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免疫学杂志 2011年第7期27卷 557-561页

作者：韩清珍仝佳赵阳刘嫣芳沈培苏兆亮邵启祥焦志军王胜军许化溪江苏大学检验医学研究所免疫学研究室镇江市免疫学重点实验室镇江212012

目的产丙酮酸棒状杆菌是近年来发现的细菌新种,其与痤疮丙酸杆菌一样属需脂杆菌,但有无与痤疮丙酸杆菌类似的免疫调节作用尚不清楚。本文以痤疮丙酸杆菌为对照,以在固有和适应性免疫应答中发挥重要调节作用的树突状细胞为靶向,研究了产... 详细信息

目的产丙酮酸棒状杆菌是近年来发现的细菌新种,其与痤疮丙酸杆菌一样属需脂杆菌,但有无与痤疮丙酸杆菌类似的免疫调节作用尚不清楚。本文以痤疮丙酸杆菌为对照,以在固有和适应性免疫应答中发挥重要调节作用的树突状细胞为靶向,研究了产丙酮酸棒状杆菌对树突状细胞成熟标志表达和细胞因子产生等方面的影响,为该菌作为免疫调节剂进一步开发利用提供依据。方法加热灭活的产丙酮酸棒状杆菌或痤疮丙酸杆菌刺激树突状细胞DC2.4后,ELISA法检测其产生相关细胞因子的变化;MTT法检测细胞的增殖情况;流式细胞仪分析细胞表面MHCⅡ、CD40等表达水平。结果两种细菌刺激后,DC2.4表达IL-6和IL-12的水平均有增加,且随刺激的菌液浓度的增加而升高,这种刺激还明显增强DC2.4的增殖能力。此外,刺激后细胞表面的MHCⅡ、CD40/80/86表达也呈现不同程度的上调,尤以MHCⅡ为著。结论产丙酮酸棒状杆菌对DC2.4细胞增殖、成熟和相关细胞因子的表达均有明显的影响,这种影响将有助于促进DC的抗原提呈功能。

关键词：痤疮丙酸杆菌产丙酮酸棒状杆菌树突状细胞免疫调节

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产丙酮酸棒状杆菌的鉴定及微生物学性状研究

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中国人兽共患病学报 2017年第5期33卷 418-422页

作者：冯佳佳吴倩倩王保强孙铭艳陶元勇潍坊医学院医学检验学系纳米医学技术研究所潍坊261053 潍坊医学院附属医院检验科潍坊261053

目的对临床分离于皮脂腺囊肿标本中的菌株进行表型和基因型鉴定,描述该菌株的生物学特性及致病性,为临床诊断提供准确地病原学依据。方法对分离菌株进行革兰氏染色等,并使用VITEK 2Compact全自动微生物分析仪进行鉴定。采用K-B法进行药... 详细信息

目的对临床分离于皮脂腺囊肿标本中的菌株进行表型和基因型鉴定,描述该菌株的生物学特性及致病性,为临床诊断提供准确地病原学依据。方法对分离菌株进行革兰氏染色等,并使用VITEK 2Compact全自动微生物分析仪进行鉴定。采用K-B法进行药敏试验。提取分离菌株DNA,采用通用引物对16S rRNA基因进行PCR扩增并测序,将测序结果与GenBank中收录的16S rRNA基因序列进行BLAST同源性对比。结果分离菌株经VITEK 2Compact鉴定为玫瑰色库克菌,后经16S rRNA序列测定方法鉴定,分离菌株为产丙酮酸棒状杆菌。药敏试验显示该菌株对四环素、万古霉素、利福平敏感,对青霉素、红霉素、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、头孢吡肟、亚胺培南、庆大霉素等均耐药。结论对于表现型不易鉴定或鉴定不准确的细菌,采用16SrRNA序列测定的方法进行鉴定是最准确的。产丙酮酸棒状杆菌是引起患者疾病的致病菌。在完善产丙酮酸棒状杆菌生化反应信息的同时,探索出有效可行的生物学鉴定方法。

关键词：产丙酮酸棒状杆菌生物学特性 16S rRNA

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产丙酮酸棒状杆菌抗MRSA感染作用的机制研究

产丙酮酸棒状杆菌抗MRSA感染作用的机制研究

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作者：章杨苏州大学

学位级别：硕士

目的:通过体内实验研究产丙酮酸棒状杆菌(Corynebacterium pyruviciproducens,***,CP)及其细胞壁成分肽聚糖(CP-PGN)对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant ***,MRSA)的抗感染作用;再通过体外细胞实验来寻找产丙酮酸棒状... 详细信息

目的:通过体内实验研究产丙酮酸棒状杆菌(Corynebacterium pyruviciproducens,***,CP)及其细胞壁成分肽聚糖(CP-PGN)对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant ***,MRSA)的抗感染作用;再通过体外细胞实验来寻找产丙酮酸棒状杆菌发挥免疫佐剂功能的调节途径和有效成分。方法:(1)采用三氯乙酸法提取产丙酮酸棒状杆菌的细胞壁成分-肽聚糖,并通过溶菌酶溶解实验对提取的肽聚糖进行纯度验证。同时分析该肽聚糖的结构、氨基酸的种类及含量。(2)建立小鼠感染模型和治疗模型,观察小鼠生存状态并记录生存和死亡时间,濒临死亡时眼球取血,同时获取肝和肺组织,检测外周血和重要脏器的细菌载量,通过测量脾脏大小重量、肺组织病理切片、血常规分析、实时荧光定量PCR法检测小鼠全血中IL-6和TNF-α来研究产丙酮酸棒状杆菌及其肽聚糖能否提高小鼠抗感染能力。(3)通过RAW264.7细胞与MRSA共培养,显微镜计数染色后的细胞来研究产丙酮酸棒状杆菌及其肽聚糖能否增加细胞对MRSA的吞噬率。(4)Griess分析法检测NO含量,Transwell实验观察迁移率,实时荧光定量PCR法检测细胞中TNF-α,IL-12,IL-10表达水平,从而探讨产丙酮酸棒状杆菌及其肽聚糖对RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞活化的影响。(5)实时荧光定量PCR法检测i NOS和Arginase-1,流式细胞分析技术检测CD86百分率的变化,从而衡量产丙酮酸棒状杆菌及其肽聚糖对巨噬细胞分化的影响。(6)RAW264.7细胞电转TLR2-si RNA后,通过实时荧光定量PCR法、Griess分析NO、细胞迁移分析以及流式细胞分析技术来研究TLR2干扰后,产丙酮酸棒状杆菌及其肽聚糖对RAW264.7细胞活化和分化的影响。结果:(1)通过溶菌酶溶解实验验证可知,所提取的产物为肽聚糖。产丙酮酸棒状杆菌肽聚糖的分子量为18774Da,红外光谱分析具有肽聚糖的特征峰,国标法GB/T14965-1994检测出了其氨基酸的种类及含量。(2)CP及CP-PGN对MRSA引起的血流感染具有显著预防和治疗作用。(3)CP及CP-PGN促进了巨噬细胞的吞噬杀菌能力、趋化迁移能力和细胞因子的合成,表明CP及CP-PGN能够有效激活巨噬细胞的免疫功能。(4)通过q RT-PCR和流式细胞分析技术的结果可以看出,产丙酮酸棒状杆菌及其肽聚糖能够诱导巨噬细胞朝M1型分化。(5)采用si RNA沉默TLR2的表达后,与未干扰组相比,相关指标明显下降,表明TLR2的沉默能够下调产丙酮酸棒状杆菌及其肽聚糖对巨噬细胞的活化和分化。结论:通过相关细胞和动物实验发现,产丙酮酸棒状杆菌及其肽聚糖能够通过TLR2途径有效活化巨噬细胞并促进M1方向的分化,对MRSA引起的感染具有显著的防治作用。经进一步系统研究后,产丙酮酸棒状杆菌及其肽聚糖有望成为一种有效的免疫调节剂,为老年人、慢性病病人和免疫功能低下的人群,提供一种抗感染辅助治疗和预防的不错的选择。

关键词：产丙酮酸棒状杆菌产丙酮酸棒状杆菌肽聚糖耐甲氧西林金黄色葡萄球菌巨噬细胞 TLR2

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