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流感病毒交叉反应性记忆T细胞的研究进展

微生物学通报 2022年第2期49卷 724-736页

作者：苏敏黄俊琼遵义医科大学附属医院输血科贵州遵义563000

流感病毒是长期威胁人类健康最主要的病毒之一。灭活流感疫苗主要产生针对病毒血凝素的菌株特异性抗体,当新出现的流感病毒株与疫苗株不匹配时,疫苗的有效性将会大大降低。由于季节性流感病毒的抗原漂移和突变的持续出现,人们迫切地需... 详细信息

流感病毒是长期威胁人类健康最主要的病毒之一。灭活流感疫苗主要产生针对病毒血凝素的菌株特异性抗体,当新出现的流感病毒株与疫苗株不匹配时,疫苗的有效性将会大大降低。由于季节性流感病毒的抗原漂移和突变的持续出现,人们迫切地需要找到更广泛的保护方式。在以往的研究中,人们逐渐意识到细胞免疫的重要性,尤其是预先存在的记忆T细胞能靶向识别流感病毒内部保守蛋白,可与多种亚型的流感病毒发生交叉反应,并对随后同种亚型或不同亚型的流感病毒感染提供一定的保护作用。本文通过对流感病毒交叉反应性记忆T细胞的研究进展及交叉反应性记忆T细胞在流感预防中的一些指导应用进行综述,以期为流感的预防和疫苗的研发提供新的参考。

关键词：流感病毒 T细胞保守抗原交叉反应

鸡腺病毒血清4型和11型Penton蛋白的表达及交叉反应性评价

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中国兽医科学 2022年第6期52卷 704-711页

作者：秦亚平刘亮亮刘胜旺李慧昕中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了了解不同血清型鸡腺病毒(fowladenovirus,FAdV)表面蛋白的交叉反应性,本研究对FAdV-4(HN/151025株)和FAdV-11(LN/1507株)型病毒的衣壳蛋白之一的Penton蛋白分别进行原核表达以及真核表达,并分别与FAdV-11和FAdV-4型血清进行交叉反应... 详细信息

为了了解不同血清型鸡腺病毒(fowladenovirus,FAdV)表面蛋白的交叉反应性,本研究对FAdV-4(HN/151025株)和FAdV-11(LN/1507株)型病毒的衣壳蛋白之一的Penton蛋白分别进行原核表达以及真核表达,并分别与FAdV-11和FAdV-4型血清进行交叉反应,评价FAdV-4与FAdV-11型毒株Penton蛋白的交叉反应性。Western-blot检测结果显示,FAdV-4型的Penton蛋白与同型血清有良好的反应性,但与FAdV-11型的血清无交叉反应性;FAdV-11型的Penton蛋白与同型血清有良好的反应性,同时与FAdV-4型的血清有微弱的交叉反应。上述结果表明,FAdV-4型血清可同时识别FAdV-4型和FAdV-11型病毒的Penton蛋白。对2株病毒Penton蛋白的氨基酸序列进行比对,结果显示,两种血清型毒株的Penton蛋白的N端差异较大,这个差异区可能与蛋白的主要抗原表位区相关,进而影响血清学交叉反应性及交叉反应的强度,这可能是造成两种血清型毒株Penton蛋白交叉反应差的原因之一。

关键词：鸡腺病毒血清4型血清11型 Penton蛋白交叉反应

7种内罗病毒NP多肽的原核表达及其之间的交叉反应研究

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7种内罗病毒NP多肽的原核表达及其之间的交叉反应研究

作者：裴明超佛山科学技术学院

学位级别：硕士

正内罗病毒属(内罗病毒科正内罗病毒属)包括CCHFV、HAZV、TFLV、NSDV、DUGV、KUPV、ERVEV等多种人兽共患病病毒,其感染人可引起严重发热性疾病。本研究对7种内罗病毒的NP进行结构分析,筛选结构差异显著的多肽进行原核表达和多克隆抗体制... 详细信息

正内罗病毒属(内罗病毒科正内罗病毒属)包括CCHFV、HAZV、TFLV、NSDV、DUGV、KUPV、ERVEV等多种人兽共患病病毒,其感染人可引起严重发热性疾病。本研究对7种内罗病毒的NP进行结构分析,筛选结构差异显著的多肽进行原核表达和多克隆抗体制备,并进一步研究了内罗病毒间的交叉反应,为未来研究正内罗病毒的诊断及防控奠定基础。(1)通过对CCHFV、HAZV、TFLV、NSDV、DUGV、KUPV、ERVEV共7种内罗病毒NP的氨基酸序列比对、蛋白质结构分析等生物信息学分析,发现内罗病毒的NP为棒状结构,由头部结构域和突出的柄部结构域两大部分组成,头部由NP的N端和C端组成高度保守的封闭结构,柄部主要由4个α螺旋和部分无规则区组成,不同内罗病毒间柄部结构差异较大。通过对内罗病毒NP的氨基酸序列和空间结构比对,发现NP氨基酸序列245-310区段的差异最大,并且具有良好的免疫原性、亲水性和表面可及性。(2)筛选出的截短NP多肽区段约有66个氨基酸,经p Cold原核表达载体构建后,转入BL21(DE3)p Lys S表达菌诱导表达。目的蛋白用Ni-NTA层析柱进行纯化,并通过HRV3C酶切除Nus A融合标签,用Ni-NTA层析柱进行二次纯化获得了高纯度的内罗病毒截短NP蛋白。将纯化的截短NP蛋白免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体,经Western blot验证,均具有良好的抗原亲和力。间接ELISA结果显示HAZV的血清抗体效价在1:100000以上,CCHFV、TFLV、NSDV、DUGV、KUPV、ERVEV的血清抗体效价在1:200000以上,而在CCHFV的抗血清效价测定中发现重组蛋白上的融合标签Nus A可能会影响抗原抗体反应。在交叉反应的研究中发现不同的血清群之间也具有一定的交叉反应,而HAZV血清抗体对其他内罗病毒的截短NP多肽亲和力比对自身多肽亲和力更强,推测HAZV NP氨基酸序列的245-310区段抗原的关键抗原表位可能与其他内罗病毒不同。本研究制备的CCHFV抗血清和TFLV抗血清特异性较强,有应用于诊断方面的潜力;内罗病毒在不同的血清群之间也具有一定的交叉反应;HAZV和NSDV抗血清与其他内罗病毒均有较强的交叉反应,其截断NP在疫苗制备方面具有潜力;本研究为未来内罗相关病毒疫苗的制备,血清学诊断方法的建立提供数据支持。

关键词：正内罗病毒属核衣壳蛋白NP 原核表达多克隆抗体 CCHFV 交叉反应

福建牡蛎精氨酸激酶的抗原表位定位及交叉反应性分析

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福建牡蛎精氨酸激酶的抗原表位定位及交叉反应性分析

作者：桓霏集美大学

学位级别：硕士

食物过敏是公众广泛关注的食品安全问题,其中水产品是主要致敏食物之一。牡蛎营养价值高,是我国重要的经济水产品,随着牡蛎及其副产品消费量的增加,由其引发的过敏问题也日益增加。迄今为止,牡蛎中致敏原的研究较为欠缺,制约了对牡蛎过... 详细信息

食物过敏是公众广泛关注的食品安全问题,其中水产品是主要致敏食物之一。牡蛎营养价值高,是我国重要的经济水产品,随着牡蛎及其副产品消费量的增加,由其引发的过敏问题也日益增加。迄今为止,牡蛎中致敏原的研究较为欠缺,制约了对牡蛎过敏性疾病的认识。本研究以福建牡蛎(Crassostrea angulata)为对象,鉴定并克隆表达重要致敏原,分析其免疫学特性、抗原表位和交叉反应性,为牡蛎过敏的诊断及预防提供理论基础。本研究从福建牡蛎中纯化得到38 kDa组分,经质谱鉴定为精氨酸激酶(Arginine kinase,AK),进一步通过血清学分析及嗜碱性粒细胞激活试验确定其为牡蛎中致敏原,并将AK的致敏原信息提交至世界卫生组织/国际免疫学会联合会过敏原命名小组,获得系统命名为Cra a 2。随后克隆AK的序列,得到1050 bp的开放阅读框,编码351个氨基酸,表达获得与天然AK具有相似IgG/IgE结合活性的重组AK。进一步比较天然/重组AK的理化性质,发现二者具有相似的二级结构、疏水性、热稳定性及胃肠液消化特性等。通过化学变性剂破坏AK的空间结构发现其IgE结合活性降低但未完全丧失,说明牡蛎AK同时存在线性表位及构象表位。采用生物信息学预测结合噬菌体淘选,获得AK的模拟线性表位及模拟构象表位。进一步利用合成肽段结合血清学验证了AK的11个线性表位(AA56-73、AA77-92、AA93-107、AA105-118、AA121-133、AA134-146、AA165-176、AA185-200、AA227-、AA 、AA);其中AA具有较强的IgE结合活性,说明其是重要线性表位。通过突变模拟构象表位中的关键氨基酸,鉴定到IgE结合活性显著降低的4个突变体(L7A、M187A、Q227A、H277A),进而确认AK的4个构象表位依次为C-AK-1、C-AK-2、C-AK-3、C-AK-4;其中L7A的结合活性降低最明显,提示C-AK-1为重要构象表位。通过兔抗福建牡蛎AK/拟穴青蟹AK多克隆抗体发现了AK在牡蛎、虾、蟹物种间存在交叉反应。进一步利用14名牡蛎AK过敏患者血清进行Dot blot分析,其中7份血清同时与牡蛎、虾、蟹AK呈现阳性反应。抑制性酶联免疫吸附实验表明,虾、蟹AK能显著抑制牡蛎AK与IgE的结合,证实物种间AK交叉反应性的存在。此外,氨基酸序列保守性分析发现AA、AA在AK被鉴定为致敏原的15个物种中是保守的。综上,本研究鉴定福建牡蛎重要致敏原AK,克隆得到其开放阅读框,表达获得与天然AK具有相似性质的重组AK;鉴定到AK的11个IgE线性表位及4个IgE构象表位;证实AK在甲壳类及软体类物种间的交叉反应性,发现保守表位AA、AA。这些结果可望为食品加工或表位删除等方式定向消减牡蛎AK致敏性提供理论基础。

关键词：福建牡蛎精氨酸激酶致敏原抗原表位交叉反应

昆明花粉过敏原组分及其与果蔬蛋白交叉反应研究

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昆明花粉过敏原组分及其与果蔬蛋白交叉反应研究

作者：汪戬昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]本研究旨在探寻引起云南地区花粉过敏人群的主要过敏原组分和引起花粉—果蔬交叉反应的主要过敏原组分,为实现花粉过敏的精确诊断,减少或防止花粉-果蔬交叉反应的发生,及后续开发、开展花粉过敏原特异性免疫治疗提供有力支撑。[方... 详细信息

[目的]本研究旨在探寻引起云南地区花粉过敏人群的主要过敏原组分和引起花粉—果蔬交叉反应的主要过敏原组分,为实现花粉过敏的精确诊断,减少或防止花粉-果蔬交叉反应的发生,及后续开发、开展花粉过敏原特异性免疫治疗提供有力支撑。[方法]选择2021年1月至2022年1月在昆明医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科门诊就诊的变应性鼻炎患者120位,这些患者的花粉过敏原特异性IgE（sIgE）检测为阳性,抽取这些患者的静脉血3ml以上,分离出血清,使用浙大迪迅果蔬过敏原特异性抗体IgE检测试剂检测收集到的血清样本,将患者分为仅花粉过敏组（对照组）和花粉-果蔬交叉反应组,再使用浙大迪迅多种花粉组分特异性抗体sIgE/sIgG4检测试剂检测两组样本,获得相关数据后进行分析。[结果]1.花粉过敏原组分的sIgE检测结果:桦树的Bet v 1占35.83%,其次是黄花蒿的Art an 2、梧桐的Pla a 2和柏树的Cup a al,均占31.67%.2.果蔬过敏原的sIgE检测结果:榛子占15.83%.3.花粉过敏原组分的sIgG4检测结果:梧桐的Pla a 2占30.00%,其次是黄花蒿的Art an 1占24.17%.4.应用sIgE、sIgG4两种检测试剂检测患者血清中Bet v 1,比较Bet v 1的阳性率有无明显差别,得出P＜0.05,差异有统计学意义,即Bet v 1的阳性率在sIgE、sIgG4两种检测试剂中有明显差别。5.应用sIgE、sIgG4两种检测试剂检测患者血清中Pla a 2,比较Pla a 2的阳性率有无明显差别,得出P＞0.05,差异无统计学意义,尚不能认为Pla a 2的阳性率在sIgE、sIgG4两种检测试剂中有明显差别。[结论]1.昆明地区花粉过敏人群的最主要过敏原组分是桦树的Bet v 1。2.云南地区最主要的果蔬过敏原可能是榛子。3.桦树的Bet v 1可能是昆明地区主要的花粉-果蔬交叉反应蛋白。

关键词：花粉过敏原交叉反应花粉-果蔬 sIgE sIgG4

我国动物过敏原致敏分布特征及基于组分解析诊断的交叉反应性研究

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我国动物过敏原致敏分布特征及基于组分解析诊断的交叉反应性研究

作者：朱惠清广州医科大学

学位级别：硕士

目的调查我国大陆不同地区疑似过敏性疾病患者的猫、狗和马皮屑的过敏原致敏情况及致敏风险因素,为当地过敏性疾病的预防和诊治提供依据。进一步探讨猫和/或狗致敏患者中猫、狗、马的分子致敏模式及其与其他毛皮动物之间的IgE交叉反应... 详细信息

目的调查我国大陆不同地区疑似过敏性疾病患者的猫、狗和马皮屑的过敏原致敏情况及致敏风险因素,为当地过敏性疾病的预防和诊治提供依据。进一步探讨猫和/或狗致敏患者中猫、狗、马的分子致敏模式及其与其他毛皮动物之间的IgE交叉反应。方法1.在具有代表性的11个中国省份（14个临床中心）中邀请可疑过敏性疾病患者进行了横断面调查,共有2377例0-86岁的患者参与本次调查。临床医生收集了患者的病史、问卷和血液样本,并检测了猫、狗和马皮屑过敏原s IgE水平。结合问卷调查和动物特异性IgE水平,分析了动物致敏在中国大陆不同区域和不同人群的流行病学特征和危险因素。2.从流行病学调查中随机筛选共95例经临床诊断为过敏性疾病的猫和/或狗致敏患者,检测猫组分（Fel d 1/2/4）、狗组分（Can f 1/2/3/5）、马皮屑与马组分（Equ c 1）及其他毛皮动物过敏原（包括牛皮屑、豚鼠上皮、小鼠上皮和尿液、大鼠上皮、兔上皮和鸡羽毛）的s IgE水平。分析动物过敏原组分致敏模式及交叉反应蛋白;并分别采用猫和狗的Lipocalin、SA蛋白组分作为抑制剂进一步行s IgE抑制试验,验证引起交叉致敏的主要组分蛋白并分析抑制率。结果1.在2377例疑似过敏性疾病患者中,14.9%对猫皮屑致敏,9.3%对狗皮屑致敏,5.5%对马皮屑致敏。动物过敏原主要引起低水平的致敏。猫、狗和马皮屑变应原s IgE之间存在显著的正相关关系（r均大于0.750）。46.5%的s IgE阳性患者同时对至少两种动物过敏原致敏。患者对动物的致敏率呈现出随年龄增长而先上升后下降的趋势,且均在青春期达到高峰。西部地区猫和狗皮屑的致敏率显著高于东部地区,而马的致敏率在东西部地区之间无统计学差异。2.在矫正混杂因素后,年龄≤6岁（a OR:2.54,95%CI 1.80-3.60）、7-12岁（a OR:3.20,95%CI 1.87-5.49）、居住于西部（a OR:2.19,95%CI 1.48-3.24）、高动物过敏原暴露（a OR:3.19,95%CI 2.14-4.75）仍为猫皮屑致敏的风险因素;狗致敏的影响因素与猫皮屑相似。居住在较低的楼层（a OR:0.56,95%CI0.37-0.85）是马致敏的保护因素。3.在95例猫和/或狗s IgE阳性患者中,猫和狗皮屑致敏率均为96.8%,猫主要组分Fel d 1阳性率为90.5%,狗的主要组分Can f 1和Can f 5阳性率分别为46.3%和25.3%。其他毛皮动物如马、牛、豚鼠、小鼠上皮与尿液、大鼠、兔和鸡粗提物的致敏率较低,在16.8%～49.5%之间。4.猫与狗的SA（Fel d 2和Can f 3）与兔上皮、小鼠上皮、豚鼠上皮和大鼠上皮之间存在强正相关性,而Lipocalin家族与上述四种动物上皮过敏原仅为中低度相关。s IgE抑制试验结果显示,Fel d 2和Can f 3对四种上皮来源的毛皮动物过敏原抑制率分别在66.5%～91.8%和75.8%～91.9%之间。猫、狗与其他毛皮动物过敏原的交叉反应主要由SA引起。结论1.来自中国多中心的可疑过敏性疾病患者中,猫是所研究的最常见的动物过敏原,其次是狗和马皮屑。动物主要引起低水平致敏,且动物过敏原之间存在潜在的交叉致敏现象。2.动物皮屑过敏原的致敏率在不同年龄段、性别、地区、出生方式等方面均存在差异;其中年龄、居住于西部、农村/郊区、动物过敏原高度暴露等是动物致敏的危险因素。3.Fel d 1、Can f 1/5和Equ c 1分别是猫、狗和马的主要致敏组分;Lipocalin和SA蛋白家族均与动物过敏原的交叉反应有关,其中SA是引起猫/狗与上皮来源的哺乳动物过敏原交叉反应性的重要组分。

关键词：动物过敏原横断面调查疑似过敏患者特异性免疫球蛋白E 组分解析诊断过敏原组分血清白蛋白交叉反应

355nm光诱发的水体中HNO_2与C_6H_5Br交叉反应机理

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物理化学学报 2007年第11期23卷 1677-1682页

作者：秦艳黄丽董文博房豪杰侯惠奇复旦大学环境科学研究所东华大学环境科学与工程学院上海200051

利用激光闪光光解技术研究了有氧、无氧条件下HNO_2-C_6H_5Br-H_2O体系的光化学反应.研究结果表明,HNO_2与C_6H_5Br的光化学反应由HNO_2光解产生·OH自由基引发,·OH与C_6H_5Br反应生成C_6H_5Br…OH,反应速率常数为(8.1±0.7)×10~9 L·... 详细信息

利用激光闪光光解技术研究了有氧、无氧条件下HNO_2-C_6H_5Br-H_2O体系的光化学反应.研究结果表明,HNO_2与C_6H_5Br的光化学反应由HNO_2光解产生·OH自由基引发,·OH与C_6H_5Br反应生成C_6H_5Br…OH,反应速率常数为(8.1±0.7)×10~9 L·mol^(-1)·s^(-1).C_6H_5Br…OH可被HNO_2或O_2氧化.C_6H_5Br…OH与HNO_2的二级反应速率常数为(3.0±0.5)×10~7 L·mol^(-1)·s^(-1),比C_6H_5Br…OH与O_2的反应速率常数(4.0±0.6)×10~8 L·mol^(-1)·s^(-1)小,C_6H_5Br…OH与O_2生成的C_6H_5Br…OHO_2以(2.4±0.1)×10~4s^(-1)的速率单分子衰减.气相色谱.质谱联用(GC-MS)分析表明,C_6H_5Br…OH与HNO_2或O_2作用可形成多种含硝基的化合物或醌类物质.

关键词：溴苯激光闪光光解 HNO2 瞬态吸收光谱 ·OH自由基交叉反应

季节性流感疫苗免疫血清对欧亚类禽H1N1猪流感病毒的交叉反应

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中华医学杂志 2021年第8期101卷 568-572页

作者：李梓刘佳黄维娟隗合江谭敏菊成艳辉李希妍杨磊赵翔王大燕中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心北京102206

目的评估季节性流感疫苗免疫血清对欧亚类禽H1N1猪流感病毒的交叉反应。方法9株人感染欧亚类禽H1N1猪流感病毒株来自江苏、河北、山东、云南、湖南、福建和天津等省份的国家级流感监测网络实验室,通过深度测序分析其血凝素特性。于2019... 详细信息

目的评估季节性流感疫苗免疫血清对欧亚类禽H1N1猪流感病毒的交叉反应。方法9株人感染欧亚类禽H1N1猪流感病毒株来自江苏、河北、山东、云南、湖南、福建和天津等省份的国家级流感监测网络实验室,通过深度测序分析其血凝素特性。于2019年10月在云南省安宁市接种2019-2020年度季节性流感疫苗的儿童(2~5岁)、成人(24~57岁)和老年人(60~84岁)中各招募30名志愿者,采集其接种疫苗前和接种1个月后血清。通过血凝抑制试验评估免疫前后血清对2015年以来分离的4株人感染欧亚类禽H1N1猪流感病毒的交叉反应。结果9株欧亚类禽H1N1猪流感病毒的血凝素基因同源性较一致,但与甲型流感病毒[A(H1N1)pdm09](以下简称“疫苗株”)的血凝素重链和轻链氨基酸基因的差异分别为90~101个和24~30个氨基酸。疫苗株抗血清对疫苗株的抗体滴度为2560,欧亚类禽H1N1猪流感病毒以及欧亚类禽H1N1猪流感病毒抗血清对疫苗株的抗体滴度均为640。接种季节性流感疫苗的儿童、成人和老年组人群针对疫苗株的抗体滴度≥40者占比分别为90.0%、70.0%和73.3%;而对4株欧亚类禽H1N1猪流感病毒仅为46.7%、36.7%和33.3%~43.3%。结论接种季节性流感疫苗不能对欧亚类禽H1N1猪流感病毒产生有效的交叉保护作用。

关键词：流感病毒A型流感疫苗抗体交叉反应

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贝类致敏原抗原表位及交叉反应的研究进展

食品工业科技 2021年第14期42卷 420-428页

作者：桓霏云肖李梦思韩天娇刘萌杨阳曹敏杰刘光明集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心厦门市海洋功能食品重点实验室福建厦门361021

贝类(Shellfish)包括甲壳类和软体类,具有很高的营养价值和经济价值。我国作为贝类生产及消费大国,由食用贝类引发的食物过敏问题日益增多。已报道的贝类食品致敏原有原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌质钙结合蛋白、肌球蛋白轻链等。抗原表... 详细信息

贝类(Shellfish)包括甲壳类和软体类,具有很高的营养价值和经济价值。我国作为贝类生产及消费大国,由食用贝类引发的食物过敏问题日益增多。已报道的贝类食品致敏原有原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌质钙结合蛋白、肌球蛋白轻链等。抗原表位是食品致敏原发挥作用的分子基础,明确不同致敏原的抗原表位,是深入分析其致敏性及交叉反应性的关键,也是定向消减致敏原致敏性的重要前提。本文介绍了贝类食品致敏原种类、抗原表位、交叉反应性和加工消减致敏原致敏性等方面的研究进展。

关键词：贝类食物过敏致敏原抗原表位交叉反应加工消减