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应用rDNA-内转录间隔区分子条形码技术调查福建省亚稀褶黑菇中毒事件

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中国食品卫生杂志 2019年第3期31卷 276-280页

作者：林锋庄东铭黄信有裴振义高建龙毛财凤方勤美傅武胜福建中医药大学药学院福建福州350108 福建省疾病预防控制中心福建省人兽共患病研究重点实验室福建福州350001 邵武市疾病预防控制中心福建南平354000 南平市疾病预防控制中心福建南平353000 建瓯市疾病预防控制中心福建建瓯353100 福建省邵武市立医院福建南平354000 福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003 福建医科大学公共卫生学院福建福州350108

目的调查福建省南平地区3个市县的3起野生菌食物中毒事件,为今后野生菌中毒调查和处置积累经验,减少中毒事件的发生。方法通过查阅中毒患者的临床救治资料,前往中毒事件发生地采集引起中毒的可疑蘑菇样品,并采用rDNA-内转录间隔区(rDNA-... 详细信息

目的调查福建省南平地区3个市县的3起野生菌食物中毒事件,为今后野生菌中毒调查和处置积累经验,减少中毒事件的发生。方法通过查阅中毒患者的临床救治资料,前往中毒事件发生地采集引起中毒的可疑蘑菇样品,并采用rDNA-内转录间隔区(rDNA-ITS)分子条形码鉴定技术进行种属鉴别。结果中毒流行病学特征、中毒患者临床特征、生化指标变化和分子生物学鉴定的结果表明,2017年8月的2起食物中毒事件均由亚稀褶黑菇(Russula subnigricans Hongo)导致;根据中毒患者临床特征,另一起中毒事件亦被推断为由亚稀褶黑菇引起;3起中毒事件中,蘑菇食用者为21人,发病17人,罹患率为81.0%,其中3人死亡,病死率为17.6%(3/17)。结论首次在福建省通过分子生物学手段鉴别出由亚稀褶黑菇引起的食物中毒事件;亚稀褶黑菇广泛分布于福建山区,易被误采误食而引起中毒事件,且病死率高。

关键词：亚稀褶黑菇毒蘑菇食物中毒分子生物学鉴别流行病学调查

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亚稀褶黑菇的生物学特性及其毒性研究

亚稀褶黑菇的生物学特性及其毒性研究

作者：蒋盛岩湖南师范大学

学位级别：硕士

利用菌种分离技术、光镜技术、电镜技术、高效液相色谱技术、毒理实验技术、电泳方法等对亚稀褶黑菇(Russula subnigricans Hongo)的生物学特性和毒性机理进行了研究，主要包括以下内容：亚稀褶黑菇的生态学和组织学研究、菌种分离培养... 详细信息

利用菌种分离技术、光镜技术、电镜技术、高效液相色谱技术、毒理实验技术、电泳方法等对亚稀褶黑菇(Russula subnigricans Hongo)的生物学特性和毒性机理进行了研究，主要包括以下内容：亚稀褶黑菇的生态学和组织学研究、菌种分离培养、扫描电镜观察、成分分析、粗毒液诱导小自鼠肝肾细胞凋亡，小白鼠中毒后肝肾细胞透射电镜观察，研究结果如下： 1．通过野外生态调查和利用扫描电镜对亚稀褶黑菇进行了生态学和组织学研究。亚稀褶黑菇是一种外生菌根菌，在相对稳定的生态环境条件下，平均温度24～32℃，相对湿度50～80％，降雨量(土壤含水量)30％以上，均有亚稀褶黑菇发生，湿度是主导因子。每年在夏末秋初高温阵雨之后为发生盛期。发生地林间郁闭度0.9左右，土壤pH值5.75，其共生树种以壳斗科为主。亚稀褶黑菇菌髓为异型菌髓，担孢子近球形或球状卵形，有小刺，6.3～8.1μm×5.4～7.2μm(L=7.1)，菌褶菌丝无锁状联合，囊状体特别发达。 2．以四因素三水平的正交试验设计培养条件，pH5.6，26.2℃，45d，对亚稀褶黑菇菌丝体进行固体培养。通过对菌丝体直径的测定及分析，优化筛选出亚稀褶黑菇菌种培养的最适培养基：(NH)HPO 1g/1000mL，甘露糖15g/1000mL，KHPO 0.5g/1000mL，维生素B 100μg/1000mL，并证明氮源为其生长的最重要营养因素。 3．除色氨酸被盐酸水解破坏而未检出外，亚稀褶黑菇蛋白中含有16种氨基酸，9种必需氨基酸，其氨基酸的总含量达179.652μg/mg，总必需氨基酸含量为63.546μg/mg，必需氨基酸含量占总含量的35.37％，亚稀褶黑菇中可溶性糖含量为2.93％，粗纤维含量为7.55％，维生素C0.1484mg/100g，烟酸0.1096mg/100g，维生素B 0.0586mg/100g，维生素B 0.0096mg/100g，粗毒液中含有微量的α-鹅膏毒肽。 4.用电泳技术研究亚稀褶黑菇粗毒液诱导小白鼠肝肾细胞凋亡，小白鼠亚稀褶黑菇抽提液中毒后，肝肾细胞.DNA经琼脂糖凝胶电泳出现180一200bp整数倍的oNA梯形带，19.09/L一28.59/L范围内，亚稀褶黑菇提取液诱导肝肾细胞凋亡表现出时间和剂量依赖性.亚稀褶黑菇提取液能诱导小白鼠肝肾细胞凋亡，亚稀褶黑菇提取液诱导肝肾细胞凋亡是亚稀褶黑菇中毒后机体病变死亡的重要表现形式之一 5.用透射电镜较细致地观察了小白鼠亚稀褶黑菇粗毒液中毒后的肝肾病理变化，亚稀褶黑菇毒素主要损害肾脏，引起肾细胞核核膜肿胀，线粒体肿胀，溶酶体增多，肾细胞坏死.对小白鼠用亚稀褶黑菇粗毒液进行毒性试验，测定了亚稀褶黑菇的半致死剂量LDS。值为 2当***/kg。

关键词：亚稀褶黑菇生态学组织结构菌种培养成分分析细胞凋亡 LD50值

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亚稀褶黑菇的化学成分研究

亚稀褶黑菇的化学成分研究

作者：龚庆芳湖南师范大学

学位级别：硕士

亚稀褶黑菇(Russula subigricans Hongo)属于担子菌亚门、伞菌目、红菇科、红菇属,为剧毒蘑菇。我国近年来不时发生由此类蘑菇引起的中毒事件,为了弄清亚稀褶黑菇中毒的机理,为临床治疗提供可行的证据和药物开发提供理论依据。本文采用... 详细信息

亚稀褶黑菇(Russula subigricans Hongo)属于担子菌亚门、伞菌目、红菇科、红菇属,为剧毒蘑菇。我国近年来不时发生由此类蘑菇引起的中毒事件,为了弄清亚稀褶黑菇中毒的机理,为临床治疗提供可行的证据和药物开发提供理论依据。本文采用柱层析、薄层层析、质谱、核磁共振技术和化学反应等手段,对亚稀褶黑菇的部分化学成分进行了分离纯化和结构鉴定。从亚稀褶黑菇子实体中分离得到了10个化合物,根据光谱数据测定结果确定出了它们的结构,其中包括4个麦角甾醇衍生物:5a, 8a-epidioxy-(22E, 24R)-ergosta-6, 22-dien-3β-ol(1);(22E, 24R)-ergosta-7, 22-dien-3β, 5a, 6a-triol(cerevisterol)(2);(22E, 24R)-7, 22-diene-3β, 5a, 6β, 9a-tetraol(3);3β, 5a, 9a-Trihydroxy-ergosta-7, 22-dien-6-one(4);1个神经酰胺:(2S, 3S, 4R, 2′R)-2-(2-hydroxytetracosanoylamino)octadecane-1,3,4-triol(5);2个甘油酯类衍生物:glycerol 1-9′Z-oleate(6), glycerol 1-tertracosanoate(7),和D-阿洛醇(D-allitol)(8),以及十八碳饱和脂肪酸(9),十八碳油酸(10)。根据文献报道,化合物3((22E, 24R)-7, 22-diene-3β, 5a, 6B, 9a-tetraol)和化合物4(3β, 5a, 9a-Trihydroxy-ergosta-7, 22-dien-6-one)被确认为有细胞毒活性化合物。此为首次从亚稀褶黑菇中分离得到。

关键词：亚稀褶黑菇化学成分甾醇类细胞毒活性

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亚稀褶黑菇的化学成分

天然产物研究与开发 2007年第3期19卷 436-438页

作者：龚庆芳张玉梅谭宁华陈作红湖南师范大学生命科学学院长沙410081 中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室昆明650204

从剧毒蘑菇─亚稀褶黑菇(Russula subnigricans Hongo)子实体中分离出5个已知化合物,经波谱分析鉴定为4个麦角甾醇(22E,24R)-ergosta-7,22-diene-3β,5α,6α,9α-tetraol(1)、(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,9α-trihydroxy-6-one(2)、(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol(3)、(22E,24R)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(4)和神经酰胺(2S,3S,4R,2′R)-2-(2′-hydroxytetracosanoylamino)octadecane-1,3,4-triol(5)。

关键词：亚稀褶黑菇化学成分麦角甾醇神经酰胺

灵芝煎剂对亚稀褶黑菇急性中毒大鼠肝脏保护作用的实验研究

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灵芝煎剂对亚稀褶黑菇急性中毒大鼠肝脏保护作用的实验研究

作者：杨可达中南大学

学位级别：硕士

背景：毒蕈中毒是常见临床急症之一,其中亚稀褶黑菇中毒是比较常见的一种毒蕈中毒。亚稀褶黑菇,亦名亚黑红菇、火炭菌、毒黑菇,是同担子亚门层菌纲红菇科红菇属的一种剧毒野生蘑菇,在我国分布很广,因此,误采误食此种野生蕈中毒事件经常... 详细信息

背景：毒蕈中毒是常见临床急症之一,其中亚稀褶黑菇中毒是比较常见的一种毒蕈中毒。亚稀褶黑菇,亦名亚黑红菇、火炭菌、毒黑菇,是同担子亚门层菌纲红菇科红菇属的一种剧毒野生蘑菇,在我国分布很广,因此,误采误食此种野生蕈中毒事件经常发生。人类误食中毒后临床症状发作快,迅速引起全身多系统损害,尤其是肝脏和肾脏损害极为明显,一般在72h内死亡,最快者可在6h左右死亡,是毒蘑菇中毒类型中最为凶险的一种,病死率高。目前临床上尚无特效解毒剂。灵芝是我国传统的名贵中药材,含有多种有效化学成分,几乎对全身各系统均有调节作用。临床研究发现灵芝煎剂对亚稀褶黑菇中毒患者有较好的治疗作用,能明显降低亚稀褶黑菇中毒患者的病死率。目的：本研究通过动物实验从功能和病理形态学角度证实灵芝煎剂对于SD大鼠急性亚稀褶黑菇中毒肝脏的保护作用,为以后其进一步的具体的解毒机制研究和临床实验奠定基础。方法：1.模型制备：用SD雌性大鼠20只,随机分为4组：第一组为空白组,采用生理盐水灌胃;第二组为灵芝组,采用灵芝煎剂灌胃;第三组为模型组Ⅰ,采用亚稀褶黑菇毒素灌胃造模;第四组为模型组Ⅱ,采用亚稀褶黑菇毒素灌胃造模后,再用灵芝煎剂灌胃治疗。 2.实验研究：(1)分组处置：①空白组：每天上午8：00～9：00用生理盐水4 ml灌胃;②灵芝组：每天上午8：00～9：00用灵芝煎剂4 ml灌胃。总疗程为3天。③模型组Ⅰ：第一天上午8：00～9：00用亚稀褶黑菇毒素按5.0g／Kg+生理盐水配成4 ml液灌胃,以后每天于同一时间用生理盐水4 ml灌胃;④模型组Ⅱ：第一天上午8：00～9：00用亚稀褶黑菇毒素5.0g／Kg+生理盐水配成1ml液灌胃,2 h后用灵芝液4 ml灌胃,以后每天于同一时间用灵芝煎剂4 ml灌胃。(2)观察大鼠的存活情况,行为积分。实验结束后,处死动物,心脏取血2ml离心后取血清查肝脏生化指标[总胆红素(STB)、直接胆红素(SDB)、总胆汁酸(BA)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)];同时取肝脏组织福尔马林液固定,HE染色,光镜下观察组织病理改变。结果：1.生存情况：模型组Ⅰ于实验48h以后死亡2只,其余所有实验动物至实验结束。 2.行为表现：模型组Ⅰ大鼠机警性降低,精神萎靡,喜睡,自主活动减少,与空白组和灵芝组大鼠比较进食量减少。模型组Ⅱ精神状态尚好,自主活动可,机警性较高,与模型组Ⅰ比较进食量也增加。空白组和灵芝组行为表现无差异。 3.肝脏生化指标改变：模型组Ⅰ血清STB、SDB、BA、ALT、AST显著升高,模型组ⅡSTB、SDB、BA、ALT、AST较模型组Ⅰ下降明显,但和空白组比较,差异仍有统计学意义。空白组和灵芝组相比无统计学差异。 4.病理改变：(1)大体肉眼观察：模型组Ⅰ的大鼠肝脏体积明显肿大,质地变硬,充血,颜色变深。模型组Ⅱ大鼠肝脏体积缩小不明显,质地较硬,充血,颜色较中毒组浅。其余两组肝脏体积质地颜色均正常。(2)光镜观察：①空白组：低倍镜所见肝组织结构清楚,肝细胞形态正常,肝窦无扩张,肝小叶结构存在。高倍镜下所示肝细胞大小形态正常,胞浆丰富,细胞核大小正常,核仁清楚,无坏死迹象。②灵芝组：低倍镜所见肝组织结构清楚,肝细胞形态规则,大小一致,肝小叶结构存在。高倍镜下所示肝细胞大小形态正常,胞浆丰富,细胞核大小正常,核仁清楚,无坏死迹象。③模型组Ⅰ：低倍镜所见肝组织结构有明显破坏,充血,肝细胞形态不规则,大小不一致,浊肿,胞核固缩,肝窦扩张,充血,小叶结构破坏。高倍镜下所示肝细胞形态不规则,大小不一致,浊肿,胞浆内可见中毒颗粒,胞核固缩,部分核膜消失甚至溶解,可见坏死现象,肝窦扩张,充血。④模型组Ⅱ：低倍镜所见肝组织结构清晰,肝细胞形态欠规则,大小较一致,轻度浊肿,肝窦稍扩张,稍充血。高倍镜下所示肝细胞形态基本正常,胞浆稍浑浊,浊肿,核仁清楚,肝窦稍扩张,稍充血,小叶间静脉无扩张,胆管无增生。结论：1.亚稀褶黑菇对SD大鼠肝脏有急性损害作用。 2.灵芝煎剂对急性亚稀褶黑菇中毒大鼠肝功能有保护作用。 3.灵芝煎剂对急性亚稀褶黑菇中毒大鼠肝细胞损害有保护作用。

关键词：灵芝煎剂亚稀褶黑菇 SD大鼠急性中毒肝脏保护

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亚稀褶黑菇对小白鼠肝肾超微结构的影响

生命科学研究 2004年第2期8卷 150-153页

作者：蒋盛岩张志光陈作红张平湖南师范大学生命科学学院中国湖南长沙410081 邵阳学院生物工程系中国湖南邵阳422004

对小白鼠用亚稀褶黑菇提取液进行毒性试验,测定了亚稀褶黑菇的半致死剂量LD50值;应用透射电镜观察了小白鼠亚稀褶黑菇中毒后的病理变化.结果表明,亚稀褶黑菇的LD50值为2852.1mg/kg,电镜检查发现,亚稀褶黑菇毒素主要损害肾脏,引起肾细胞... 详细信息

对小白鼠用亚稀褶黑菇提取液进行毒性试验,测定了亚稀褶黑菇的半致死剂量LD50值;应用透射电镜观察了小白鼠亚稀褶黑菇中毒后的病理变化.结果表明,亚稀褶黑菇的LD50值为2852.1mg/kg,电镜检查发现,亚稀褶黑菇毒素主要损害肾脏,引起肾细胞核核膜肿胀,线粒体肿胀,溶酶体增多,肾细胞坏死.

关键词：亚稀褶黑菇 LD50值超微结构

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亚稀褶黑菇中毒的临床表现研究

临床急诊杂志 2017年第10期18卷 792-794页

作者：赵群远段宇珠陈安宝胡强李芳黄绍伟嫡娥姆昆明医科大学第二附属医院急诊内科昆明650101

近年来亚稀褶黑菇（亚黑红菇）中毒事件发生率较高,王锐等根据中国2004-2011年22个省份通过突发公共卫生事件报告管理信息系统报告毒蕈中毒事件,统计稀褶黑菇、毒红菇、亚稀褶黑菇共发生中毒事件16起、中毒66例、死亡25例,死亡例数构成... 详细信息

近年来亚稀褶黑菇（亚黑红菇）中毒事件发生率较高,王锐等根据中国2004-2011年22个省份通过突发公共卫生事件报告管理信息系统报告毒蕈中毒事件,统计稀褶黑菇、毒红菇、亚稀褶黑菇共发生中毒事件16起、中毒66例、死亡25例,死亡例数构成比16.4%,仅次于致命白毒伞（44.1%）。有关致命白毒伞的中毒机制及临床表现研究较多,故临床也较为重视。而关于亚稀褶黑菇中毒的报道相对较少,故对其中毒后临床表现认识不足,导致临床中不能早期识别,给诊治带来了一定的影响,加之中毒机理尚不完全清楚,因此病死率较高。

关键词：亚稀褶黑菇中毒临床表现横纹肌溶解中毒机制