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亮氨酸和组氨酸通过mTOR信号通路调控奶牛腺上皮细胞中酪蛋白的合成（英文）

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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2015年第6期16卷 560-572页

作者： Hai-na GAO Han HU Nan ZHENG Jia-qi WANG Ministry of Agriculture-Milk Risk Assessment Laboratory Institute of Animal ScienceChinese Academy of Agricultural Sciences College of Animal Science and Technology Gansu Agricultural University Ministry of Agriculture-Milk and Dairy Product Inspection Center State Key Laboratory of Animal Nutrition Institute of Animal ScienceChinese Academy of Agricultural Sciences

目的：以体外培养的永生化奶牛乳腺上皮细胞（CMEC-H）为模型,利用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测酪蛋白和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号路径元件的蛋白磷酸化表达。进一步探索亮氨酸和组氨酸通过mTOR信号途径调控酪蛋... 详细信息

目的：以体外培养的永生化奶牛乳腺上皮细胞（CMEC-H）为模型,利用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测酪蛋白和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号路径元件的蛋白磷酸化表达。进一步探索亮氨酸和组氨酸通过mTOR信号途径调控酪蛋白合成机制的重要意义。创新点：首次在CMEC-H模型中研究不同浓度的亮氨酸和组氨酸通过mTOR复合物1（mTORC1）中mTOR（Ser^2481）、mTOR调控蛋白（Raptor,Ser^792）和G蛋白β亚基样蛋白（GβL）对酪蛋白表达调控的影响。研究证明mTOR（Ser^2448）并不是在乳腺上皮细胞中激活mTOR信号通路的唯一磷酸化位点,mTOR（Ser^2481）同样可作为激活mTOR信号通路的生物标记。方法：以厄尔平衡溶液代替培养基,设为阴性对照,分别添加不同浓度的亮氨酸或组氨酸,利用Western blotting检测酪蛋白和mTOR信号路径元件的蛋白表达。结论：与阴性对照组相比,当在CMEC-H细胞中添加0.45~10.80 mmol/L亮氨酸6 h时,4种酪蛋白的表达和mTOR（Ser^2481）、Raptor（Ser^792）、真核翻译起始因子4E（e IF4E,Ser^209）和真核细胞翻译延伸因子（e EF2,Thr^56）的磷酸化表达均显著上调（P〈0.01）。而当亮氨酸浓度在10.80 mmol/L时,真核翻译起始因子4E结合蛋白1（4EBP1,Thr^37）的磷酸化表达被抑制;在5.40~10.80 mmol/L时,核糖体蛋白S6（RPS6,Ser^235/236）的磷酸化被抑制。当添加0.15~9.60 mmol/L组氨酸6 h时,αs2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白的表达和mTOR（Ser^2481）、Raptor（Ser^792）、核糖体S6蛋白激酶（S6K1,Thr^389）、4EBP1（Thr^37）、e IF4E（Ser^209）和e EF2（Thr^56）的磷酸化表达均显著上调（P〈0.01）。而当组氨酸浓度在9.60 mmol/L时,αs1-酪蛋白的表达量降低;在0.15和9.60 mmol/L时,GβL被抑制;在4.80~9.60 mmol/L时,RPS6磷酸化被抑制。线性回归模型显示,当添加亮氨酸时,αs1-酪蛋白的表达与mTOR、S6K1和e EF2的磷酸化表达成显著的正相关（P〈0.01;表4）;当添加组氨酸,β-酪蛋白和κ-酪蛋白均与e EF2磷酸化表达成显著的正相关（P〈0.01;表5）。综上所述,在乳腺上皮细胞中,亮氨酸和组氨酸能通过mTOR信号通路促进酪蛋白基因的表达。

关键词：奶牛乳腺上皮细胞亮氨酸组氨酸蛋白免疫印迹 mTOR 酪蛋白

低蛋白日粮补充亮氨酸和色氨酸对哺乳犊牛直肠微生物的影响

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饲料工业 2023年

作者：卢俊言邹松岩徐宏建王明亚吴春会李秋凤李树静张秀江河北天和肉牛养殖有限公司河北农业大学动物科技学院保定农业农村局

试验旨在研究低蛋白日粮补充亮氨酸（Leu）和色氨酸（Trp）对哺乳犊牛直肠微生物的影响，选取初生体重[（40±2）kg]相近、健康状况良好的中国荷斯坦犊牛75头，采用完全随机试验设计，随机分5组，分别为HK组[22%-粗蛋白（CP）水平的开食... 详细信息

试验旨在研究低蛋白日粮补充亮氨酸（Leu）和色氨酸（Trp）对哺乳犊牛直肠微生物的影响，选取初生体重[（40±2）kg]相近、健康状况良好的中国荷斯坦犊牛75头，采用完全随机试验设计，随机分5组，分别为HK组[22%-粗蛋白（CP）水平的开食料]、LK组（19%CP水平的开食料）、L组（19%CP水平开食料＋1.15%-Leu）、T组（19%CP水平开食料＋0.26%-Trp）、LT组（19%CP水平开食料-+1.15%Leu+0.26%Trp），犊牛10日龄开始自由采食不同成分的开食料，试验期为49 d。-结果表明：犊牛59日龄时，L组、T组和LT组Chao1和Observed species指数低于HK组，T组Chao1和Observed species指数均高于LK组。在门水平上，优势菌门为厚壁菌门和拟杆菌门，占比为90.03%。犊牛粪便微生物在门水平上的相对丰度均差异不显著（P>0.05）；在属水平上，L组、T组和LT组粪杆菌属相对丰度高于LK组，且L组显著高于LK组（P0.05）。综上，低蛋白日粮补充Leu和Trp对哺乳犊牛直肠微生物门属水平除粪杆菌属外均无显著性影响，说明低蛋白日粮补充Leu和Trp对哺乳犊牛直肠微生物影响较小。

关键词：低蛋白日粮亮氨酸色氨酸犊牛直肠微生物

低蛋白质日粮补充亮氨酸和色氨酸对断奶期犊牛生长性能和血液参数的影响

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饲料研究 2023年第13期46卷 1-6页

作者：邹松岩徐宏建王明亚吴春会李秋凤曹玉凤李树静张秀江河北农业大学动物科技学院保定071000 河北天和肉牛养殖有限公司石家庄050000 保定农业农村局保定071000

试验旨研究在低蛋白日粮补充亮氨酸和色氨酸对断奶犊牛生长性能、血清生化指标、免疫性能及抗氧化能力的影响。选取健康状况良好、初生重为(42±2)kg的中国荷斯坦犊牛,随机分为5组,分别为HK组(22%粗蛋白(CP)水平的开食料)、LK组(19%CP... 详细信息

试验旨研究在低蛋白日粮补充亮氨酸和色氨酸对断奶犊牛生长性能、血清生化指标、免疫性能及抗氧化能力的影响。选取健康状况良好、初生重为(42±2)kg的中国荷斯坦犊牛,随机分为5组,分别为HK组(22%粗蛋白(CP)水平的开食料)、LK组(19%CP水平的开食料)、L组(19%CP水平、含有1.15%亮氨酸(Leu)的开食料)、T组(19%CP水平、含有0.26%色氨酸(Trp)的开食料)、LT组(19%CP水平、含有1.15%Leu+0.26%Trp的开食料)。每组12个重复,每个重复1头犊牛。试验期72 d。结果显示,LT组断奶犊牛末重、平均日采食量和平均日增重高于HK组(P<0.05)。断奶前3 d,与HK组相比,LT组断奶犊牛血清尿素氮(BUN)、白细胞介素-1(IL-1)含量显著降低(P<0.05),总蛋白(TP)、免疫球蛋白M(IgM)、干扰素-γ(IFN-γ)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性显著升高(P<0.05)。断奶当天,与HK组相比,LT组断奶犊牛血清TP、免疫球蛋白A (IgA)、白细胞介素-2 (IL-2)含量及总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P<0.05)。断奶后3 d,与HK组相比,LT组断奶犊牛血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著升高(P<0.05)。研究表明,低蛋白质日粮中补充1.15%Leu和0.26%Trp可提高断奶期犊牛的平均日增重和平均日采食量,改善犊牛生长性能,增强了断奶犊牛免疫力及抗氧化能力。

关键词：低蛋白日粮亮氨酸色氨酸犊牛断奶应激

日粮添加过瘤胃亮氨酸对泌乳奶山羊氨基酸代谢和免疫性能的影响

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饲料工业 2022年第13期43卷 43-48页

作者：陈捷王砀砀武彦博王燕南陈超雷新建李延华姚军虎西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 陕西澳尼克奶山羊育种有限公司陕西富平711700

研究旨在探究亮氨酸对泌乳奶山羊血液氨基酸、乳氨基酸和免疫性能的影响。试验共选取45只初产关中泌乳奶山羊,泌乳期为(135±15)d,泌乳量为(2.06±0.45)kg/d,体重为(43.11±5.38)kg,随机分为3组:对照组(CON组,采食基础饲粮)、过瘤胃亮氨... 详细信息

研究旨在探究亮氨酸对泌乳奶山羊血液氨基酸、乳氨基酸和免疫性能的影响。试验共选取45只初产关中泌乳奶山羊,泌乳期为(135±15)d,泌乳量为(2.06±0.45)kg/d,体重为(43.11±5.38)kg,随机分为3组:对照组(CON组,采食基础饲粮)、过瘤胃亮氨酸(RP-Leu)添加组(LEU组,基础饲粮+10.6 g/d RP-Leu)及过瘤胃赖氨酸(RP-Lys)添加组(LYS组,基础饲粮+12.0 g/d RP-Lys),每组15只。试验期60 d,其中预试期15 d,正试期45 d。试验期饲喂等量饲粮,自由饮水。试验结束后,采集血液、乳样,进行氨基酸和免疫指标测定。结果显示:与CON组相比,日粮添加RP-Leu显著提高了奶山羊血清中支链氨基酸(branched chain amino acid,BCAA)、异亮氨酸(Isoleucine,Ile)和苏氨酸(Threonine,Thr)的浓度,降低了脯氨酸(Proline,Pro)的浓度(P亮氨酸(Leucine,Leu)、色氨酸(Tryptophan,Trp)、必需氨基酸(essential amino acid,EAA)和总氨基酸(total amino acid,TAA)浓度的趋势(0.05≤P0.05)。日粮添加RP-Leu和RP-Lys对泌乳奶山羊产奶量、乳蛋白合成、乳氨基酸组成和免疫性能无影响(P>0.05)。研究表明,亮氨酸可提高泌乳奶山羊血清必需氨基酸中生糖氨基酸的含量,但亮氨酸调控血液氨基酸代谢的机理仍不明确,后续应考虑利用多组学技术解释相关机理。

关键词：亮氨酸泌乳奶山羊血氨基酸乳氨基酸免疫性能

亮氨酸对3T3-L1前脂肪细胞分化及分化后脂肪生成的影响

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中华预防医学杂志 2016年第6期50卷 535-540页

作者：杨江涛徐加英焦俊张茹韩淑芬秦立强苏州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室 215123 苏州大学放射医学与防护学院江苏省高校放射医学协同创新中心苏州开拓药业有限公司

目的：观察亮氨酸对3T3-L1前脂肪细胞分化和分化后脂肪生成的影响并初步探讨其机制。方法培养3T3-L1前脂肪细胞，四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测0.0（对照组）、0.5、1.0和2.0 mmol/L亮氨酸处理2 d对细胞增殖的影响。诱导3T3-L1前脂... 详细信息

目的：观察亮氨酸对3T3-L1前脂肪细胞分化和分化后脂肪生成的影响并初步探讨其机制。方法培养3T3-L1前脂肪细胞，四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测0.0（对照组）、0.5、1.0和2.0 mmol/L亮氨酸处理2 d对细胞增殖的影响。诱导3T3-L1前脂肪细胞分化，分别在诱导开始（维持整个分化过程）以及分化完成后（持续4d）进行亮氨酸处理。油红O染色检测细胞中脂滴数，收集培养基，测定其甘油含量，同时采用Western blot法测定脂肪分解相关酶、瘦素信号通路相关蛋白的表达水平。结果通过0.0、0.5、1.0和2.0 mmol/L亮氨酸处理后细胞存活率分别为（100.00±12.10）%,（102.73±12.38）%,（103.94±14.65）%和（108.70±5.05）%，差异无统计学意义（F=1.07, P=0.383）。细胞分化过程中，0.0、0.5、1.0、2.0 mmol/L亮氨酸处理组的脂滴相对数分别为1.00±0.06、0.94±0.09、0.82±0.08和0.79±0.04（F=11.74, P〈0.001），1.0、2.0 mmol/L亮氨酸组低于对照组（P值分别0.002、〈0.001）；分化完成后亮氨酸处理的各组脂滴相对数的差异无统计学意义（F=0.16, P=0.924）。细胞分化过程中用0.0、0.5、1.0和2.0 mmol/L亮氨酸处理，培养基中甘油含量增值分别为（65.04±11.75）、（71.45±23.71）、（79.37±17.63）和（110.32±25.36）μmol/L（F=2.92, P=0.100），2.0 mmol/L亮氨酸组含量高于对照组（t=2.73, P=0.026）；分化完成后亮氨酸处理的各组甘油含量增值的差异无统计学意义（F=0.80, P=0.528）。分化过程中采用亮氨酸处理，上调了磷酸化激素敏感脂肪酶的蛋白表达[采用0.0、2.0 mmol/L浓度的亮氨酸处理后，蛋白相对表达水平分别为1.00±0.08、2.54±0.27（P〈0.001）]，下调了脂滴包被蛋白、瘦素和瘦素通路相关的瘦素受体、Janus激酶2和信号转导和转录激活因子的蛋白的表达[采用0.0、2.0 mmol/L浓度的亮氨酸处理后，相应蛋白相对表达水平分别为[（1.00±0.03）比（0.31±0.07）、（1.00±0.08）比（0.22±0.07）、（1.00±0.07）比（0.21±0.04）、（1.00±0.03）比（0.35±0.05）、（1.00±0.06）比（0.34±0.05），P值均〈0.001]。结论亮氨酸通过调控脂肪分解酶和瘦素信号通路抑制了脂肪细胞分化过程中脂肪的形成，但对分化完成后的脂肪细胞无影响。

关键词：亮氨酸脂细胞脂肪分解脂滴瘦素信号通路

eEF1Bα介导蛋氨酸和亮氨酸促进牛乳腺上皮细胞乳合成的基因功能研究

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eEF1Bα介导蛋氨酸和亮氨酸促进牛乳腺上皮细胞乳合成的基因功能...

作者：范修强长江大学

学位级别：硕士

几千年来,牛乳一直是人类饮食中的重要组成部分。牛乳不仅含有生长发育所需的必需营养素,还提供广泛的生物活性成分,在维持人体稳态和调节免疫功能方面也发挥重要作用。随着社会的发展,消费者对牛奶及其加工产品的需求量也越来越大,对... 详细信息

几千年来,牛乳一直是人类饮食中的重要组成部分。牛乳不仅含有生长发育所需的必需营养素,还提供广泛的生物活性成分,在维持人体稳态和调节免疫功能方面也发挥重要作用。随着社会的发展,消费者对牛奶及其加工产品的需求量也越来越大,对牛乳品质也有了更高的要求。因此,如何提高牛奶的产量和品质就成为了近年来研究的热点。乳腺的泌乳能力主要由乳腺上皮细胞(mammary epithelial cells,MECs)的乳蛋白及乳脂肪合成能力和细胞增殖能力决定。因此,揭示乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂肪合成以及细胞增殖的分子机理,将有助于深入理解乳腺泌乳的调控过程,为建立新型高效的泌乳调控技术提供基础理论依据和技术途径。氨基酸(amino acid,AA)不仅是蛋白质合成的底物之一,还作为重要的信号分子激活有关信号转导途径,促进细胞合成代谢和生长。m TOR是细胞蛋白质合成的核心信号调节因子,能够接受AAs,包括蛋氨酸(methionine,Met)、亮氨酸(leucine,Leu)等一些氨基酸、激素(催乳素、雌激素等)等信号刺激发生磷酸化激活,从而促进蛋白质和脂类的合成。AAs也可以通过促进mTOR基因转录从而促进m TOR的磷酸化激活,相关研究近期已有少量报道,但有关AAs激活m TOR基因转录的分子机理仍有待进一步探究。真核翻译延长因子(eukaryotic elongation factors,eEFs)包括eEF1A、eEF1B复合体和eEF2,eEF1Bα是eEF1B复合体的一个组成成分。eEFs是细胞中最丰富的蛋白质之一,在确保m RNA正确解码以产生细胞蛋白质方面发挥着重要作用。目前对于eEF1Bα是否能介导AA调控乳合成和细胞增殖未见报道。本实验室前期发现eEF1Bα与乳腺乳合成调节有关,本研究拟揭示eEF1Bα介导Met和Leu促进乳腺乳蛋白及乳脂肪合成以及细胞增殖的作用和分子机理,为深入理解eEF1Bα在乳腺乳合成中的调节作用和分子机理提供理论与实验依据。本实验发现,在泌乳期小鼠乳腺组织中eEF1Bα蛋白的表达量要显著高于青春期和退化期,泌乳期磷酸化m TOR的蛋白表达水平也显著高于青春期和退化期,提示eEF1Bα可能是乳合成的正向调控因子。在后续的体外细胞培养实验中,首先通过免疫荧光鉴定角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)表达的方法,确定了实验培养的奶牛乳腺上皮细胞(bovine MECs,BMECs)的纯度。为确定eEF1Bα是否具有调控BMECs乳蛋白及乳脂肪合成和细胞增殖的能力,应用si RNA转染和基因过表达质粒转染方法对eEF1Bα进行基因抑制和基因过表达。分别应用Western blotting、BODIPY染色法和甘油三酯(triglyceride,TG)含量试剂盒检测,以及CCK8和Ed U检测,发现eEF1Bα能够正向调控BMECs的β-酪蛋白合成、乳脂肪合成以及细胞增殖。进一步分析发现,eEF1Bα基因抑制后m TOR磷酸化水平显著降低,而基因过表达结果相反,说明eEF1Bα正向调节m TOR的磷酸化过程。应用质谱分析进一步鉴定了eEF1Bα的磷酸化位点位于Ser106,并于公司定制了特异性抗体,点突变实验表明eEF1Bα-Ser106/Ala不能促进m TOR磷酸化。为进一步研究eEF1Bα在AAs调节乳合成中是否发挥作用,应用0.6 m M Met或0.6 m M Leu处理体外培养的BMECs。应用Western blotting检测发现,Met和Leu处理后,β-casein、p-mTOR/mTOR、SREBP-1c的蛋白表达量显著提高,eEF1Bα和p-eEF1Bα蛋白的表达水平也显著提高。Western blotting和免疫荧光观察进一步发现,eEF1Bα定位于细胞浆,而p-eEF1Bα定位于细胞核,Met和Leu促进eEF1Bα在细胞浆中的表达定位以及p-eEF1Bα在细胞核中的表达定位。同时添加0.6 m M Met或0.6 m M Leu并对eEF1Bα进行基因抑制,发现eEF1Bα基因抑制阻断了Met和Leu对m TOR蛋白磷酸化以及m TOR m RNA表达的促进作用。Ch IP-PCR分析表明p-eEF1Bα结合在m TOR启动子的-550～-795bp序列,而Met和Leu促进这一结合。综上,eEF1Bα是BMECs乳蛋白及乳脂肪合成和细胞增殖的正向调节分子,介导Met和Leu促进m TOR m RNA表达和蛋白磷酸化,eEF1Bα通过磷酸化进入细胞核结合于m TOR基因启动子促进m TOR基因转录发挥调节作用。本研究成果深入揭示了eEF1Bα调节乳合成的作用和分子机理,为应用Met和Leu提高牛乳产量和品质提供了新的理论依据。

关键词： eEF1Bα 蛋氨酸亮氨酸乳合成 mTOR

亮氨酸与异亮氨酸在金/银核-壳复合纳米粒子上的吸附状态

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物理化学学报 2007年第9期23卷 1478-1482页

作者：周光明虞丹尼黎司杨大成西南大学化学化工学院重庆400715

研究了亮氨酸和异亮氨酸的拉曼光谱及其在金/银核-壳复合纳米粒子上的表面增强拉曼光谱(SERS);归属、分析了不同振动模式引起的振动峰位变化.拉曼光谱中,亮氨酸的甲基摇摆(ω(CH_3))拉曼位移为962,945,924 cm^(-1),甲基变形(δ_(as)(CH_... 详细信息

研究了亮氨酸和异亮氨酸的拉曼光谱及其在金/银核-壳复合纳米粒子上的表面增强拉曼光谱(SERS);归属、分析了不同振动模式引起的振动峰位变化.拉曼光谱中,亮氨酸的甲基摇摆(ω(CH_3))拉曼位移为962,945,924 cm^(-1),甲基变形(δ_(as)(CH_3))为1454,1408,cm^(-1),异亮氨酸的分别为922 cm^(-1)和1448,1420,1394 cm^(-1).在酸性和碱性条件下不同浓度的SERS中,各对应基团振动峰位差异更明显.初步阐述了亮氨酸与异亮氨酸浓度与SERS关系,并推测了在金/银核-壳复合粒子表面的吸附模型.

关键词：亮氨酸异亮氨酸表面增强拉曼光谱金/银核-壳复合纳米粒子

谷氨酰胺、亮氨酸、苯丙氨酸对内蒙古绒山羊精液冷冻保存的影响

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谷氨酰胺、亮氨酸、苯丙氨酸对内蒙古绒山羊精液冷冻保存的影响

作者：刘虹夫内蒙古农业大学

学位级别：硕士

精液冷冻保存技术是山羊繁育体系的重要组成部分,可以有效保存优质种质资源并加速山羊育种工作进程。但山羊精子在冷冻过程中会受到氧化应激、冷应激等不利因素的损伤,导致山羊精子的解冻后质量较低,大大限制了山羊冻精的应用。已有大... 详细信息

精液冷冻保存技术是山羊繁育体系的重要组成部分,可以有效保存优质种质资源并加速山羊育种工作进程。但山羊精子在冷冻过程中会受到氧化应激、冷应激等不利因素的损伤,导致山羊精子的解冻后质量较低,大大限制了山羊冻精的应用。已有大量研究表明,在精液冷冻保存过程中添加氨基酸类物质可以有效提高精子的冷冻-解冻后质量。课题组前期通过对内蒙古绒山羊高抗冻(High Freezability,HF)精液和低抗冻(Low Freezability,LF)精液的蛋白质组-代谢组学联合分析,发现谷氨酰胺、苯丙氨酸、亮氨酸可以作为内蒙古绒山羊精液抗冻性的潜在生物标记。因此,本研究旨在探究在稀释液中分别添加不同浓度的谷氨酰胺、苯丙氨酸、亮氨酸对冷冻-解冻后内蒙古绒山羊精液质量的影响,通过检测精子活力、结构完整性、运动性能、抗氧化能力和线粒体功能,筛选出最佳的添加浓度。以期为谷氨酰胺、苯丙氨酸、亮氨酸在绒山羊精液冷冻保存中的应用提供理论依据和参考。主要获得以下研究结果:1.在冷冻保存稀释液中添加不同浓度(2、4、6、8 mmol/L)的谷氨酰胺,结果发现4 mmol/L谷氨酰胺对绒山羊精子冷冻-解冻后质量具有积极影响,冷冻-解冻后精子活力为67.9%、质膜完整率为54.5%、顶体完整率为79.2%、直线运动速度为49.6μm/s、平均路径速度为54.6μm/s,均显著高于对照组(P亮氨酸,结果发现1 mmol/L亮氨酸对绒山羊精子冷冻-解冻后质量具有积极影响,冷冻-解冻后平均路径速度为54.6μm/s、直线运动速度为58.7μm/s、曲线运动速度为93.7μm/s,均显著高于对照组(P氨酸,结果显示,在稀释液中添加10 mmol/L苯丙氨酸的精子冷冻-解冻后活力为48.4%、前向运动精子比例为24.4%、平均路径速度为29.7μm/s、直线运动速度为26.9μm/s、曲线运动速度为51.9μm/s,均显著低于对照组(P氨酸对绒山羊精子冷冻-解冻后质量没有积极影响,反而随着苯丙氨酸浓度的增加表现出负面作用。2.由于添加谷氨酰胺对冷冻-解冻后精子活力和结构完整性的保护作用,所以对冷冻-解冻后的精子的抗氧化指标进行检测,结果显示,4 mmol/L谷氨酰胺对绒山羊精子冷冻-解冻后的抗氧化指标具有积极影响,冷冻-解冻后总抗氧化能力为1.59mmol/L、CAT活性为374.93 U/mgprot、SOD活性为92.95 U/mgprot、GPx活性为1390.77 m U/mgprot,均显著高于对照组(P亮氨酸对冷冻-解冻后精子运动参数的正向影响,所以对冷冻-解冻后精子的能量代谢指标进行检测,结果发现1 mmol/L亮氨酸对绒山羊精子冷冻-解冻后能量代谢具有积极影响,ATP含量为0.42μmol/m L、线粒体膜电位为2.82ΔΨm、线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性为197.32 U/mgprot、线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性为109.26U/mgprot,均显著高与对照组(P亮氨酸可以提高精子的能量代谢,进而改善绒山羊精液的冷冻保存效果。综上所述,本研究表明在内蒙古绒山羊精液冷冻稀释液中添加4 mmol/L的谷氨酰胺可以减少精子冷冻过程中的氧化应激,添加1 mmol/L的亮氨酸可以提高精子的能量代谢,从而改善绒山羊精液冷冻保存效果。

关键词：山羊精液冷冻保存谷氨酰胺亮氨酸苯丙氨酸

长期亮氨酸补充延缓小鼠骨骼肌衰老的作用和机制研究

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长期亮氨酸补充延缓小鼠骨骼肌衰老的作用和机制研究

作者：李丹华中科技大学

学位级别：硕士

研究目的:骨骼肌衰老的特征主要表现为其质量和功能随着年龄增长而逐渐下降,如不及时干预或治疗将可能发展为肌肉减少症,并导致一系列不良健康结局发生。已有证据提示亮氨酸摄入与肠道菌群、肌肉健康之间可能存在密切的关联,但其中具体... 详细信息

研究目的:骨骼肌衰老的特征主要表现为其质量和功能随着年龄增长而逐渐下降,如不及时干预或治疗将可能发展为肌肉减少症,并导致一系列不良健康结局发生。已有证据提示亮氨酸摄入与肠道菌群、肌肉健康之间可能存在密切的关联,但其中具体关联作用仍需进一步研究。本研究旨在揭示长期亮氨酸补充是否可以通过AMPKα/SIRT1/PGC-1α通路延缓小鼠骨骼肌衰老,并探究肠道菌群在此过程中发挥的作用。研究方法:本研究选取19月龄雄性C57BL/6j小鼠(n=12/组),分别给予超纯水、低剂量(500 mg·kg·d)和高剂量亮氨酸(1 250 mg·kg·d)灌胃12周。对干预后小鼠的股四头肌通过超声、组织H&E染色切片、肌纤维横截面积测量和成肌、肌萎缩相关蛋白表达水平(蛋白免疫印迹法),来评估亮氨酸对骨骼肌再生及萎缩的生物学效应。同时,收集小鼠干预前后的粪便样本,采用16S rDNA扩增子测序方法实现肠道菌群物种构成及相对丰度分析,结合MetaCyc代谢途径数据库预测分析其功能谱,并进一步检测粪便样本中的丙酮酸水平。研究结果:在补充亮氨酸12周后,小鼠肌肉超声和组织学结果较对照组均有改善。高剂量亮氨酸摄入能刺激股四头肌中AMPKα激活,并调节SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平,进而调控肌生成、肌萎缩及脂代谢相关蛋白表达水平。同时,亮氨酸补充也改变了肠道菌群的丰富度、多样性及其代谢途径。其中,高剂量亮氨酸使肠道菌群厚壁菌门-拟杆菌门比值显著降低。此外,高剂量亮氨酸补充后的差异性菌种与丙酮酸发酵至丙酸I途径呈负相关,且高剂量亮氨酸组小鼠粪便丙酮酸水平显著升高。结论:长期高剂量亮氨酸干预可调控衰老小鼠肠道菌群及AMPKα/SIRT1/PGC-1α信号通路并改善骨骼肌衰老进程。菌群代谢产物丙酮酸可能在此过程中发挥重要作用。

关键词：亮氨酸骨骼肌肌少症肠道菌群丙酮酸丙酸I