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消皮素B在人主动脉夹层组织中的表达变化及对主动脉平滑肌细胞焦亡、炎症反应的影响

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山东医药 2024年第11期64卷 6-10页

作者：沈小艳谢孝平李博文王志维武汉大学人民医院心血管外科武汉430060

目的观察人主动脉夹层组织消皮素B(GSDMB)表达变化,并探讨GSDMB对人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)焦亡和炎症反应的影响。方法收集主动脉夹层患者的主动脉夹层组织、器官捐献者的主动脉组织(正常对照组织)各8例份,采用Western blotting法检... 详细信息

目的观察人主动脉夹层组织消皮素B(GSDMB)表达变化,并探讨GSDMB对人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)焦亡和炎症反应的影响。方法收集主动脉夹层患者的主动脉夹层组织、器官捐献者的主动脉组织(正常对照组织)各8例份,采用Western blotting法检测GSDMB蛋白表达。将对数生长期的HASMCs分为NC-siRNA组(转染NC-siRNA)、脂多糖(LPS)组(LPS作用)、GSDMB-siRNA组(转染GSDMB-siRNA)、GSDMB-siRNA+LPS组(LPS作用后转染GSDMB-siRNA),另将HASMCs分为空载质粒组(转染空载质粒)、LPS作用组(LPS作用)、GSDMB过表达组(转染GSDMB过表达质粒)、GSDMB过表达+LPS组(LPS作用后转染GSDMB过表达质粒),采用Western blotting法检测细胞GSDMB、半胱氨酸蛋白酶4(Caspase-4)、消皮素D(GSDMD)、N-消皮素D(N-GSDMD)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达,流式细胞术检测细胞焦亡率,ELISA法检测细胞上清液白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果主动脉夹层组织与正常对照组织GSDMB蛋白相对表达量分别为0.88±0.16、0.62±0.15,二者比较P细胞焦亡率及细胞上清液IL-18、IL-1β水平均升高,GSDMB-siRNA组仅GSDMB蛋白相对表达量降低(P均细胞焦亡率及细胞上清液IL-18、IL-1β水平均降低(P均细胞焦亡率及细胞上清液IL-18、IL-1β水平均升高(P均细胞焦亡率及细胞上清液IL-18、IL-1β水平均升高(P均主动脉夹层组织GSDMB表达升高;GSDMB不会影响正常HASMCs的焦亡和炎症反应,但会通过Caspase-4介导的非经典途径正向调控LPS诱导的HASMCs焦亡和炎症反应。

关键词：消皮素B 主动脉夹层人主动脉平滑肌细胞细胞焦亡炎症反应半胱氨酸蛋白酶4

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基于AMPKα/mTOR/p70S6K通路探讨补肾抗衰片类脂联素受体激动剂样作用干预人主动脉平滑肌细胞增殖的机制

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中华中医药杂志 2023年第10期38卷 4711-4716页

作者：庞树朝陈美玲张军平天津中医药大学第一附属医院天津300381 国家中医针灸临床医学研究中心天津300381 天津中医药大学天津300381

目的:基于AMPKα/mTOR/p70S6K通路探讨补肾抗衰片(以下简称中药)类脂联素受体激动剂(AdipoRon)样作用影响人主动脉平滑肌细胞(HASMC)增殖的可能机制。方法:复制PDGF诱导HASMC增殖模型。随机分为对照组、模型组、中药高剂量组、中药低剂... 详细信息

目的:基于AMPKα/mTOR/p70S6K通路探讨补肾抗衰片(以下简称中药)类脂联素受体激动剂(AdipoRon)样作用影响人主动脉平滑肌细胞(HASMC)增殖的可能机制。方法:复制PDGF诱导HASMC增殖模型。随机分为对照组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、阿托伐他汀(以下简称西药)高剂量组和西药低剂量组。用Western Blot法检测药物对PDGF诱导的HASMC上细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、脂联素受体(AdipoR)以及AMPKα/mTOR/p70S6K通路相关蛋白表达的影响。结果:与对照组比较,模型组HASMC经PDGF诱导后,其Cyclin D1蛋白表达显著升高(P<0.01);AdipoR1、AdipoR2蛋白表达显著降低(P<0.01);p-AMPKα/AMPKα显著降低(P<0.01),p-mTOR/mTOR和p-p70S6K/p70S6K显著升高(P<0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组能够抑制PDGF诱导的HASMC增殖,并显著降低Cyclin D1蛋白的表达水平(P<0.01,P<0.05)。中药高剂量组能够显著增强AdipoR1和AdipoR2蛋白表达水平(P<0.01),激活AMPKα蛋白并促进其磷酸化,上调p-AMPKα/AMPKα(P<0.01),进而抑制mTOR、p70S6K蛋白表达,下调pmTOR/mTOR和p-p70S6K/p70S6K(P<0.01)。中药低剂量组能够增强AdipoR1和AdipoR2蛋白表达水平(P<0.01,P<0.05),能够抑制mTOR、p70S6K蛋白表达,下调pmTOR/mTOR和p-p70S6K/p70S6K(P<0.05,P<0.01);其虽可激活AMPKα蛋白表达,但无法上调pAMPKα/AMPKα(P<0.01)。结论:高剂量的补肾抗衰片能够通过干预AMPKα/mTOR/p70S6K通路进而抑制HASMC增殖,其具体机制依赖于补肾抗衰片对AdipoR1和AdipoR2表达的上调作用,提示补肾抗衰片具有类AdipoRon样作用。

关键词：补肾抗衰片脂联素抵抗脂联素受体人主动脉平滑肌细胞 AMPKα/mTOR/p70S6K通路

人主动脉平滑肌细胞表型转化的ceRNA网络研究

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中国分子心脏病学杂志 2023年第1期23卷 5205-5213页

作者：刘丹任晓晓吴佳妮李之凡杨彬吴娜琼王来元北京协和医学院、中国医学科学院、阜外医院、心血管疾病国家重点实验室、中国医学科学院心血管流行病重点实验室、流行病研究部北京市100037

目的基于全转录组测序数据,构建人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMCs)表型转化模型的竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)调控网络,筛选HASMCs表型转化的关键ceRNA调控轴。方法使用血小板源性生... 详细信息

目的基于全转录组测序数据,构建人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMCs)表型转化模型的竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)调控网络,筛选HASMCs表型转化的关键ceRNA调控轴。方法使用血小板源性生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)处理构建HASMCs表型转化模型。定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)验证模型构建成功后进行全转录组测序,筛选出差异表达的信使RNA(messenger RNAs,mRNAs)、微小RNA(microRNAs,miRNAs)以及长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)。对差异表达mRNAs进行基因功能分析和信号通路注释,通过生信分析及数据库预测,构建基于lncRNA-miRNA-mRNA的ceRNA网络。结果HASMCs表型转化模型全转录组测序共筛选出326个差异表达的lncRNAs、34个差异表达的miRNAs、1785个差异表达的mRNAs。差异表达的mRNA涉及TGF-β信号通路、Ras信号通路。ceRNA网络包含4个lncRNA节点、4个miRNA节点和83个mRNA节点,其中由NONHSAT253669.1介导的ceRNA调控轴在HASMCs的表型转化中可能发挥重要调控作用。结论成功绘制HASMCs表型转化的ceRNA网络,筛选关键ceRNA调控轴,有望为HASMCs表型转化异常所致心血管疾病的防治提供新的线索和策略。

关键词：人主动脉平滑肌细胞表型转化长链非编码RNA 竞争性内源RNA

人主动脉平滑肌细胞感染甲型和乙型流感病毒后细胞因子表达的变化

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医学研究生学报 2019年第2期32卷 132-137页

作者：朱紫衣王文博江忠勇刘媛常凯叶雨笙熊杰西南医科大学临床医学院泸州医学硕士研究生646000 西部战区疾病预防控制中心成都610021 西部战区总医院检验科成都610083

目的血管平滑肌细胞为动脉粥样硬化(AS)病变组织的主要细胞之一。流感病毒对人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)的感染及对其细胞因子表达的影响报道较少。文中旨在探讨甲型流感病毒(IAV)和乙型流感病毒(IBV)感染HASMCs及对其细胞因子表达的影... 详细信息

目的血管平滑肌细胞为动脉粥样硬化(AS)病变组织的主要细胞之一。流感病毒对人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)的感染及对其细胞因子表达的影响报道较少。文中旨在探讨甲型流感病毒(IAV)和乙型流感病毒(IBV)感染HASMCs及对其细胞因子表达的影响。方法采用IAV和IBV刺激HASMCs,分别为甲型组、乙型组,另设对照组(不加病毒)。免疫荧光法检测细胞内流感病毒核蛋白表达,CCK8法检测细胞增殖,甲型组、乙型组取上清液分别加入正常培养基和病毒生长液,RT?PCR检测流感病毒RNA水平的变化,并用收集的上清液感染MDCK细胞,检测流感病毒核蛋白。RT?PCR检测感染流感病毒24 h后细胞因子的表达变化。结果 CCK8实验结果显示,HASMCs感染流感病毒后第3、4天,甲型组、乙型组细胞增殖较对照组明显减慢(P细胞上清RNA表达量较第2天明显增加(P细胞上清RNA表达量较第3天明显下降(P细胞因子(IL?6、TNF?α、MCP?1)表达的增加,为流感病毒感染导致AS的机制研究提供了理论依据。

关键词：流感病毒动脉粥样硬化人主动脉平滑肌细胞细胞因子

高钙磷激活DNA损伤应答诱导人主动脉平滑肌细胞早衰

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基础医学与临床 2023年第8期43卷 1234-1240页

作者：范志娟武玉晶田亚琼刘爽张蝶刘树业天津市第三中心医院检验科天津市重症疾病体外生命支持重点实验室天津市人工细胞工程技术研究中心天津市肝胆疾病研究所天津300170

目的探讨DNA损伤应答(DDR)通路调控人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)钙化机制。方法将HASMCs分为对照组、模型组、ATM干预组、PARP干预组,培养12 d。茜素红-S染色法定性和邻-甲酚酞法定量检测细胞钙化;Western blot检测组蛋白γH2AX磷酸化、... 详细信息

目的探讨DNA损伤应答(DDR)通路调控人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)钙化机制。方法将HASMCs分为对照组、模型组、ATM干预组、PARP干预组,培养12 d。茜素红-S染色法定性和邻-甲酚酞法定量检测细胞钙化;Western blot检测组蛋白γH2AX磷酸化、p16和p21、ATM上Ser1981的磷酸化水平;β-半乳糖苷酶染色检测细胞早衰;qPCR检测p16和p21 mRNA水平。8-羟基-2′-脱氧鸟苷(8-OHDG)检测氧化应激水平,ELISA方法检测IL-6、IL-8水平。结果模型组较对照组钙化明显,8-OHDG、组蛋白γH2AX磷酸化、β-半乳糖苷酶染色、p16的mRNA和蛋白、p21 mRNA、IL6和IL8、ATM磷酸化等指标有显著变化(P细胞早衰导致钙化。

关键词： Ca^(2+)/P DNA损伤应答细胞早衰人主动脉平滑肌细胞血管钙化

尿毒症血清诱导的磷酸钙晶体对人主动脉平滑肌细胞的钙化作用

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中华肾脏病杂志 2013年第5期29卷 364-369页

作者：刘曜蓉方炜张琳林爱武倪兆慧钱家麒上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科上海市腹膜透析研究中心分子细胞(肾病)实验室 200127

目的探讨尿毒症患者血清诱导的磷酸钙晶体对人主动脉平滑肌细胞（HASMCs）钙化的影响。方法尿毒症患者血清在37℃下孵育3d，超速离心法从尿毒症血清中分离磷酸钙晶体和无晶体血清，采用扫描电子显微镜和能量色散X射线光谱仪分析晶体的... 详细信息

目的探讨尿毒症患者血清诱导的磷酸钙晶体对人主动脉平滑肌细胞（HASMCs）钙化的影响。方法尿毒症患者血清在37℃下孵育3d，超速离心法从尿毒症血清中分离磷酸钙晶体和无晶体血清，采用扫描电子显微镜和能量色散X射线光谱仪分析晶体的形态及化学特征。体外培养HASMCs，分为以下4组：对照组、尿毒症血清组、磷酸钙晶体组和无晶体血清组。茜素红染色及甲氧酚酞络合酮法检测HASMCs钙化结节的形成及细胞内钙含量。实时荧光定量PCR法检测骨形态发生蛋白2（BMP．2）、骨桥蛋白（OPN）、核结合因子α1亚基（Cbfαl）、碱性磷酸酶（ALP）、基质1羧基谷氨酸蛋白（MGP）的mRNA表达。Cbfctl、OPN和BMP-2的蛋白表达用Western印迹和ELISA法检测。结果尿毒症血清可诱导磷酸钙晶体形成。与对照组相比，尿毒症血清明显促进HASMCs钙化结节形成，增加细胞内钙含量（P〈0．05），并上调细胞BMP-2、OPN、Cbfcd的mRNA和蛋白表达（均P〈0．01）；而磷酸钙晶体亦促进HASMCs钙化结节的形成，增加细胞内钙含量（P〈0．05），上调BMP-2、OPN、Cbfα1的mRNA和蛋白表达（均P〈0．01）。无晶体血清组的HASMCs胞内钙含量和上述成骨蛋白的表达与对照组差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论尿毒症血清可能通过诱导磷酸钙晶体的形成促进血管钙化的发生。

关键词：尿毒症磷酸钙类钙质沉着症血清人主动脉平滑肌细胞

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人主动脉平滑肌细胞体外分离及培养

临床军医杂志 2021年第10期49卷 1117-1121,1126页

作者：王静李逸明刘丹宋海旭闫承慧田孝祥北部战区总医院心血管内科辽宁沈阳110016 锦州医科大学研究生院辽宁锦州121001

目的探讨人主动脉平滑肌细胞(HAoSMC)的体外分离及培养方法。方法人升主动脉组织取自在北部战区总医院接受外科主动脉置换手术的A型主动脉夹层患者。无菌条件下撕除主动脉内膜,获得中膜,将中膜剪成约2 mm长的组织块,用0.15%的Ⅱ型胶原... 详细信息

目的探讨人主动脉平滑肌细胞(HAoSMC)的体外分离及培养方法。方法人升主动脉组织取自在北部战区总医院接受外科主动脉置换手术的A型主动脉夹层患者。无菌条件下撕除主动脉内膜,获得中膜,将中膜剪成约2 mm长的组织块,用0.15%的Ⅱ型胶原酶消化组织块10 h,吹打后接种于6孔板中,显微镜下观察培养不同时间点的细胞形态特征,免疫荧光染色法检测平滑肌细胞标志物SMα-actin及SM 22α的表达。结果胶原酶消化法可成功将平滑肌细胞从主动脉中膜分离出来。分离出的细胞在培养第1天开始贴壁,第7天呈现典型长梭形,第14天基本融合。培养的细胞SMα-actin及SM 22α染色阳性。结论本研究采用酶消化法成功从主动脉夹层患者标本中分离并培养出HAoSMC,为进一步阐明主动脉疾病的发病机制奠定了基础。

关键词：人主动脉平滑肌细胞分离培养酶消化法主动脉夹层

p38 MAPK信号通路调控人主动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达

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山东大学学报（医学版） 2016年第8期54卷 12-16页

作者：王晓琳周元丽孙伟李莉山东大学附属济南市中心医院心内科山东济南250013 山东大学附属济南市中心医院保健科山东济南250013 济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院山东济南250062

目的探讨p38 MAPK对人主动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响。方法分别使用药理学抑制剂和siRNA干预细胞。药理学抑制剂试验细胞分为:1正常对照组,平滑肌细胞完全培养基正常培养;2 DMSO(p38 MAPK抑制剂溶剂)对照组,0.01%DMSO处理;3... 详细信息

目的探讨p38 MAPK对人主动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响。方法分别使用药理学抑制剂和siRNA干预细胞。药理学抑制剂试验细胞分为:1正常对照组,平滑肌细胞完全培养基正常培养;2 DMSO(p38 MAPK抑制剂溶剂)对照组,0.01%DMSO处理;3 p38 MAPK抑制剂组,0.01%p38 MAPK抑制剂(20 mg/m L)处理。基因沉默试验细胞分为:1静态对照组,平滑肌细胞完全培养基正常培养;2阴性对照siRNA组,M ACSfectin试剂转染阴性对照siRNA 48 h;3 p38 M APK siRNA组,M ACSfectin试剂转染p38 M APK siRNA 48 h。采用qRT-PCR法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达;采用Western blotting法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达以及p38 MAPK转染效率;荧光显微镜观察siRNA转染效率。结果与正常对照组相比,DMSO对照组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达无明显变化(P>0.05),p38 MAPK抑制剂组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达显著降低(P细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达无明显变化(P>0.05),p38 MAPK siRNA组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达显著降低(P人主动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。

关键词： p38 MAPK Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原人主动脉平滑肌细胞

胃促生长素对人主动脉平滑肌细胞增殖及线粒体融合蛋白2表达的影响

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重庆医学 2017年第15期46卷 2034-2036页

作者：何永铭宋明宝胡建波张源萍李佑美第三军医大学新桥医院心血管内科重庆400037

目的通过体外培养人主动脉平滑肌细胞(HASMCs),研究胃促生长素(ghrelin)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及线粒体融合蛋白2(Mfn-2)表达的影响。方法体外培养HASMCs,第4~6代细胞用于试验。给予不同浓度(10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、... 详细信息

目的通过体外培养人主动脉平滑肌细胞(HASMCs),研究胃促生长素(ghrelin)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及线粒体融合蛋白2(Mfn-2)表达的影响。方法体外培养HASMCs,第4~6代细胞用于试验。给予不同浓度(10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5) mol/L)的ghrelin或10^(-6) mol/L ghrelin不同时间(0、6、12、18、24h)处理,用四甲基偶氮唑蓝比色(MMT)法观察其对HASMC增殖的影响。RT-PCR,Western blot方法检测不同处理方法对Mfn-2表达的影响。结果 10^(-7)~10^(-5) mol/L的ghrelin可明显抑制HASMC增殖,浓度为10^(-6) mol/L抑制作用最为明显(P<0.01)。ghrelin在6~24h内均能明显抑制HASMC增殖,在24h达最高峰(P<0.01)。10^(-6) mol/L ghrelin能明显上调Mfn-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。10^(-6)mol/L ghrelin在18h上调Mfn-2mRNA和蛋白表达的作用最为明显(P<0.01)。结论 ghrelin可能通过上调Mfn-2的表达来抑制HASMC增殖。

关键词：胃促生长素肌,平滑,血管主动脉人主动脉平滑肌细胞增殖线粒体融合蛋白-2