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单克隆抗体亲和力常数的简易测定

现代免疫学 1991年第2期11卷 110-75页

作者：王越剑王建武刘庆良实习生卫生部上海生物制品研究所免疫研究室上海科技大学86级生化工程系卫生部上海生物制品研究所免疫研究室上海 200052

在我们成功制备抗人类重组基因α-干扰素(rHu-IFN-α)单克隆抗体杂交瘤细胞株基础上,我们准备选择亲和力适中的单抗来制备亲和层析柱,以纯化相应抗原。由于放射免疫测定单抗亲和力常数(Kaff)要求高,较难广泛应用。现我们采用Beatty等改... 详细信息

在我们成功制备抗人类重组基因α-干扰素(rHu-IFN-α)单克隆抗体杂交瘤细胞株基础上,我们准备选择亲和力适中的单抗来制备亲和层析柱,以纯化相应抗原。由于放射免疫测定单抗亲和力常数(Kaff)要求高,较难广泛应用。现我们采用Beatty等改进的间接ELISA测定了五种单抗的Kaff

关键词：单克隆抗体亲和力常数

蛋白质-RNA基于氨基酸序列的无序性和磷酸化分析及亲和力常数数据集的构建

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蛋白质-RNA基于氨基酸序列的无序性和磷酸化分析及亲和力常数数据...

作者：阳秀凤华中科技大学

学位级别：硕士

无序蛋白质是一种新型蛋白质，在天然状态并不具有稳定的三维结构，但是仍具有生物活性，这是对传统蛋白质“序列－结构－功能”范式的挑战。在天然条件下，无序蛋白质是多种构象共存、不断实现动态变化的系综，这种结构特征使得无序蛋... 详细信息

无序蛋白质是一种新型蛋白质，在天然状态并不具有稳定的三维结构，但是仍具有生物活性，这是对传统蛋白质“序列－结构－功能”范式的挑战。在天然条件下，无序蛋白质是多种构象共存、不断实现动态变化的系综，这种结构特征使得无序蛋白质在细胞信号传导、分子识别等各种生命活动中扮演重要角色。深入研究无序蛋白质，将促进人们更好地认识对蛋白质结构与功能之间的关系。尽管在蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用中，采用生物信息学方法，对蛋白质的无序性与功能之间的关联性研究越来越多，但是在蛋白质-RNA相互作用中仍然相对很少。在这里，我们开展了这方面的研究，主要工作分为两个部分。第一部分是对人类基因组中RNA结合蛋白质的无序性及无序性与磷酸化位点的相关性进行分析。结果显示RNA结合蛋白质中的无序残基含量更高，具有更多的无序尾端，并且RNA结合蛋白质中的57.52%磷酸化位点位于无序残基上，跟DNA结合蛋白质相近，高于非RNA结合蛋白质。第二部分是研究PDB数据库中具有磷酸化位点信息的RNA结合蛋白质的无序性、磷酸化作用对蛋白质-RNA结合的影响。结果表明RNA结合蛋白质上的无序残基趋向位于蛋白质-RNA结合界面之外的区域，磷酸化位点趋向位于结合界面上，但在该数据集中磷酸化位点与无序位点并不具有相关性。最后，为了更好的研究蛋白质-RNA相互作用，我们还构建了一个基于结构的蛋白质-RNA亲和力常数数据集，并用于蛋白质-RNA对接打分函数的评估。这一数据集将有利于促进蛋白质-RNA对接和结合机制的研究

关键词：无序蛋白质磷酸化作用 RNA结合蛋白质相关性亲和力常数

一种放射配体结合测定中亲和力常数的计算方法

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同济医科大学学报 1986年第4期 288-290页

作者：徐中良张扬刚叶维新同济医科大学实验医学研究中心核医学研究室

在放射配体结合测定中,亲和力常数K值的计算均离不开标记配体浓度一项。然而在实际计算中,标记配体浓度无法知道或难以准确知道,导致K值无法计算.为了消除这一因素,本文依据第一

关键词：放射配体亲和力常数计算公式浓度值质量作用定律分子浓度定律 EDS

用竞争结合分析法测^(125)I-BAC5的亲和力常数Ka值

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放射免疫学杂志 1996年第5期9卷 269-270页

作者：任均田谢春霖李峰刘淑娥广州一五七医院医学实验科 510510

放射性核素标记单克隆抗体(McAb)的临床应用愈来愈受人重视。核素标记抗体在应用前有许多质量参数应该确定,其中抗体的亲和力常数Ka值就是一项重要指标。我们用竞争结合法测定Mcab的Ka值,取得满意结果,现报告如下。材料和方法一、材... 详细信息

放射性核素标记单克隆抗体(McAb)的临床应用愈来愈受人重视。核素标记抗体在应用前有许多质量参数应该确定,其中抗体的亲和力常数Ka值就是一项重要指标。我们用竞争结合法测定Mcab的Ka值,取得满意结果,现报告如下。材料和方法一、材料: (一)抗低分化鼻咽癌单克隆抗体BAC5:复苏抗低分化鼻咽癌杂交瘤细胞株BAC5,培养至对数生长期,以3.5×10~5个细胞/0.5ml注入6～8周龄BALB/c经产母鼠腹腔,10～14天处死小鼠取腹水经硫酸铵粗提后,再经DEAE-Sepharose 6B柱层析进一步纯化,所获单抗BAC5的纯度为93％,属IgG2a亚类,用直线外推细胞结合分析法测免疫活性分数为86.8％。 (二)无截体(125)~Ⅰ(-Na^(125)Ⅰ):北京原子能研究院提供,用Iodogen法标记BAC5,(125)~Ⅰ标记率为88.6％。标记BAC5的放化纯度92.8％,比活度83MBq/mg,比浓度33.2MBq/ml。 (三)靶细胞为低分化鼻咽癌上皮细胞CNE-2,复苏后在5％CO_2培养箱培养至对数生长期使用。

关键词： McAb 亲和力常数 Ka值碘125 BAC5

利用噬菌体表面展示技术筛选转铁蛋白黏附肽的研究

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中国生物工程杂志 2010年第4期30卷 89-94页

作者：卢燕石屹峰大连工业大学生物与食品工程学院大连116034

为了筛选转铁蛋白黏附肽,应用噬菌体表面展示技术经过三轮生物淘选,成功地从随机七肽库中得到黏附转铁蛋白的重组噬菌体克隆,经过相对亲和力常数测定和DNA测序得到4个转铁蛋白黏附肽的序列。实验中以回收率和选择比为操作参数,对淘选进... 详细信息

为了筛选转铁蛋白黏附肽,应用噬菌体表面展示技术经过三轮生物淘选,成功地从随机七肽库中得到黏附转铁蛋白的重组噬菌体克隆,经过相对亲和力常数测定和DNA测序得到4个转铁蛋白黏附肽的序列。实验中以回收率和选择比为操作参数,对淘选进行了优化,并发展了一种基于噬菌体滴度的相对亲和力常数测定方法。转铁蛋白受体是一种有效的肿瘤标记物,利用转铁蛋白为载体可以实现药物靶向运输,因此转铁蛋白黏附肽将是重组蛋白质药物连接转铁蛋白的有用标签。

关键词：噬菌体表面展示技术转铁蛋白转铁蛋白黏附肽亲和力常数蛋白质标签

新烟碱类杀虫剂生物活性的理论研究和结构修饰

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化学通报 2015年第1期78卷 55-62页

作者：李鸣建冯长君徐州工程学院化学化工学院徐州221111

在B3LYP/6-311G基组水平下,运用密度泛函理论(DFT)的量子化学方法,对20种重氮乙烷新烟碱类杀虫剂分子的电子结构特征进行了研究,获得了它们的前线轨道能(EHOMO、ENHOMO、ELUMO、ENLUMO等)、原子电荷(Qi)、摩尔熵(Sm)、偶极矩(μ)等量化... 详细信息

在B3LYP/6-311G基组水平下,运用密度泛函理论(DFT)的量子化学方法,对20种重氮乙烷新烟碱类杀虫剂分子的电子结构特征进行了研究,获得了它们的前线轨道能(EHOMO、ENHOMO、ELUMO、ENLUMO等)、原子电荷(Qi)、摩尔熵(Sm)、偶极矩(μ)等量化参数与物理性质。经最佳变量子集回归研究发现,重氮乙烷新烟碱类杀虫剂分子对果蝇n AChRs、哺乳动物α4β2亚型的亲和力常数(p KD、p KA)分别与ELUMO、QW、QF、QN等参数具有良好的线性关系。逐一或逐四剔除交互验证以及VIF、tα/2检验,所建2个QSAR模型具有良好的稳健性及预测能力。根据2个QSAR模型推断了重氮乙烷新烟碱类分子可能的杀虫机理。进一步研究发现,在重氮乙烷新烟碱类分子的吡啶环上的合适部位,选用不含复键的吸电子能力较强的取代基团对其进行结构修饰,有利于提高修饰后分子的生物活性。基于分子17,设计出4种经结构修饰后对果蝇n AChRs亲和力显著提高的重氮乙烷新烟碱类分子(分别是分子27,28,30和31),希望能得到实验的证实。

关键词：新烟碱杀虫剂果蝇哺乳动物烟碱型乙酰胆碱受体亲和力常数密度泛函理论构效关系结构修饰

以CD79b为靶点抗体偶联药物结合活性的评价研究

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药物分析杂志 2022年第10期42卷 1754-1762页

作者：李萌赵雪羽俞小娟杨雅岚龙彩凤于传飞王兰中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629 中国药科大学南京211198

目的:建立抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE的表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)法和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法评价其结合活性。方法:采用SPR法,使用Protein A芯片,测定抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE与其靶点CD79b蛋白之间的动力学常数包括结合常数(K_(a))和解离常数(K_(d))、亲和力常数(K_(D))、半最大效应浓度(half maximal effective concentration,EC_(50))及相对效价;采用经典ELISA法测定抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC_(50)及相对效价。结果:经3次实验测定,抗CD79b单抗与CD79b的K_(a)为(2.61±0.14)×10^(6)L·mol^(-1)·s^(-1),K_(d)为(1.87±0.12)×10^(-2)s^(-1),K_(D)为(7.17±0.30)×10^(-9)mol·L^(-1),RSD均亲和力进行评价,与ELISA方法在EC_(50)及相对效价方面进行了对比,为该类抗体偶联药物的研发提供参考。

关键词：抗体偶联药物表面等离子共振酶联免疫吸附测定结合活性亲和力常数相对效价

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低氧运动对骨骼肌胰岛素受体亲和力的影响

北京体育大学学报 2007年第5期30卷 633-635,638页

作者：刘霞曾凡星叶鸣北京体育大学北京100084 首都体育学院运动生理教研室北京100088

目的:观察低氧运动对骨骼肌胰岛素受体亲和力的影响。方法:各组大鼠经过跑台运动和低氧暴露后,用受体放射性配基结合分析法(RBA)测定大鼠骨骼肌胰岛素受体亲和力。结果:1d急性低氧运动后,常氧运动组和高住低训组骨骼肌胰岛素受体高亲和... 详细信息

目的:观察低氧运动对骨骼肌胰岛素受体亲和力的影响。方法:各组大鼠经过跑台运动和低氧暴露后,用受体放射性配基结合分析法(RBA)测定大鼠骨骼肌胰岛素受体亲和力。结果:1d急性低氧运动后,常氧运动组和高住低训组骨骼肌胰岛素受体高亲和力常数(KD1)显著性增加(P亲和力受体结合容量(RT1)、低亲和力常数(KD2)和受体结合容量(RT2),在各组之间无显著性差异(P>0.05)。28d低氧运动后,各组之间高亲和力受体常数(KD1)、受体结合容量(RT1)无显著性差异(P>0.05),但低氧暴露组、常氧运动组及高住低训组的低亲和力受体常数(KD2)和受体结合容量(RT2)均有非常显著性增加(P亲和力受体的影响更为显著,使胰岛素受体亲和力下降,但同时使胰岛素受体密度显著增加,从而增强胰岛素对低氧和/或运动的反应能力。

关键词：低氧运动胰岛素受体亲和力常数结合容量

副溶血弧菌TDH单克隆抗体的研制与性质鉴定

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中国免疫学杂志 2012年第3期28卷 235-239页

作者：杨靖亚陆晓帆张建孙晓红晁若瑜钱媛华上海海洋大学食品学院上海201306

目的:制备副溶血弧菌耐热直接溶血毒素TDH单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法:用纯化的TDH毒素蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法进行阳性细胞筛选,有限稀释法进行亚克隆。并对该单克... 详细信息

目的:制备副溶血弧菌耐热直接溶血毒素TDH单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法:用纯化的TDH毒素蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法进行阳性细胞筛选,有限稀释法进行亚克隆。并对该单克隆抗体进行了分子量大小、效价、亚类、特异性和亲和力分析。结果:筛选出一株能够稳定分泌TDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为T9H4,其免疫球蛋白亚型鉴定为IgG1,亲和力常数可达2.19×109L/mol,并表现出较强的特异性。抗体纯化后效价达1∶1 024 000,SDS-PAGE电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为50 kD和轻链23 kD。结论:成功获得一株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,为开发免疫学快速检测方法提供重要实验基础。

关键词：副溶血弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞亲和力常数