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改进的亚硫酸氢钠测序法检测HepG2 RASSF1A基因CpG岛甲基化状态

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华中科技大学学报（医学版） 2006年第3期35卷 411-412,415页

作者：张莉君王先良孙晞徐顺清华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境医学研究所武汉430030

目的改进亚硫酸氢钠测序法,并检验改进后方法在甲基化检测中的可行性。方法提取人肝癌细胞株HepG2基因组DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后Ras相关家族1A基因(RASSF1A)启动子序列设计特异引物并结合沉降PCR扩增,T-A载体克隆、测序。结... 详细信息

目的改进亚硫酸氢钠测序法,并检验改进后方法在甲基化检测中的可行性。方法提取人肝癌细胞株HepG2基因组DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后Ras相关家族1A基因(RASSF1A)启动子序列设计特异引物并结合沉降PCR扩增,T-A载体克隆、测序。结果HepG2细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的16个CpG位点均被甲基化。结论改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增,提高PCR效率,更适于基因甲基化状态的检测。

关键词：亚硫酸氢钠测序法甲基化聚合酶链反应 Ras相关家族1A基因

唯支持细胞综合征患者睾丸组织Boule基因5'调控序列甲基化分析

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中华男科学杂志 2016年第6期22卷 516-519页

作者：李红星景原雪孙亮王乃辉宋德潇靳怡王乐玮薛石龙兰州大学第一医院生殖医学专科医院甘肃兰州730000

目的:探讨唯支持细胞综合征(SCOS)患者睾丸组织中Boule基因5'调控序列甲基化状态。方法:收集梗阻性无精子症患者(12例)和SCOS无精子患者(15例)睾丸组织穿刺标本,门诊检查排除精索静脉曲张、隐睾、感染等疾病。试剂盒法提取患者睾丸组织... 详细信息

目的:探讨唯支持细胞综合征(SCOS)患者睾丸组织中Boule基因5'调控序列甲基化状态。方法:收集梗阻性无精子症患者(12例)和SCOS无精子患者(15例)睾丸组织穿刺标本,门诊检查排除精索静脉曲张、隐睾、感染等疾病。试剂盒法提取患者睾丸组织基因组DNA,利用生物信息学方法分析Boule基因5'调控序列的序列特征,采用亚硫酸氢钠测序法检测睾丸组织中Boule基因甲基化状态。结果:Boule基因5'调控区存在一个Cp G岛,SCOS患者Boule基因的甲基化水平(61.4%)显著高于梗阻性无精子症患者(21.7%)(P<0.01),共14个Cp G位点甲基化有显著性差异,分别为-58 bp、-50 bp、-48 bp、-38 bp、-28 bp、-24 bp、-20 bp、-15 bp、-1 bp、+5 bp、+8 bp、+15 bp、+29 bp和+58 bp。结论:SCOS患者Boule基因的甲基化水平显著高于梗阻性无精子症患者,推测这种甲基化变化可能与精子发生障碍有关。

关键词：唯支持细胞综合征 Boule基因 5'调控序列甲基化亚硫酸氢钠测序法

5羟色胺转运体启动子区CpG岛甲基化与精神分裂症的相关研究

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中国神经精神疾病杂志 2010年第10期36卷 631-634页

作者：董燕程宇琪徐健许秀峰白燕昆明医学院第一附属医院精神科昆明650032 临汾市第四人民医院心理咨询科昆明医学院第一附属医院风湿免疫科

目的探讨5羟色胺转运体(5-HTT)启动子区CpG岛甲基化水平与精神分裂症的相关性。方法纳入符合美国精神障碍诊断与统计手册第Ⅳ版(DSM-IV)诊断标准的首发精神分裂症患者30例和正常对照30名,采用亚硫酸氢钠测序法测定受试者的5-HTT基因启... 详细信息

目的探讨5羟色胺转运体(5-HTT)启动子区CpG岛甲基化水平与精神分裂症的相关性。方法纳入符合美国精神障碍诊断与统计手册第Ⅳ版(DSM-IV)诊断标准的首发精神分裂症患者30例和正常对照30名,采用亚硫酸氢钠测序法测定受试者的5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果患者组和正常对照组间5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平的差异无统计学意义(2=0.25,P>0.05);以两组的平均年龄27岁分层后再比较,患者组和对照组相同年龄段的5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平差异亦无统计学意义(P>0.05),按性别分组后比较,患者组和对照组间的差异也无统计学意义(P>0.05)。结论本研究未发现5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平与精神分裂症相关。

关键词： DNA甲基化精神分裂症 5-羟色胺转运体亚硫酸氢钠测序法

pEGFP基因启动子区甲基化的梯度降落PCR定量检测法

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环境与健康杂志 2010年第5期27卷 396-399页

作者：江艳王先良王春晖王小利杨怡姝段小丽聂静王菲菲张金良厦门大学海洋与环境学院福建厦门361005 中国环境科学研究院环境污染与健康研究室北京100012 安徽医科大学公共卫生学院安徽合肥230032 北京工业大学生命科学学院北京100022

目的改进亚硫酸氢钠测序法,并在CMV基因启动子甲基化检测中进行验证。方法提取pEGFP-C3质粒重组人肝癌细胞株HepG2 DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后质粒基因CMV启动子序列设计特异引物并结合梯度降落PCR扩增,T-A载体克隆、测序,目标... 详细信息

目的改进亚硫酸氢钠测序法,并在CMV基因启动子甲基化检测中进行验证。方法提取pEGFP-C3质粒重组人肝癌细胞株HepG2 DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后质粒基因CMV启动子序列设计特异引物并结合梯度降落PCR扩增,T-A载体克隆、测序,目标区域甲基化定量。结果 pEGFP-C3质粒基因约600bp的CMV启动子区甲基化水平可以精确定量,检测结果与标准品一致,重复测量结果稳定。结论改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增,提高PCR效率,更适于基因甲基化状态的检测。

关键词：基因亚硫酸氢钠测序法甲基化梯度降落PCR CMV启动子 pEGFP—C3

5-羟色胺转运体启动子区CpG岛甲基化与精神分裂症病因的相关性分析

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5-羟色胺转运体启动子区CpG岛甲基化与精神分裂症病因的相关性分析

作者：董燕昆明医学院

学位级别：硕士

背景精神分裂症在全世界的发病率约为1%,已经证明5-羟色胺(5-hydrotryptamine,5-HT)的功能失调与包括精神分裂症在内的几种精神障碍有关。5-羟色胺转运体(Serotonin transport,5-HTT)通过决定5-HT突触信号的强度和持续时间而对5-羟色... 详细信息

背景精神分裂症在全世界的发病率约为1%,已经证明5-羟色胺(5-hydrotryptamine,5-HT)的功能失调与包括精神分裂症在内的几种精神障碍有关。5-羟色胺转运体(Serotonin transport,5-HTT)通过决定5-HT突触信号的强度和持续时间而对5-羟色胺能神经递质起到关键作用。近期研究表明5-HTT启动子区CpG岛甲基化与mRNA转录相关联,5-HTT的甲基化是5-HT功能的重要调节因子。因此我们有理由认为5-HTT启动子区CpG岛甲基化与精神分裂症相关联。目的定量分析精神分裂症患者5-羟色胺转运体启动子区CpG岛甲基化水平,分析5-羟色胺转运体启动子区CpG岛甲基化水平与精神分裂症病因的关系。方法对30例原发性精神分裂症患者,采取其外周血,应用亚硫酸氢钠测序法(bisulfite genomic sequencing, BSP)检测5-羟色胺转运体启动子区CpG岛内CpG位点的甲基化状况。结果患者组和正常对照组间5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平无统计学差异χ2=0.61,P>0.05;18-27岁年龄段χ2=1.00,P>0.05,28-42岁年龄段χ2=0.52,P>0.05,甲基化水平与年龄差异无统计学差异;男性甲基化水平χ2=0.25,P>0.05;女性甲基化水平χ2=0.26,P>0.05,甲基化水平与性别差异无统计学差异。结论 5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平在精神分裂症组与正常对照组间无统计学差异,5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平可能不是精神分裂症发病的相关因素。

关键词： DNA甲基化精神分裂症 5-羟色胺转运体亚硫酸氢钠测序法

乳腺癌组织中Maspin蛋白表达与maspin基因启动子甲基化关系的研究

同方学位论文库评论

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癌变．畸变．突变 2009年第3期21卷 197-200页

作者：方芳李铁臣吴佩皖南医学院弋矶山医院普外科皖南医学院分子生物学研究室安徽芜湖241001

背景与目的:探讨乳腺癌与maspin基因失活之间的关系。材料与方法:采用免疫组织化学方法检测30例乳腺癌患者癌组织、癌近旁组织和癌远旁组织中Maspin蛋白的表达情况,用亚硫酸氢钠测序法检测乳腺癌组织maspin启动子CpG岛的甲基化情况。结... 详细信息

背景与目的:探讨乳腺癌与maspin基因失活之间的关系。材料与方法:采用免疫组织化学方法检测30例乳腺癌患者癌组织、癌近旁组织和癌远旁组织中Maspin蛋白的表达情况,用亚硫酸氢钠测序法检测乳腺癌组织maspin启动子CpG岛的甲基化情况。结果:乳腺癌组织中的Maspin蛋白表达明显低于癌近旁组织(P<0.05)和癌远旁组织(P<0.01),乳腺癌组织maspin基因启动子CpG岛甲基化率为98.72%。结论:乳腺癌的发生与maspin基因失活关系密切,启动子异常甲基化可能是maspin基因在乳腺癌中失活的重要途径。

关键词：乳腺癌 maspin基因甲基化亚硫酸氢钠测序法