者：惠慧吴磊付玉兰周云松董楠胡艳陕西省肿瘤医院陕西西安710061 陕西省康复医院陕西西安710061

目的:探索人宫颈癌细胞hela与正常人宫颈永生化上皮细胞H8中长链非编码RNA FAL1分子的表达差异及沉默人宫颈癌细胞hela中FAL1的表达对人宫颈癌细胞hela增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR技术检测细胞中FAL1基因表达水平;设计并... 详细信息

目的:探索人宫颈癌细胞hela与正常人宫颈永生化上皮细胞H8中长链非编码RNA FAL1分子的表达差异及沉默人宫颈癌细胞hela中FAL1的表达对人宫颈癌细胞hela增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR技术检测细胞中FAL1基因表达水平;设计并合成FAL1的siRNA片段(FAL1-siRNA)转染宫颈癌hela细胞,qRT-PCR技术检测其沉默效率;MTT检测人宫颈癌细胞hela增殖;Transwell实验检测人宫颈癌细胞hela的侵袭、迁移能力的变化。结果:长链非编码RNA FAL1在人宫颈癌细胞hela中的表达明显高于正常人宫颈永生化上皮细胞H8中的表达,FAL1-siRNA下调了hela细胞中FAL1的表达,并抑制了宫颈癌细胞hela的增殖和侵袭迁移能力。结论:FAL1-siRNA能够下调hela细胞FAL1的表达,进而抑制人宫颈癌细胞hela的增殖及其侵袭迁移能力,提示长链非编码RNA FAL1在宫颈癌中是一种癌基因,FAL1的表达异常增高可能是宫颈癌发生发展的重要分子机制。

关键词：长链非编码RNAFAL1 人宫颈癌细胞hela 正常人宫颈永生化上皮细胞系H8 增殖侵袭与迁移宫颈癌

酚红对无血清悬浮培养条件下肿瘤干细胞微球形成的影响

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华西药学杂志 2017年第4期32卷 388-390页

作者：曾琴徐凤姣熊昀包旭邓力四川大学华西药学院四川成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室四川成都610041

目的研究酚红对无血清悬浮培养条件下肿瘤干细胞微球形成的影响。方法将人胶质瘤细胞U251、人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞SMMC-7721、人宫颈癌细胞hela等细胞分为酚红组和无酚红组,分别悬浮培养于添加了生长因子的DMEM-F12培养基中,观... 详细信息

目的研究酚红对无血清悬浮培养条件下肿瘤干细胞微球形成的影响。方法将人胶质瘤细胞U251、人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞SMMC-7721、人宫颈癌细胞hela等细胞分为酚红组和无酚红组,分别悬浮培养于添加了生长因子的DMEM-F12培养基中,观察5 d后肿瘤干细胞微球的形成情况,并计算微球的形成率。结果 U215无酚红组细胞的微球形成率为3.38%,明显高于酚红组的(2.73%);MCF-7、SMMC-7721、hela无酚红组细胞的微球形成率分别为6.81%、7.75%、7.18%,酚红组的细胞均无微球形成。结论无血清悬浮培养肿瘤干细胞应采用无酚红培养基。

关键词：酚红无血清悬浮培养肿瘤干细胞微球人胶质瘤细胞U251 人乳腺癌细胞MCF-7 人肝癌细胞SMMC-7721 人宫颈癌细胞hela