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亚硝酸盐还原酶对咸鱼中亚硝酸盐的降解条件与效果研究

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食品工业科技 2015年第8期36卷 210-214,229页

作者：王雅楠吴燕燕任中阳李来好杨贤庆周婉君中国水产科学研究院南海水产研究所农业部水产品加工重点实验室广东广州510300 上海海洋大学食品学院上海201306

为了探明亚硝酸盐还原酶(Nitrite Reductase,NiRs)对咸鱼中亚硝酸盐的降解作用及应用条件,实验以亚硝酸盐降解量为评价指标,通过单因素实验和Design-expert响应面实验分析咸鱼加工过程中加入亚硝酸盐还原酶(NiRs)的酶浓度、温度、时间... 详细信息

为了探明亚硝酸盐还原酶(Nitrite Reductase,NiRs)对咸鱼中亚硝酸盐的降解作用及应用条件,实验以亚硝酸盐降解量为评价指标,通过单因素实验和Design-expert响应面实验分析咸鱼加工过程中加入亚硝酸盐还原酶(NiRs)的酶浓度、温度、时间的最适条件,并通过测定色差值和感官指标分析NiRs对咸鱼品质的影响。结果表明:NiRs在咸鱼加工中的最佳应用条件是酶浓度4mg/m L、温度34℃、时间5h,亚硝酸盐降解率可达到32.7%。加入NiRs不影响咸鱼的品质,对咸鱼风味有提升作用。研究结果表明在咸鱼生产中添加NiRs可有效降解亚硝酸盐,在保证咸鱼的食用安全性的同时,为腌制水产品的加工提供理论依据和技术支撑。

关键词：咸鱼亚硝酸盐还原酶亚硝酸盐降解条件效果

蜡样芽孢杆菌LJ01的鉴定及亚硝酸盐还原酶性质

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华南理工大学学报（自然科学版） 2015年第6期43卷 135-141页

作者：刘冬梅罗彤晖杨丹霞黄娟吴晖余以刚李理华南理工大学轻工与食品学院广东广州510640

从豆瓣酱中筛选出一株能高效降解亚硝酸盐的菌株LJ01,经鉴定为蜡样芽孢杆菌.通过测定LJ01细胞中不同组分的酶活,研究了亚硝酸盐还原酶的初步定位.LJ01经100 mg/L的Na NO2诱导后,用溶菌酶破壁,粗酶液先经阴离子DEAE Sepharose Fast Flow... 详细信息

从豆瓣酱中筛选出一株能高效降解亚硝酸盐的菌株LJ01,经鉴定为蜡样芽孢杆菌.通过测定LJ01细胞中不同组分的酶活,研究了亚硝酸盐还原酶的初步定位.LJ01经100 mg/L的Na NO2诱导后,用溶菌酶破壁,粗酶液先经阴离子DEAE Sepharose Fast Flow层析柱分离,测定不同蛋白组分a、b、c降解亚硝酸盐的活力,利用0.1 mol/L无机电子供体丁二酸和亚硫酸钠等鉴定出组分c为亚硝酸盐还原酶,再经葡聚糖凝胶G-150层析柱分离,获得较纯的亚硝酸盐还原酶,每升发酵液可得到0.54 mg活性酶蛋白,酶蛋白活力达到4004.89 U/mg,得率为2.37%,纯化后其NiR的比活力提高了17.57倍.经SDSPAGE电泳后确定LJ01中亚硝酸盐还原酶的单体分子质量约为30 ku.

关键词：蜡样芽孢杆菌亚硝酸盐还原酶亚硝酸盐降解 16S rDNA 细胞定位

亚硝酸盐还原酶高产菌株的筛选与产酶条件的研究

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食品研究与开发 2021年第10期42卷 179-185页

作者：付豪邓艳芳黄丽玲赵丹王昌涛李萌北京工商大学化学与材料工程学院北京市植物资源研究开发重点实验室北京100048 北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心北京100048

该文从泡菜中筛选到一株高产亚硝酸盐还原酶的菌种N-6,经16SrDNA序列测序鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。通过优化培养基中不同碳源、氮源、磷源等营养成分、培养方式、培养温度等条件,鼠李糖乳杆菌N-6的最适培养基为:2... 详细信息

该文从泡菜中筛选到一株高产亚硝酸盐还原酶的菌种N-6,经16SrDNA序列测序鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。通过优化培养基中不同碳源、氮源、磷源等营养成分、培养方式、培养温度等条件,鼠李糖乳杆菌N-6的最适培养基为:2%葡萄糖、0.5%酪蛋白胨、0.2%磷酸氢二钾,37℃通气培养,通过硫酸铵分级盐析、透析、二乙基氨基乙基纤维素(diethylaminoethylcellulose,DEAE)柱层析等方法对亚硝酸还原酶进行纯化,酶活力由60.83 U/mL提高到764.49 U/mL,有效地提高了酶纯度。

关键词：乳酸菌亚硝酸盐亚硝酸盐还原酶培养条件优化分离纯化

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奇古菌亚硝酸盐还原酶基因相似基因的多样性

微生物学报 2015年第3期55卷 351-357页

作者：黄晓燕罗剑飞赵丹丹林炜铁华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

【目的】氨氧化古菌(Ammonia-oxidizing archaea,AOA)是奇古菌门中的唯一类群,广泛分布于各个生态系统中,对氮素生物地球化学循环起着重要作用。亚硝酸还原酶是反硝化作用的关键酶,目前关于AOA反硝化作用的研究较少,对AOA亚硝酸盐还原... 详细信息

【目的】氨氧化古菌(Ammonia-oxidizing archaea,AOA)是奇古菌门中的唯一类群,广泛分布于各个生态系统中,对氮素生物地球化学循环起着重要作用。亚硝酸还原酶是反硝化作用的关键酶,目前关于AOA反硝化作用的研究较少,对AOA亚硝酸盐还原酶基因多样性的研究有利于揭示AOA在反硝化中的作用。【方法】本研究以水体、沉积物和土壤为研究对象,构建了奇古菌样的nirK基因克隆文库,研究了这些环境中nirK相似基因的多样性。【结果】对奇古菌样的nirK基因文库及其序列分析表明:湖水及其沉积物的nirK基因克隆文库得到10个OTUs,菜田土壤和水样则有8个OTUs;系统发育进化树表明这些nirK氨基酸序列和Candidatus Nitrosopumilus koreensis AR1,Nitrosopumilus maritimus SCM1最为相似,但相似度较低(53%-68%)。克隆文库多样性指数分析表明:所有样品都存在不同类型的nirK基因,水体样品nirK基因类型的多样性和均匀度高于土壤样品,菜田土壤的nirK基因类型多样性最高,分布最均匀。【结论】本研究表明土壤和淡水环境中奇古菌门nirK基因也具有较高的多样性,并且这些基因型与海洋样品差异非常大,这些基因编码的亚硝酸盐还原酶可能对这些环境中的反硝化作用有重要意义。

关键词：氨氧化古菌亚硝酸盐还原酶多样性奇古菌门

蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus LJ01中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化

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食品科学 2018年第6期39卷 69-74页

作者：陈思敏罗彤晖费永涛吴健锋刘冬梅华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640

利用克隆表达技术,对一种蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus LJ01的亚硝酸盐还原酶(nitrite reductase,Ni R)基因进行克隆、原核表达,利用Ni柱亲和层析和DEAE Sepharose Fast Flow交换层析对表达的重组NiR进行纯化,分析重组酶的性质。研究结... 详细信息

利用克隆表达技术,对一种蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus LJ01的亚硝酸盐还原酶(nitrite reductase,Ni R)基因进行克隆、原核表达,利用Ni柱亲和层析和DEAE Sepharose Fast Flow交换层析对表达的重组NiR进行纯化,分析重组酶的性质。研究结果显示,该NiR含有一个1 623 bp的开放阅读框,编码540 个氨基酸序列,重组NiR的分子质量约为67 ku;该酶中同时存在铁离子和铜离子,且含量分别为51.0 mg/kg和184.5 mg/kg;圆二色谱结果显示α-螺旋结构在重组NiR中所占比例最大。

关键词：亚硝酸盐还原酶蜡样芽孢杆菌基因克隆蛋白表达工程菌

LCR 6013降解亚硝酸盐的途径及其亚硝酸盐还原酶的初步定位

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现代食品科技 2013年第11期29卷 2627-2632,2662页

作者：张馨月刘冬梅许喜林李平李理华南理工大学轻工与食品学院广东广州510640 华南理工大学环境科学与工程学院广东广州510640

研究了在De Man,Rogosa and Sharpe medium(简称MRS培养基)体系中NaCl、Vc对Lactobacillus casei subsp.rhamnosus6013(简称LCR 6013)降解亚硝酸盐的影响。并利用电子捕获-气相色谱法和靛酚蓝染色法确定亚硝酸盐的降解途径。通过测定LCR... 详细信息

研究了在De Man,Rogosa and Sharpe medium(简称MRS培养基)体系中NaCl、Vc对Lactobacillus casei subsp.rhamnosus6013(简称LCR 6013)降解亚硝酸盐的影响。并利用电子捕获-气相色谱法和靛酚蓝染色法确定亚硝酸盐的降解途径。通过测定LCR6013细胞中不同组分的酶活研究了亚硝酸盐还原酶(Nitrite reductase,NiR)的定位。在MRS体系中,NaCl、Vc浓度分别为0.75%、0.02%时,LCR 6013对亚硝酸盐的降解量最高分别为9.29μg/mL和9.89μg/mL,与对照比,此降解效果显著(p 0.01)。当NaNO2初始量为10.00μg/mL时,降解产物中含有28.81 10-6的N2O气体,没有NH4+。当NaNO2初始量为50.00μg/mL,在16 h时LCR 6013能够将NaNO2完全降解,14 h时N2O体积百分比含量最高为96.61 10-6;细胞周质间隙中NiR酶活是细胞质中的2.5倍。总之,在MRS体系中,LCR 6013能有效降解亚硝酸盐是源于细胞内亚硝酸盐还原酶NiR的作用;最可能通过NO2-NO N2O N2的途径进行降解,而非铵化作用;降解产物中含有N2O气体。

关键词：干酪乳杆菌鼠李糖亚种亚硝酸盐还原酶定位一氧化二氮反硝化

植物乳杆菌DMDL 9010中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化

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现代食品科技 2015年第6期31卷 150-155 271页

作者：王盼费永涛刘冬梅黄娟吴晖余以刚唐语谦肖性龙华南理工大学轻工与食品学院广东广州510641

研究了植物乳杆菌DMDL 9010亚硝酸盐还原酶基因克隆、表达及表达产物的纯化。首先以植物乳杆菌DMDL 9010的DNA为模板,利用PCR扩增亚硝酸盐还原酶基因,扩增后nir编码序列大小为1638 bp,再将其编码序列克隆到原核表达载体p ET-32a(+)上,... 详细信息

研究了植物乳杆菌DMDL 9010亚硝酸盐还原酶基因克隆、表达及表达产物的纯化。首先以植物乳杆菌DMDL 9010的DNA为模板,利用PCR扩增亚硝酸盐还原酶基因,扩增后nir编码序列大小为1638 bp,再将其编码序列克隆到原核表达载体p ET-32a(+)上,转化到感受态细胞DH5α,成功构建重组质粒p ET-32a(+)-nir。将重组质粒转化到大肠杆菌表达菌株E.coli BL21中,在IPTG浓度为1 mmol/L和诱导温度为25℃的条件下诱导4 h后诱导表达NIR蛋白,经诱导后的工程菌能将50μg/m L的亚硝酸盐降解90%以上,利用亲和层析柱Ni sepharose 6 Fast flow进行纯化得到重组蛋白,该重组蛋白经SDS-PAGE电泳后的分子量约为60 KDa。总之,经由植物乳杆菌DMDL 9010克隆出亚硝酸还原酶基因,并成功构建了重组质粒p ET-32a(+)-nir,利用基因工程方法得到的工程菌能有效降解亚硝酸盐,并能利用亲和层析得到高纯度的NIR。

关键词：亚硝酸盐还原酶植物乳杆菌基因克隆蛋白表达工程菌

木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因的克隆与表达

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吉林大学学报（医学版） 2013年第4期39卷 690-693页

作者：张雪陈萍毕云枫曲宁宁刘琼孙鑫泽吉林农业大学食品科学与工程学院吉林长春130118

目的:对木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因(nir)进行克隆并表达,并测定酶的活力,探讨亚硝酸盐还原酶(NiR)对亚硝酸盐的降解特性。方法:提取木糖氧化产碱菌DNA,根据GenBank公布的nir基因序列设计引物,利用PCR技术扩增nir基因,克隆至表... 详细信息

目的:对木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因(nir)进行克隆并表达,并测定酶的活力,探讨亚硝酸盐还原酶(NiR)对亚硝酸盐的降解特性。方法:提取木糖氧化产碱菌DNA,根据GenBank公布的nir基因序列设计引物,利用PCR技术扩增nir基因,克隆至表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-nir,通过双酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得重组蛋白。将细胞发酵液超声破碎,提取粗酶,测定酶活力。结果:经PCR扩增及测序鉴定得到长度为1 083bp的目的片段;经终浓度0.6mmol.L-1IPTG、30℃诱导表达5h,获得相对分子质量为37 000的重组蛋白;在pH6.5、反应温度35℃时,测得酶活力为51.74U.mL-1。结论:成功克隆nir基因,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,且表达产物有酶活。

关键词：亚硝酸盐还原酶克隆基因表达

植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因在大肠杆菌中重组表达、纯化及酶学性质分析

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食品与发酵工业 2019年第12期45卷 28-34页

作者：张庆芳李美玉王晓辉胡善松于爽迟乃玉大连大学生命科学与技术学院辽宁大连116622 辽宁省海洋微生物工程技术研究中心辽宁大连116622

构建植物乳杆菌(Lactobacillus sp.LMY-20)中亚硝酸盐还原酶(nitrite reductase,NiR)的重组大肠杆菌、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质分析。将人工合成的密码子优化的亚硝酸盐还原酶基因(nir)亚克隆至载体pET28a(+),构建重组表达载体pE... 详细信息

构建植物乳杆菌(Lactobacillus sp.LMY-20)中亚硝酸盐还原酶(nitrite reductase,NiR)的重组大肠杆菌、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质分析。将人工合成的密码子优化的亚硝酸盐还原酶基因(nir)亚克隆至载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a(+)-nir并转化到E.coli BL21(DE3)中实现表达。包涵体复性,利用镍柱亲和层析纯化重组亚硝酸盐还原酶。成功构建产亚硝酸盐还原酶的重组大肠杆菌并纯化了重组亚硝酸盐还原酶,纯化后经变性聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析在45 kDa附近出现明显条带。Na 2S 2O 4-MV法测得酶活为2 332.72 U/L,最适pH值为6.5,最适作用温度为37℃,在4~70℃下孵育40 min后可保持超过85%的活力。该研究实现植物乳杆菌来源的NiR在大肠杆菌中的重组表达、纯化及其酶学性质分析,重组NiR具有较好的温度适应性和稳定性,为其在农业、食品及医药等领域应用奠定基础。

关键词：植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶重组表达纯化酶学性质