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基于碳纳米管的脂质体电化学发光免疫传感器检测人免疫球蛋白g

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分析化学 2010年第9期38卷 1329-1332页

作者：李玲王海燕孙东艳龚武王伦安徽师范大学化学与材料科学学院安徽省生物传感省级重点实验室

将人免疫球蛋白g(hIgg)抗体固定在多壁碳纳米管修饰的玻碳电极表面,制备了一种电化学发光(ECL)免疫传感器。以hIgg抗体标记的联吡啶钌脂质体为标记物,采用三明治型检测方式,成功建立了hIgg的ECL免疫检测技术。电化学发光强度与hIgg的浓... 详细信息

将人免疫球蛋白g(hIgg)抗体固定在多壁碳纳米管修饰的玻碳电极表面,制备了一种电化学发光(ECL)免疫传感器。以hIgg抗体标记的联吡啶钌脂质体为标记物,采用三明治型检测方式,成功建立了hIgg的ECL免疫检测技术。电化学发光强度与hIgg的浓度在0.01～0.8μg/L范围内呈良好的线性关系;线性回归方程为y=618.7x(μg/L)-23.9(n=6,r=0.995);检出限为0.004μg/L。用于人血清中hIgg的检测,结果令人满意。

关键词：电化学发光碳纳米管脂质体免疫传感器人免疫球蛋白g

人免疫球蛋白g的Fab和Fc片段制备及层析分离研究

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人免疫球蛋白G的Fab和Fc片段制备及层析分离研究

作者：唐思远浙江大学

学位级别：硕士

人免疫球蛋白g(hIgg)在木瓜蛋白酶的作用下降解为Fab片段和Fc片段,相较于完整的抗体,抗体片段在生理和临床上有许多独特的意义。此外,探讨不同抗体片断与层析介质间的相互作用,也能为抗体分离纯化优化和新型配基设计提供实验依据。本论... 详细信息

人免疫球蛋白g(hIgg)在木瓜蛋白酶的作用下降解为Fab片段和Fc片段,相较于完整的抗体,抗体片段在生理和临床上有许多独特的意义。此外,探讨不同抗体片断与层析介质间的相互作用,也能为抗体分离纯化优化和新型配基设计提供实验依据。本论文从抗体片段的制备入手,研究不同混合模式层析介质对抗体片段的吸附情况,探讨抗体片段分离纯化新方法。主要结果如下：首先优化了木瓜蛋白酶降解血清来源人免疫球蛋白g的酶解条件,并制备了Fab和Fc片段。通过调节酶解反应pH、酶加入量、半胱氨酸加入量以及酶解反应时间等,优化酶解反应过程,得到Fab和Fc片段含量较高的酶解液。酶解优化条件为：101ng/ml hIgg、0.5mg/ml木瓜蛋白酶、10mmM半胱氨酸、2rnM EDTA,pH7.6,酶解时间4h,hIgg的酶解转化率达到98%以上,并且杂片段含量较少。酶解液通过Protein A亲和层析和DEAE阴离子交换层析两步法纯化,得到Fab片段纯度96.6%,收率为40.1%,Fc片段纯度95.7%,收率为72.6%。利用自制的抗体Fab片段和Fc片段,考察了MEP HyperCel、 Capto adhere和Toyopearl MX-Trp-650M三种混合模式层析介质对抗体片段的吸附情况,发现阴子离交换型混合模式介质Capto adhere对两种片段有一定的选择性,在pH7-pH8附近对Fc片段的吸附能力要显著强于Fab片段。MEP HyperCel介质和Toyopearl MX-Trp-650M介质对两种片段的吸附在不同pH下差异均不大。结合优化的酶解条件以及混合模式层析对Fab片段和Fc片段的吸附差异,选用Capto adhere介质,在pH7.5下对酶解液进行层析分离,并通过Protein A亲和层析检测组分含量。发现Fc片段几乎完全被Capto adhere介质捕获,穿透峰仅含Fab片段,实现了抗体片段的有效分离。本文优化了木瓜蛋白酶酶解人免疫球蛋白g的酶解条件,采用Protein A亲和层析和DEAE阴离子交换层析两步法制备了较高纯度的Fab片段和Fc片段,考察了混合模式层析介质对两种片段的吸附差异,并实现了混合模式层析分离抗体片段。研究结果有助于开发抗体片段制备的新工艺,以及探讨混合模式层析分离抗体的机制研究和配基优化设计。

关键词：人免疫球蛋白g Fab片段 Fc片段亲和层析离子交换层析混合模式层析

SPR生物传感器对人免疫球蛋白g与木瓜蛋白酶相互作用研究

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SPR生物传感器对人免疫球蛋白G与木瓜蛋白酶相互作用研究

作者：张延彪山东农业大学

学位级别：硕士

表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)技术，是一种无需标记、能实时在线监测生物分子相互作用、高灵敏快速检测技术。由于具有灵敏度高、所需试样少、样品无需标记及检测速度快等特点，被广泛应用于生命科学、环境科学、药... 详细信息

表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)技术，是一种无需标记、能实时在线监测生物分子相互作用、高灵敏快速检测技术。由于具有灵敏度高、所需试样少、样品无需标记及检测速度快等特点，被广泛应用于生命科学、环境科学、药物科学和食品安全等监测领域。自Liedberg等将SPR技术用于化学传感器研究领域以来，SPR传感器已逐渐成为传感器领域的研究热点。生物分子间的相互作用是一种基本的生命现象，生命体的机体功能是通过生物分子间的相互作用来实现的，生物分子间的相互作用是现代生命科学的研究重点之一。蛋白质是生命体内的基本生物分子，在生命过程中发挥着特殊的功能，蛋白质间的相互作用是生命科学及其相关科学领域内研究的重点。传统的分析检测方法(如放射免疫分析法、酶联免疫吸附法、亲和层析法等)都或多或少的存在一些缺点，如：需要对样品分子进行标记、费用高、耗时长、灵敏度低等。针对以上问题，本文选择傅里叶变换表面等离子共振(Fourier Transform-SurfacePlasmon Resonance, FT-SPR)生物传感器作为分析工具，对蛋白质间相互作用进行了研究。本文的主要研究内容包括： 1.采用自组装单分子膜技术和共价交联技术，以巯基丙酸(MPA)为基底，将牛血清白蛋白(BSA)结合到芯片的金膜表面。利用扫描电镜对芯片的修饰结果进行了表征，并与FT-SPR所得结果进行了对比。结果表明，BSA可以牢固的结合到经MPA、EDC/NHS修饰后的芯片表面。 2.以BSA为模型蛋白，研究FT-SPR在蛋白质相互作用研究上的应用。在芯片金膜表面通过自组装将MPA固定，作为基底膜，将BSA连结到基底膜上，形成以BSA为表面的生物传感器芯片。以木瓜蛋白酶作为反应蛋白，利用FT-SPR生物传感器检测BSA与木瓜蛋白酶的相互作用。以响应信号对木瓜蛋白酶浓度作图，得到拟合曲线y＝－1.122×10x＋1.407，得出BSA与木瓜蛋白酶结合的KA=1.122×10。结果表明，木瓜蛋白酶与BSA的相互作用较弱，与文献报道一致。该实验表明，FT-SPR生物传感器可用于蛋白质相互作用的研究。 3.利用FT-SPR生物传感器研究hIgg与木瓜蛋白酶的相互作用。采用自行组装的FT-SPR装置，以MPA为基底膜，将hIgg共价键合在芯片表面。采用系列浓度木瓜蛋白酶溶液进样法，研究木瓜蛋白酶与hIgg的相互作用。采用弹性蛋白做参比蛋白进行控制实验证实，木瓜蛋白酶与hIgg相互结合的实验中所得FT-SPR信号变化是由木瓜蛋白酶与hIgg的特异性结合引起的。实验发现，在一定的浓度范围内，木瓜蛋白酶与hIgg的特异性结合与木瓜蛋白酶的浓度呈正相关。木瓜蛋白酶浓度与FT-SPR波数变量的线性拟合曲线的相关系数为0.99382。根据实验数据得出，木瓜蛋白酶与hIgg相互作用的最低反应浓度在1μg·mL到2μg·mL之间。在木瓜蛋白酶浓度为100μg·mL时，大约10%的hIgg被木瓜蛋白酶裂解，这与文献报道的结论是一致的。

关键词：表面等离子体共振生物传感器自组装单分子膜牛血清白蛋白人免疫球蛋白g 木瓜蛋白酶

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人免疫球蛋白g含量检测方法的研究进展

齐鲁药事 2012年第9期31卷 536-538页

作者：李虎臧恒昌张惠山东大学药学院山东济南250012 山东泰邦生物制品有限公司山东泰安271000 国家糖工程技术研究中心山东济南250012

人免疫球蛋白g(Igg)是人体的主要抗体,合适的含量检测方法对多种疾病的临床诊断及其制剂的质量控制均有重大意义。本文就目前常用的Igg检测方法进行了综述,并就其发展趋势进行了探讨。

关键词：人免疫球蛋白g 含量检测免疫学

基于铋纳米片的无标记电化学免疫传感器用于人免疫球蛋白g的检测

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基于铋纳米片的无标记电化学免疫传感器用于人免疫球蛋白G的检测

抗人免疫球蛋白g多克隆荧光抗体的制备及在肾活检中的应用

中国化学会第十四届全国电分析化学学术会议

作者：宋琳陈小燕安雅睿上海理工大学

人免疫球蛋白g(HIgg)是人血清中的一种重要成分。正常成年人的Ig g浓度范围为9.4-15.1g/L。当免疫球蛋白水平较高时会引起类风湿性关节炎,肝脏疾病和传染病[2];免疫球蛋白水平过低会引起体液免疫缺陷和代谢性疾病。因此,开发一种快速灵... 详细信息

人免疫球蛋白g(HIgg)是人血清中的一种重要成分。正常成年人的Ig g浓度范围为9.4-15.1g/L。当免疫球蛋白水平较高时会引起类风湿性关节炎,肝脏疾病和传染病[2];免疫球蛋白水平过低会引起体液免疫缺陷和代谢性疾病。因此,开发一种快速灵敏检测人血清中Igg的分析方法对于临床诊断十分必要。文章构建了一种基于铋纳米片/多壁碳纳米管-壳聚糖-金纳米粒子纳米复合材(BiNS/MWCNTsChit-AuNPs)的无标记电化学免疫传感器,用于检测人免疫球蛋白。金纳米粒子和多壁碳纳米管具有优良的导电性,可以促进电极表面的电子转移。采用水相中一步合成法制备的铋纳米片具有较大比表面积,能负载更多数量抗原,为抗原抗体的特异性反应提供更大平台。[4]同时,铋纳米片与多壁碳纳米管-壳聚糖-金纳米颗粒之间的协同作用进一步促进了电极界面的电子转移。在最佳实验条件下,该免疫传感器对Igg的分析具有较宽的线性范围:0.01 ng/mL-1000 ng/mL,检出限为4.26 pg/mL,良好的重现性和优异的抗干扰能力表明其具有实际样品检测的潜力。

关键词：人免疫球蛋白g 多壁碳纳米管铋纳米片金纳米粒子

来源： cnki会议评论

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医学研究生学报 2005年第12期18卷 1098-1101,i0019页

作者：段春光刘彦仿杨守京王彩云余璐第四军医大学病理学教研科陕西西安710032

目的:制备抗人免疫球蛋白g(Igg)多克隆荧光抗体,并用于肾病的病理诊断。方法:以免疫新西兰兔制备多克隆抗体,用亲和层析的方法纯化抗体,并用ELISA法双向琼脂扩散,W esten-b lot和免疫组化等方法对多克隆抗体进行测定。纯化的抗体标记荧... 详细信息

目的:制备抗人免疫球蛋白g(Igg)多克隆荧光抗体,并用于肾病的病理诊断。方法:以免疫新西兰兔制备多克隆抗体,用亲和层析的方法纯化抗体,并用ELISA法双向琼脂扩散,W esten-b lot和免疫组化等方法对多克隆抗体进行测定。纯化的抗体标记荧光素,用免疫组化的方法鉴定并用于临床肾病的辅助诊断。结果:获得的抗体琼脂双扩滴度为1∶32。ELISA法测定效价为1∶128 000,W esten-b lot证实抗体特异性识别人Igg。纯化后抗体效价仍有1∶56 000,灰度分析证实纯化后的抗体纯度达80%。间接法免疫组化检测抗体滴度为1∶800。标记荧光后效价无明显下降,免疫组化鉴定在临床病例中该荧光抗体能特异性识别人Igg。结论:得到纯化后的抗人Igg抗体有良好的特异性和亲和性,抗体的结合力较高,标记荧光后得到的多克隆荧光抗体对具有Igg阳性的肾组织反应特异性强,与商品化的抗人Igg抗体比较,效价及特异性均无显著差异,可用于肾病的临床诊断。

关键词：人免疫球蛋白g 多克隆抗体荧光抗体病理诊断

基于核壳型荧光纳米颗粒检测的人免疫球蛋白g免疫分析方法研究

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食品与生物技术学报 2010年第1期29卷 110-117页

作者：徐欢王周平杨震吴佳食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏无锡214122 江南大学食品学院江苏无锡214122

生物分子标记的荧光检测技术已广泛应用于生物学检测和疾病诊断。实验利用反向微乳液技术,制备出Ru（bpy）3Cl2掺杂SiO2荧光纳米粒子。Igg的检测是基于Igg和荧光纳米颗粒标记的羊抗人Igg的特异性结合。实验中,Igg检测的线性范围为1-100 ... 详细信息

生物分子标记的荧光检测技术已广泛应用于生物学检测和疾病诊断。实验利用反向微乳液技术,制备出Ru（bpy）3Cl2掺杂SiO2荧光纳米粒子。Igg的检测是基于Igg和荧光纳米颗粒标记的羊抗人Igg的特异性结合。实验中,Igg检测的线性范围为1-100 ng/mL,检出限达到0.3ng/mL,对30 ng/mL人Igg进行11次检测,相对标准偏差为2.2%。实验结果表明,该检测新方法具有检测灵敏度高、操作简单和重复性好。

关键词：核壳型荧光纳米颗粒联吡啶钌荧光检测人免疫球蛋白g

基于电化学聚合固定抗体的电化学发光免疫分析法检测人免疫球蛋白

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分析化学 2009年第1期37卷 8-12页

作者：云雯王晓英董平朱金坤徐颖何品刚方禹之华东师范大学化学系

基于电化学聚合在金电极表面固定兔抗人免疫球蛋白g抗体与人免疫球蛋白g及标记有Ru(bpy)32+的羊抗人免疫球蛋白g抗体之间发生特异性免疫反应,形成三明治结构,成功建立了用于测定人血清中免疫球蛋白g的电化学发光(ECL)免疫技术。利用此... 详细信息

基于电化学聚合在金电极表面固定兔抗人免疫球蛋白g抗体与人免疫球蛋白g及标记有Ru(bpy)32+的羊抗人免疫球蛋白g抗体之间发生特异性免疫反应,形成三明治结构,成功建立了用于测定人血清中免疫球蛋白g的电化学发光(ECL)免疫技术。利用此方法测定人免疫球蛋白g含量,浓度在50μg/L～2mg/L范围内与电化学发光强度呈良好的线性关系,线性回归方程为y(a.u.)=48.41+0.09x(μg/L)(n=7);检出限为20μg/L(3σ)。测得正常人血清中免疫球蛋白g平均含量为11.2g/L,结果令人满意。

关键词：人免疫球蛋白g 电化学发光免疫检测电化学聚合

蛋白A高效亲和膜色谱法测定人血浆中免疫球蛋白g的含量

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色谱 1998年第3期16卷 195-197页

作者：周冬梅邹汉法杨利贾凌云张玉奎中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心

研究了蛋白Ａ高效亲和膜色谱对水溶液及人血浆中人免疫球蛋白Ｇ（ＨＩｇＧ）的特异性吸附和定量测定。方法具有较高的精确度和较好的重复性：ＨＩｇＧ标样５次重复进样的相对标准偏差为１．５％，人血浆样品３次重复进样的相对标准偏差... 详细信息

研究了蛋白Ａ高效亲和膜色谱对水溶液及人血浆中人免疫球蛋白Ｇ（ＨＩｇＧ）的特异性吸附和定量测定。方法具有较高的精确度和较好的重复性：ＨＩｇＧ标样５次重复进样的相对标准偏差为１．５％，人血浆样品３次重复进样的相对标准偏差为３．６％；所测得的定量标定曲线的线性相关系数达到０．９９９３；不含己二胺间隔臂的亲和介质的非特异性吸附极低，基本检测不出来。快速实验中，一次分析可在０．５ｍｉｎ内完成。实验表明，利用所建立的方法对人血浆中的ＨＩｇＧ进行定量测定可以得到较为满意的结果。

关键词：高效亲和膜色谱蛋白A 人免疫球蛋白g HIgg 分析