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禽多杀性巴氏杆菌粘附蛋白Cp39的交叉免疫保护作用

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微生物学报 2010年第3期50卷 360-366页

作者：恩特马克.布拉提白彭清忠严芳何翠吾鲁木汗.那孜尔别克吉首大学生物资源与环境科学学院吉首416000

【目的】比较体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白、天然粘附蛋白Cp39和重组粘附蛋白rCp39对小鼠的交叉保护作用。【方法】用NaCl提取法制备鸡胚尿囊液和DSA培养基增殖的C48-3株荚膜蛋白,并用电洗脱方法纯化Cp39蛋白,将rCp39蛋白以可溶... 详细信息

【目的】比较体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白、天然粘附蛋白Cp39和重组粘附蛋白rCp39对小鼠的交叉保护作用。【方法】用NaCl提取法制备鸡胚尿囊液和DSA培养基增殖的C48-3株荚膜蛋白,并用电洗脱方法纯化Cp39蛋白,将rCp39蛋白以可溶形式表达在大肠杆菌BL21后,用Amylose Resin亲和层析柱纯化。分别以100μg剂量的鸡胚尿囊液增殖菌体荚膜蛋白、DSA培养基培养菌体荚膜蛋白、纯化的Cp39蛋白和rCp39蛋白通过皮下注射各试验组小鼠,生理盐水为对照组,第二次免疫后2周分别以A:1型菌C48-3株(6.7×102cfu)和A:3型菌C51-3株(1.1×103cfu)进行攻毒试验。采集免疫后小鼠血清,用ELISA法检测抗体水平,并计算免疫保护率,来评价4种抗原对小鼠的交叉保护效果。【结果】SDS-PAGE结果显示,体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白的条带和分子量相似,且体内外表达的Cp39蛋白的分子量相同;ELISA结果表明Cp39免疫组小鼠和rCp39免疫组小鼠血清rCp39蛋白特异性抗体的水平显著高于其他两组(P保护试验表明,体外增殖菌体荚膜蛋白免疫组小鼠对同源C48-3株和异源C51-3株攻毒的保护率分别为100%和60%,鸡胚尿囊液增殖菌体荚膜蛋白免疫组小鼠、Cp39免疫组小鼠和rCp39免疫组小鼠对同源C48-3株和异源C51-3株攻毒的保护率分别为100%和80%。【结论】粘附蛋白Cp39是禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白中的主要交叉保护抗原,可以作为禽霍乱亚单位疫苗。

关键词：多杀性巴氏杆菌粘附蛋白免疫原性交叉保护

柯萨奇病毒A组16型免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析

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中国生物制品学杂志 2013年第10期26卷 1366-1370,1375页

作者：谢振锋普晶黄泓泰刘正玲董承红刘龙丁王丽春中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所病毒免疫室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie virus groups A type 16,CoxA16)4个毒株进行免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析。方法提取CoxA16 G20、KM/M08、MY08和KM208病毒RNA,PCR扩增VP1基因,并进行测序;利用MEGA4.0软件中Bootstrap Test of phylogeny→Neighbor-joining方法对13株CoxA16基于VP1基因全序列构建CoxA16种系进化树并进行基因分型,使用DNAMAN软件对4个毒株VP1核苷酸序列的同源性及其蛋白质氨基酸序列差异位点进行分析。分别用纯化灭活后的4株CoxA16免疫BALB/c小鼠,于初次免疫和二次免疫后的第14、28天采血,分离血清,Western blot法检测G20毒株免疫的小鼠血清中抗体的的特异性;微量中和试验法检测血清中和抗体效价并进行交叉中和试验。结果 G20、MY08和KM208毒株属于B2b基因型,而KM/M08毒株属于B2a基因型;4个毒株间VP1基因核苷酸序列的同源性为91.8%～99.0%;MY08与其他3个毒株相比,在VP1的第102位(N→D)、241位(E→K)和248位(T→A)上存在3个差异氨基酸位点。G20毒株的抗血清可特异识别CoxA16的VP1和VP2蛋白,具有良好的免疫原性;各实验组二次免疫后第28天中和抗体效价均高于其他检测时期,其中MY08组中和抗体效价明显低于其他3组,差异有统计学意义(P﹤0.01);G20、KM/M08、和KM208毒株间的交叉保护能力优于MY08毒株对G20、KM/M08和KM208毒株的交叉保护能力,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4株CoxA16灭活后均能诱导机体产生相应的中和抗体和交叉保护能力,其中G20、KM/M08和KM208毒株在灭活后,显示了更好的免疫原性和毒株间交叉保护能力。

关键词：柯萨奇病毒免疫原性交叉保护序列分析

HSV-1减毒株M3诱导的特异性免疫应答对HSV-2的交叉保护特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第1期41卷 36-44页

作者：车雪阳李雪琦徐兴丽张莹王丽春廖芸程继帅牟唐维李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的本研究从血清学及临床保护角度探讨单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)和HSV-2免疫交叉反应的特征,以期为控制及预防这两种病毒引起的疾病提供数据资料。方法HSV-1减毒株M3免疫小鼠,检测其诱导产生以中和抗体为指... 详细信息

目的本研究从血清学及临床保护角度探讨单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)和HSV-2免疫交叉反应的特征,以期为控制及预防这两种病毒引起的疾病提供数据资料。方法HSV-1减毒株M3免疫小鼠,检测其诱导产生以中和抗体为指征的特异性免疫应答情况。免疫28 d后分别用HSV-1野毒株和HSV-2野毒株经不同途径对小鼠进行攻击感染,观察M3免疫小鼠抵御HSV-1/2病毒感染的情况。结果HSV-1减毒株M3免疫小鼠不能诱导产生特异性的抗HSV-2中和抗体,免疫28 d后接受不同途径的HSV-2攻击,病毒载量显著增加,但未出现明显的异常临床表现,同时组织病理损伤也仅表现为较轻微的炎性反应。HSV-1减毒株M3免疫小鼠能够诱导产生特异性的抗HSV-1中和抗体,并且在HSV-1野毒攻击后表现出明显的保护效果。结论HSV-1减毒株M3免疫小鼠后所诱导的免疫应答对HSV-1野毒株感染攻击表现出以中和抗体为特征的、可限制病毒在体内增殖的免疫保护作用,然而对HSV-2野毒株攻击则表现出不以抗体形式中和病毒而是以控制病毒的增长为主要模式的临床交叉免疫保护能力。

关键词：人类单纯疱疹病毒1型人类单纯疱疹病毒2型减毒株交叉保护

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肠道病毒71型疫苗交叉保护能力的研究进展

中国生物制品学杂志 2015年第6期28卷 648-653页

作者：张军楠时念民罗凤基梁争论北京市朝阳区疾病预防控制中心北京100021 中国食品药品检定研究院北京100050

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引起手足口病的主要病原体,研发疫苗是防控该病疫情的有效措施。目前全球已有5家企业或机构研发的单一基因型EV71全病毒灭活疫苗进入临床试验阶段。然而由于不同地区EV71流行株基因型不同,了解单一E... 详细信息

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引起手足口病的主要病原体,研发疫苗是防控该病疫情的有效措施。目前全球已有5家企业或机构研发的单一基因型EV71全病毒灭活疫苗进入临床试验阶段。然而由于不同地区EV71流行株基因型不同,了解单一EV71疫苗株制备的疫苗对其他流行株的交叉保护能力,对疫苗的应用具有重要意义。本文对近年来EV71疫苗交叉保护能力的研究进展作一综述。

关键词：肠道病毒71型疫苗交叉保护

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1型和2型鸭疫里默氏菌的交叉保护

福建农林大学学报（自然科学版） 2009年第5期38卷 521-525页

作者：程龙飞傅光华彭春香施少华黄瑜陈红梅万春和福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013

通过PCR扩增、克隆、序列测定获得29株鸭疫里默氏菌(RA)的16S rRNA和16S-23S rRNA间隔区的核苷酸序列.将16S rRNA和16S-23S rRNA间隔区序列连接后分析发现,1型菌株和大多数2型菌株分别处于不同的分支,而2型菌株中的RAf11、RAf3和RAf104... 详细信息

通过PCR扩增、克隆、序列测定获得29株鸭疫里默氏菌(RA)的16S rRNA和16S-23S rRNA间隔区的核苷酸序列.将16S rRNA和16S-23S rRNA间隔区序列连接后分析发现,1型菌株和大多数2型菌株分别处于不同的分支,而2型菌株中的RAf11、RAf3和RAf104不处在2型菌株的分支中,却与1型菌株非常接近.挑选RAf11菌株和2型分支中的RAf19菌株,分别制备灭活苗,免疫雏鸭后进行攻菌保护试验,RAf11菌株对1型菌株的攻击可产生较高的交叉保护率,达53.8%,而RAf19菌株对1型菌株攻击的保护率仅为23.1%.借助16S rRNA和16S-23S rRNA间隔区序列的分析,筛选到一株具交叉保护的RA菌株.

关键词：鸭疫里默氏菌 16S rRNA序列 16S-23S rRNA间隔区序列交叉保护

交叉保护和诱导抗性对烟草抗CMV的效应研究

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交叉保护和诱导抗性对烟草抗CMV的效应研究

作者：李占杰河南农业大学

学位级别：硕士

黄瓜花叶病毒病(CMV)是危害烟草生产最大的一种病害之一,但是在生产上一直没有找到有效防治措施。植物诱导抗病性是植物在诱导因子作用下产生的能抵抗病原微生物的一种抗病性。交叉保护是由弱病毒引起的对植物一种保护作用。通过研究水... 详细信息

黄瓜花叶病毒病(CMV)是危害烟草生产最大的一种病害之一,但是在生产上一直没有找到有效防治措施。植物诱导抗病性是植物在诱导因子作用下产生的能抵抗病原微生物的一种抗病性。交叉保护是由弱病毒引起的对植物一种保护作用。通过研究水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)等化学诱导因子诱导烟草产生的对CMV的抗病性和弱病毒(Fny-CMV-Δ2b)对植株的交叉保护作用,从而找到一条有效防治CMV的途径。 CMV的2b基因能促进CMV在被侵染植株中的胞间运动、长距离运动和系统传播,抑制转录后基因沉默和SA介导的植株对病毒的抗性。本研究利用已经构建了的缺失2b CMV(Fny-CMV-Δ2b),研究其对烟草植株交叉保护作用。研究结果显示,Fny-CMV-Δ2b在烟草植株上表现轻微的花叶症状,接种枯斑寄主苋色藜产生的枯斑相对于CMV明显减轻,说明Fny-CMV-Δ2b是一种弱病毒。Fny-CMV-Δ2b能够提高植株的株高和叶面积,分别提高了15.49%和18.26%,也明显提高了植株的整株、茎、叶片和根系的干鲜重,这说明Fny-CMV-Δ2b促进植株的健康生长,能够明显提高烟草植株的生物学产量。相比于Fny-CMV明显降低植株的总叶绿素、叶绿素a、叶绿素b含量,Fny-CMV-Δ2b对植株的总叶绿素、叶绿素a、叶绿素b含量没有影响;接种Fny-CMV植株的净光合速率(P)、蒸腾速率(E)和气孔导度(Gs)明显降低,胞间CO浓度(Ci)略微升高,但接种Fny-CMV-Δ2b的植株的这些光合作用指标没有明显变化;Fny-CMV-Δ2b对植株的光系统Ⅱ(PSⅡ)也没有影响,这说明Fny-CMV-Δ2b没有破坏植株的光合器官,不影响植株的光合作用。 SA能诱导多种植物对病毒、真菌及细菌病害产生抗性,在植物产生系统获得抗性(SAR)中起着重要的作用,是诱发系统获得抗性的信号分子之一;MeJA是一种重要的植物激素,具有广泛的生理功能,也能诱导植物的SAR。本研究在烟草生长的两个不同时期分别叶面喷施SA和MeJA,研究其诱导烟草产生的对CMV的抗性。研究结果显示:叶面喷施SA和MeJA均能诱导烟草产生对CMV的抗性,是病情指数从接近于60降低到40左右,对CMV的诱抗效果分别为31.69%和33.89%;喷施SA和MeJA能够明显增加烟草叶片中SOD活性,分别比对照提高了273.56%和349.16%;喷施SA和MeJA能够明显增加烟草叶片中POD活性,分别比对照提高了40.71%和42.17%,接种CMV后,两个处理的POD活性分别比对照提高了12.99%和35.70%;喷施SA和MeJA也能够明显增加烟草叶片中HO含量,相对于对照分别提高了147.62%和220.00%,接种CMV后,两个处理的HO含量分别提高了155.98%和170.55%;SA和MeJA处理能够降低烟草叶片中的CAT活性,分别比对照降低了43.94%和49.76%。这表示,SA和MeJA通过提高植株体内的SOD活性和POD活性,降低CAT活性,来提高SAR第二信使HO的含量,来诱导植株SAR的产生,提高对CMV的抗性。总之,缺失2b的CMV能够促进烟草健康生长,不影响烟草叶片的光合作用和叶绿素荧光特性;SA和MeJA能够增加烟草的SOD和POD活性及HO含量,降低CAT活性,诱导烟草对对CMV产生抗性。

关键词：烟草交叉保护弱病毒诱导抗性系统获得抗性水杨酸茉莉酸甲酯

利用弱毒株交叉保护技术防治甜橙茎陷点型衰退病

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中国农业科学 2008年第12期41卷 4085-4091页

作者：周彦周常勇李中安王雪峰刘科宏西南大学柑桔研究所/中国农业科学院柑桔研究所

【目的】获得对中国甜橙茎陷点型衰退病具有防治作用的柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)弱毒株。【方法】对7个国内外CTV弱毒分离株进行褐色桔蚜接种强毒株的拮抗试验,并运用p25/HinfⅠRFLP组群分析、特异性RT-PCR分析和寄主植... 详细信息

【目的】获得对中国甜橙茎陷点型衰退病具有防治作用的柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)弱毒株。【方法】对7个国内外CTV弱毒分离株进行褐色桔蚜接种强毒株的拮抗试验,并运用p25/HinfⅠRFLP组群分析、特异性RT-PCR分析和寄主植株症状观察的方法对拮抗试验效果进行检测。【结果】本研究中所用7个弱毒株对甜橙茎陷点型衰退病均有一定的防治作用,其中弱毒株CT9、CT17和CT77对茎陷点型强毒株CT14的拮抗效果最为明显,分别为70%,50%和40%。分子检测与生物学检测的结果相一致。【结论】初步筛选出的具有拮抗作用的CTV弱毒株CT9、CT17和CT77具有应用于交叉保护的潜力,可供进一步田间区试研究。

关键词：柑桔衰退病毒交叉保护防效检测

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体内繁殖禽巴氏杆菌的提取及其交叉保护特性

中国兽医学报 2005年第1期25卷 16-18页

作者：韦强鲍国连佟承刚季权安浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021

通过不同攻毒途径、不同攻毒剂量、不同采血时间及不同采血途径的试验表明 ,以翅静脉途径攻击多杀巴氏杆菌 ,剂量 10亿 /只 ,在鸡濒死挣扎时的即刻颈静脉无菌放血 ,可以自鸡体采集到最大量的含菌血 ,每只鸡 37～ 39m L ,再将血液进行差... 详细信息

通过不同攻毒途径、不同攻毒剂量、不同采血时间及不同采血途径的试验表明 ,以翅静脉途径攻击多杀巴氏杆菌 ,剂量 10亿 /只 ,在鸡濒死挣扎时的即刻颈静脉无菌放血 ,可以自鸡体采集到最大量的含菌血 ,每只鸡 37～ 39m L ,再将血液进行差速和蔗糖密度梯度离心 ,可最大限度地提取到血液中的巴氏杆菌 ,每只鸡 30 0～ 4 0 0亿的总菌量。该结果与报道的提取方法相比 ,效率提高了 10 0 0倍以上。提取的细菌灭活后免疫鸡 ,经异型菌交叉攻毒试验表明 ,体内繁殖的巴氏杆菌具有交叉保护特性 ,而体外培养菌则没有。用该方法提取的巴氏杆菌 ,其总蛋白和总糖含量均高于培养基培养菌。

关键词：体内血液交叉保护剂量颈静脉静脉途径采血时间巴氏杆菌养菌繁殖

C型产气荚膜梭菌不同菌株交叉免疫保护力研究

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湖北农业科学 2010年第9期49卷 2184-2185,2201页

作者：刘泽文曹宏云杨前平邓均华杨克礼梁望旺伍锐段正赢周丹娜田永祥徐涤平湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064

将C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)C59-2、C59-37和C59-383种菌株分别制备成灭活疫苗,分别免疫小白鼠和家兔,2周后分别用不同菌株的致死性毒素进行攻击。结果表明,C型产气荚膜梭菌不同菌株制备的灭活疫苗免疫小白鼠和家兔后,... 详细信息

将C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)C59-2、C59-37和C59-383种菌株分别制备成灭活疫苗,分别免疫小白鼠和家兔,2周后分别用不同菌株的致死性毒素进行攻击。结果表明,C型产气荚膜梭菌不同菌株制备的灭活疫苗免疫小白鼠和家兔后,可使小白鼠和家兔能抵抗其他菌株致死性毒素的攻击,小白鼠保护数在7/8以上,家兔保护数也均在3/4以上。说明C型产气荚膜梭菌不同菌株之间具有较好的交叉免疫保护作用。

关键词： C型产气荚膜梭菌不同菌株交叉保护