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我国南海硇洲岛潮间带产油真菌的脂肪酸组成分析

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中国油脂 2018年第8期43卷 115-118,126页

作者：王洁江黎明崔丽娇薛珊珊漯河医学高等专科学校医学检验技术教研室河南漯河462002 广东医科大学生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023 香港城市大学深圳研究院广东深圳518000 泰州市人民医院江苏泰州225300

采用尼罗红平板筛选法从我国南海硇洲岛潮间分离鉴定出的178株海洋真菌中筛选产油菌株,对其脂肪酸进行抽提并甲酯化,采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术测定产油真菌的总脂肪酸含量并对其脂肪酸组成进行分析。结果表明:筛选出89株产油真... 详细信息

采用尼罗红平板筛选法从我国南海硇洲岛潮间分离鉴定出的178株海洋真菌中筛选产油菌株,对其脂肪酸进行抽提并甲酯化,采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术测定产油真菌的总脂肪酸含量并对其脂肪酸组成进行分析。结果表明:筛选出89株产油真菌,其中14株海洋真菌的总脂肪酸含量占冷冻干燥菌体质量的1.41%~7.73%,不饱和脂肪酸含量占总脂肪酸含量的42.51%~68.86%,多不饱和脂肪酸含量占总脂肪酸含量的9.03%~36.49%。我国南海硇洲岛潮间带产油真菌资源丰富,在生物油脂开发利用中具有较高价值,获取的不饱和脂肪酸具有广泛应用前景。

关键词：硇洲岛产油真菌尼罗红平板气相色谱-质谱联用脂肪酸

反义千年桐油酸脱氢酶基因在产油真菌少根根霉中的遗传转化研究

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反义千年桐油酸脱氢酶基因在产油真菌少根根霉中的遗传转化研究

作者：刘明靖中国林业科学研究院

学位级别：硕士

开发微生物油脂是未来发展生物柴油产业的新途径。然而微生物油脂的成分较为复杂,难以满足生物柴油对单不饱和脂肪酸的要求。△1 2脂肪酸脱饱和酶(又称油酸脱氢酶,简称FAD2)是调节生物体内单不饱和脂肪酸向多不饱和脂肪酸转化的关键酶之... 详细信息

开发微生物油脂是未来发展生物柴油产业的新途径。然而微生物油脂的成分较为复杂,难以满足生物柴油对单不饱和脂肪酸的要求。△1 2脂肪酸脱饱和酶(又称油酸脱氢酶,简称FAD2)是调节生物体内单不饱和脂肪酸向多不饱和脂肪酸转化的关键酶之一,它催化油酸18:1(△9 )脱氢形成亚油酸18:2(△9,12)。近年来随着分子生物学技术的发展,反义FAD2基因在油料作物脂肪酸调控基因工程中得到广泛应用,获得了油酸含量很高的转基因玉米(Zea mays)、大豆(Glycine max)、花生(Arachis hypogaea)、油菜(Brassica campestris)等。然而,该技术在产油真菌中的应用尚未见报道,这是一个全新的研究方向,具有重要的现实意义。根癌农杆菌介导法(AtMT)较之传统的遗传转化方法,具有操作简便、遗传稳定、转化率高、重复性好等优点。本实验室已从木本油料树种千年桐(Vernicia montana)中克隆到油酸脱氢酶基因(VeFAD2),我们设想运用AtMT法将来自于植物的反义VeFAD2基因导入产油真菌中,期望通过基因工程手段调控真菌的脂肪酸代谢,获得高油酸、低亚油酸含量的转基因工程真菌。本研究通过抗生素浓度试验:挑选产油真菌少根根霉(Rhizopus arrhizus)和深黄被孢霉(Mortierella isabellina)作为遗传转化的受体材料;确定卡那霉素筛选剂的作用浓度为300-500 ug/ml;选择头孢呋辛钠作为抑菌剂,作用浓度为150ug/ml。采用冻融法构建了含有VeFAD2基因反义表达载体pBI121-fad2的根癌农杆菌AGL-1工程菌株。用农杆菌介导的方法对丝状真菌少根根霉和深黄被嫒?凶?其中对少根根霉的转化获得阳性转化子,从保存的12株转化子中,随机选取5个,进行PCR-Southern杂交鉴定,均出现杂交信号,表明目的基因已整合到这些菌株的基因组中。转基因菌株在非选择培养基中连续转接5代后还能在选择培养基中正常生长,其抗卡那霉素性状依然可以稳定遗传。本文对根癌农杆菌菌株类型、农杆菌初始菌液量、共培养时间、乙酰丁香酮(acetosyingone,AS)作用时期与作用浓度等影响少根根霉遗传转化的几个关键因子进行研究,结果表明:根癌农杆菌菌株EHA105和AGL-1都适用于少根根霉的转化,且后者的转化效率高于前者;适宜的农杆菌初始菌液量为50-100ul;共培养时间为24h,既能获得转化子又降低了假阳性率;对于农杆菌EHA105,在共培养阶段不能缺少AS的诱导,在预培养时期加入200 umol/L AS、共培养时期增加AS浓度到400umol/L及以上都有利于提高转化效率。另外,本文还改进了试验操作中的共培养时期涂板环节和转化子筛选培养环节:通过稀释菌液的方法控制涂板量,解决了农杆菌污染问题;对筛选培养基加入方式的改进,获得了2个少根根霉单克隆阳性转化子。本文通过根癌农杆菌介导法实现了反义VeFAD2基因对产油真菌少根根霉的遗传转化并获得转基因菌株;对转化条件的优化,构建了一套经由根癌农杆菌介导的植物基因在少根根霉中高效转化的体系,同时也为将该体系应用于其它产油真菌的转化提供参考。

关键词： VeFAD2基因产油真菌少根根霉 AtMT 遗传转化

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几种优质产油真菌的筛选及发酵工艺研究

几种优质产油真菌的筛选及发酵工艺研究

作者：耿青伟南京林业大学

学位级别：硕士

本研究对12种真菌的产油能力进行了筛选,根据油脂得率和脂肪酸提取效果确定了一种简单高效的油脂提取方法,并在此基础上对筛选获得的2种高效产油真菌的发酵工艺条件进行了优化研究。结果表明,在供试的12种真菌中,有5种真菌的产油能力较... 详细信息

本研究对12种真菌的产油能力进行了筛选,根据油脂得率和脂肪酸提取效果确定了一种简单高效的油脂提取方法,并在此基础上对筛选获得的2种高效产油真菌的发酵工艺条件进行了优化研究。结果表明,在供试的12种真菌中,有5种真菌的产油能力较高,其中深黄被孢霉(Mortierella isabellina)和拉曼被孢霉(Mortierella ramanniana)油脂含量分别为24.25%和21.66%,总枝毛霉(Mucorracemosus)含油量为18.74%,斯达氏油脂酵母(Lipomyces starkeyi)和胶粘红酵母(Rhodotorula glutinis)的油脂含量分别为19.07%和18.01%,其它各菌种含油量均低于11%。对四种真菌脂肪酸成分分析表明,脂肪酸以C和C为主,其中油酸(C18:1w9)含量最高,C～C系脂肪酸含量均超过90%。以高效产油的深黄被孢霉和斯达氏油脂酵母为试验菌株,分析比较了酸热法、索氏提取法和有机溶剂法的油脂提取效果。结果表明,酸热法操作简单,样品处理能力强,对C～C系脂肪酸提取效果最好,有机溶剂法油脂提取效果最差。通过单因素和正交试验方法对深黄被孢霉和斯达氏油脂酵母的发酵培养条件(碳源、氮源、接种量、pH值、无机盐离子、温度、培养时间等)进行了优化。优化条件下,可获得菌体生物量分别为20.25g/L和1 6.35g/L,油脂产量分别为为9.82g/L和4.94g/L,菌体油脂含量分别为48.49%和30.21%。本研究通过发酵工艺的优化,有效提高了供试真菌的产油能力。

关键词：产油真菌深黄被孢霉(Mortierella isabellina) 斯达氏油脂酵母(Lipomyces starkeyi) 发酵

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大连龙湖湿地产油真菌的筛选及其产油率测定

绿色科技 2019年第22期21卷 180-181,185页

作者：李季蓉杨红刘晓辉姜慧明李林翰大连民族大学环境与资源学院辽宁大连116600 大连民族大学生命科学学院辽宁大连116600

采用苏丹黑B染色法从大连龙湖湿土壤中地分离获得5株可产油真菌。经形态学鉴定,分别是土曲霉(Aspergillus terreus)、淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)、毡状枝顶孢(Acremonium kiliense)、朱黄青霉(Penicillium minioluteum)、橘黄青霉(Penicillium aurantiogriseum)。采用酸热法破碎细胞、甲醇-氯仿法进行了油脂的提取并计算,确定其中土曲霉产油率最高,产油率为47.6%。

关键词：湿地筛选产油真菌

降解玉米秸秆纤维素真菌的筛选及产油特性的研究

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安徽农学通报 2012年第17期18卷 47-49页

作者：张玲秀温雪梅郑小妹张薇忻州师范学院化学生物系山西忻州034000

通过玉米秸秆纤维素培养基,筛选获得一株高效水解秸秆纤维素的真菌,用形态学方法初步鉴定为峡串孢霉(Paepalopsis Kühn)属,进一步测定其CMC酶活和滤纸酶活,培养6d后分别为45.32U和35.31U。在产油发酵培养基,产油率达菌体干重的14.24%... 详细信息

通过玉米秸秆纤维素培养基,筛选获得一株高效水解秸秆纤维素的真菌,用形态学方法初步鉴定为峡串孢霉(Paepalopsis Kühn)属,进一步测定其CMC酶活和滤纸酶活,培养6d后分别为45.32U和35.31U。在产油发酵培养基,产油率达菌体干重的14.24%。此试验为纤维素降解利用和微生物油脂的开发利用奠定了一定的理论和研究基础。

关键词：玉米秸秆纤维素降解产油真菌微生物油脂

优化发酵条件促海鞘桔青霉Asc2-4生长与产油

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生物学杂志 2023年第6期40卷 53-59,64页

作者：罗正东刘唤明雷晓凌颜珲璘广东海洋大学食品科技学院广东省水产品加工与安全重点实验室广东省海洋食品工程技术研究中心广东省海洋生物制品工程实验室水产品深加工广东普通高等学校重点实验室湛江524088 中国科学院深圳先进技术研究院支撑平台处高等级生物实验室管理办深圳518055

桔青霉(Penicillium citrinum)Asc2-4是一株分离自雷州海鞘(Pyrosomella verticilliata)的产油真菌,研究温度、pH值、接种量、转速、装液量等单因素对其生长和产油的影响,响应面优化高产油的显著因子,再通过气相色谱分析菌油组成。结果... 详细信息

桔青霉(Penicillium citrinum)Asc2-4是一株分离自雷州海鞘(Pyrosomella verticilliata)的产油真菌,研究温度、pH值、接种量、转速、装液量等单因素对其生长和产油的影响,响应面优化高产油的显著因子,再通过气相色谱分析菌油组成。结果表明:单因素优化初步确定适宜生长的发酵条件并得到提高产油的显著因子(接种量、装液量和转速);响应面优化得出最优发酵条件为温度29℃、pH值5.5、接种量3.3%、装液量120 mL/250 mL和转速220 r/min;验证结果与模型预测值符合,生物量和油脂质量浓度高达19.19 g/L和8.80 g/L,比优化前提高了65.57%和224.72%;菌油的C16和C18系脂肪酸占总脂肪酸96.26%,其主要组分及含量为41.52%油酸(C18:1)、21.74%亚油酸(C18:2)、16.77%棕榈酸(C16:0)和15.61%硬脂酸(C18:0)。研究结果为开发利用桔青霉Asc2-4提供理论基础。

关键词：海鞘桔青霉产油真菌发酵条件脂肪酸组成

合成生物技术驱动天然的真核油脂细胞工厂开发

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合成生物学 2021年第6期2卷 920-941页

作者：汪庆卓宋萍黄和南京师范大学食品与制药工程学院江苏南京210046

油脂是重要的工业原料,也是人类生存的三大营养素之一。为避免因国际环境变化导致外部资源进口遭到封锁,我国亟需建设、补充和完善油脂供给的新方式。以丰富、廉价的生物质原料替代化石原料生产食用油脂和功能性油脂,在保障国家能源安... 详细信息

油脂是重要的工业原料,也是人类生存的三大营养素之一。为避免因国际环境变化导致外部资源进口遭到封锁,我国亟需建设、补充和完善油脂供给的新方式。以丰富、廉价的生物质原料替代化石原料生产食用油脂和功能性油脂,在保障国家能源安全、粮食安全方面意义重大。细菌、酵母、霉菌、微藻等多种微生物具有利用葡萄糖、木质纤维素、淀粉、甘油甚至一碳化合物等原料合成脂肪酸的能力。由于微生物,特别是产油真菌相比产油植物和动物具有生产周期短、易于大规模生产、占地少、受天气影响小、原料来源丰富等优势,近年来备受学术界和产业界重视。然而,如何获取生产效率高且鲁棒性强的微生物油脂细胞工厂,仍然面临着使能工具有限、油脂产量不高、油脂组分难以控制等诸多挑战。近年来,合成生物学技术的发展为本领域的研究提供了新的资源、工具和思路。使得产油微生物研究在遗传操作工具创制、代谢途径改造以及高附加值产品开发等方面不断获得突破。本文聚焦于真核油脂细胞工厂的开发,从天然产油底盘菌株的基因元件、遗传转化方法、基因编辑工具的开发,油脂细胞工厂代谢途径的重构/调试以及向高附加值脂质化学品方向的升级等方面,系统总结了合成生物技术驱动油脂细胞工厂开发的研究进展,可为后续研究提供借鉴。

关键词：合成生物学基因编辑产油真菌代谢工程高附加值产品