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粉尘螨Ⅰ类变应原的cDNA克隆测序及亚克隆

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第3期22卷 173-175页

作者：杨庆贵李朝品安徽理工大学医学院淮南232001

目的　获得粉尘螨I类变应原 (Derf 1)cDNA克隆及亚克隆 ,并进行测序。　方法　设计合成引物 ,从粉尘螨体内提取RNA ,经逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)获得cDNA ,PCR扩增目的片段经纯化回收后克隆至pMD 18T ,转化大肠埃希菌 (E .coli)JM10... 详细信息

目的　获得粉尘螨I类变应原 (Derf 1)cDNA克隆及亚克隆 ,并进行测序。　方法　设计合成引物 ,从粉尘螨体内提取RNA ,经逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)获得cDNA ,PCR扩增目的片段经纯化回收后克隆至pMD 18T ,转化大肠埃希菌 (E .coli)JM10 9,经PCR初筛挑选阳性克隆并测序 ,将PCR筛检阳性重组子及pET 3 2a( +)表达载体分别用BamHⅠ和SacⅠ双酶切 ,连接转化至E .coli感受态细胞JM10 9中过夜培养 ,挑选菌落进行酶切鉴定。　结果　从粉尘螨基因组RNA中扩增出Derf 1基因 ,获得pET 3 2a( +) Derf 1亚克隆 ,酶切产物的大小与预期相符。　结论　对粉尘螨Derf 1基因进行体外扩增并获得pET 3 2a( +) Derf 1亚克隆。

关键词：粉尘螨 Ⅰ类变应原 cDNA克隆亚克隆基因序列

日本血吸虫CAI基因的亚克隆表达与免疫保护效果研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第6期21卷 353-356页

作者：罗秀菊袁仕善易新元曾宪芳张顺科唐连飞蔡春章洁 Larry McReynolds 中南大学湘雅医学院寄生虫教研室长沙410078 New England Biolabs

目的　克隆和表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)CAI基因 ,并对表达产物进行免疫保护效果测定 ,评价其作为血吸虫疫苗候选分子的潜能。　方法　将SjCAI基因亚克隆至pGEX 5X 3载体 ,转化入感受态大肠杆菌ER2 56 6 ,在异丙基 β... 详细信息

目的　克隆和表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)CAI基因 ,并对表达产物进行免疫保护效果测定 ,评价其作为血吸虫疫苗候选分子的潜能。　方法　将SjCAI基因亚克隆至pGEX 5X 3载体 ,转化入感受态大肠杆菌ER2 56 6 ,在异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导下进行表达 ,用表达产物免疫小鼠 ,并设分别注射等体积的弗氏完全佐剂和PBS的两组对照组 ,观察免疫保护效果。　结果　在IPTG诱导下 ,表达载体中的SjGST基因与重组的SjCAI基因在大肠杆菌中获得了高效融合表达 ,将其免疫小鼠 ,诱导产生了 2 9.87%的减虫率和 6 3.71 %的减卵率。　结论　SjCAI基因亚克隆至pGEX 5X 3载体后可在大肠杆菌中高效表达。

关键词：日本血吸虫 CAI基因免疫保护基因表达亚克隆

肿瘤细胞亚克隆进化模式和影响因素的研究进展

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肿瘤 2018年第3期38卷 278-282页

作者：许鹏燕韩惠娟初众康欣梅哈尔滨医科大学附属肿瘤医院肿瘤内科黑龙江哈尔滨150081 中国人民解放军211医院肿瘤内科黑龙江哈尔滨150081

肿瘤细胞具有遗传不稳定性,这种不稳定性最终导致不同肿瘤细胞的产生,即具有不同突变和表现的亚克隆,而不同亚克隆的共存机制及生物学后果极为复杂。肿瘤细胞亚克隆可以在不同的选择压力下进行"线性"或"分支"进化,其中肿瘤微环境即为重... 详细信息

肿瘤细胞具有遗传不稳定性,这种不稳定性最终导致不同肿瘤细胞的产生,即具有不同突变和表现的亚克隆,而不同亚克隆的共存机制及生物学后果极为复杂。肿瘤细胞亚克隆可以在不同的选择压力下进行"线性"或"分支"进化,其中肿瘤微环境即为重要的选择压力,其不仅影响着肿瘤亚克隆的进化,而且更广泛地影响着亚克隆的生长及它们的相互作用。肿瘤转移是患者预后差的重要原因,原始肿瘤细胞中的低频亚克隆在转移中扮演着重要的角色,肿瘤细胞中怎样的微妙变化使得低频亚克隆"活化"从而发生转移成为研究的重点。本综述将就肿瘤细胞的亚克隆进化模式及亚克隆的影响因素进行重点介绍,以期通过对亚克隆的研究和了解,指导临床个体化治疗。

关键词：肿瘤亚克隆肿瘤微环境肿瘤转移

拟南芥抗病基因FLS2和LysM的亚克隆及其在番茄中的表达

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园艺学报 2009年第11期36卷 1635-1642页

作者：陈武杨玉婷李颖黄三文黎定军湖南农业大学生物安全科技学院长沙410128 中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081

从拟南芥JAtYTAC基因组文库中完整地亚克隆了FLS2和LysM两个抗病基因,亚克隆的DNA片段中分别包含各自的启动子、内含子和终止子。利用农杆菌介导的方法分别将这两个基因转化番茄品种‘Moneymaker’,转基因植株经PCR初步筛选后再分别提取... 详细信息

从拟南芥JAtYTAC基因组文库中完整地亚克隆了FLS2和LysM两个抗病基因,亚克隆的DNA片段中分别包含各自的启动子、内含子和终止子。利用农杆菌介导的方法分别将这两个基因转化番茄品种‘Moneymaker’,转基因植株经PCR初步筛选后再分别提取总RNA进行RT-PCR,以验证其是否在‘Moneymaker’中表达。试验结果表明,FLS2和LysM均能成功地在‘Moneymaker’中表达,说明番茄的转录系统不仅能识别这两个抗病基因的启动子并起始转录,还能正确识别并剪切这两个基因的外显子和内含子。据此推测,拟南芥和番茄这两个远缘物种的转录机制存在相对保守的成份,这为探索在这两个物种间R基因的功能及其下游信号通路的保守性提供了有价值的参考。

关键词：拟南芥番茄 FLS2 LysM 亚克隆表达

CILP-MBP基因重组蛋白的亚克隆构建及温度可溶性诱生表达

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中国免疫学杂志 2002年第5期18卷 309-313页

作者：姚振宇吕昌龙于秉治曹雅明中国医科大学沈阳110001

目的：构建Cartilage Intermediate Layer Protein（CILP)基因组后半部分（C2)亚克隆可溶性重组蛋白表达系统。方法：应用基因克隆技术，提取C2的3个首尾互相重叠的小片段的目的基因（C2F1，C2F2，C2F3），将其重新克隆到pMAL-eHis表达... 详细信息

目的：构建Cartilage Intermediate Layer Protein（CILP)基因组后半部分（C2)亚克隆可溶性重组蛋白表达系统。方法：应用基因克隆技术，提取C2的3个首尾互相重叠的小片段的目的基因（C2F1，C2F2，C2F3），将其重新克隆到pMAL-eHis表达载体中，分别命名为C2F1，C2F2，C2F3-MBP，并尝试在用化学诱导（IPTC）的同时，用不同的温度（22℃，30℃，37℃）来诱导重组基因表达可溶性重组蛋白。结果：重新构建表达载体后，经过异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）化学诱导，在各种诱导温度下重组载体均可表达目的基因蛋白，但在30℃下有大量的可溶性蛋白表达，而在37℃时，重组蛋白主要以不溶性包涵体形式表达，22℃时蛋白不能被充分诱生表达。基因测序和 SDS-PAGE，Western Blot结果均表明这3种重组蛋白含有目的基因和羧基末端的6个组氨酸残基，从而为下一步的亲合层析提供了便利条件。结论：成功构建了C2部分的3个小片段的可溶性MBP融合蛋白表达载体，从而为进一步研究CILP，功能提供了重要的工具。

关键词： CILP 重组蛋白亚克隆 CILP-MBP 基因表达温度可溶性类风湿性关节炎

卫氏并殖吸虫基因片段的亚克隆及其表达的研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2002年第5期22卷 357-359页

作者：凌家俭侯敏刘剑南章子豪张耀娟南京医科大学病原生物学与免疫学系江苏南京210029

目的:获得诊断肺吸虫病的特异性重组抗原,以了解其作为免疫诊断抗原的价值。方法:将免疫筛选获得的卫氏并殖吸虫基因克隆双酶切,所得cDNA片段亚克隆入表达载体pRESETB,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以聚丙烯凝胶电泳(SDS-P... 详细信息

目的:获得诊断肺吸虫病的特异性重组抗原,以了解其作为免疫诊断抗原的价值。方法:将免疫筛选获得的卫氏并殖吸虫基因克隆双酶切,所得cDNA片段亚克隆入表达载体pRESETB,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Westernblotting)对表达产物进行鉴定。结果:成功地将文库中2个大小不同的卫氏并殖吸虫基因片段连接到载体中。其中Pw-2重组子特异性表达产物是分子质量约为32ku的蛋白带,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异性识别。结论:成功构建了编码卫氏并殖吸虫特异性抗原的重组克隆Pw-2。

关键词：卫氏并殖吸虫重组抗原亚克隆 cDNA文库

泡桐基因文库的构建及actin基因同源顺序的亚克隆

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林业科学研究 1990年第4期3卷 345-350页

作者：孙威孔繁瑞林友刚李继耕中国科学院遗传研究所

以λ系列EMBL3DNA为载体，LE392为宿主菌，建立了木本植物毛泡桐（Paulownia tomentosa (Thunb)Steudel)丛枝病抗病品系C161基因文库，命名为[λE3/PTS（Bam-Sau)]。其包装效价达到1．1×10^6pfu,重组率为98％。用动物肌动蛋白（actin)... 详细信息

以λ系列EMBL3DNA为载体，LE392为宿主菌，建立了木本植物毛泡桐（Paulownia tomentosa (Thunb)Steudel)丛枝病抗病品系C161基因文库，命名为[λE3/PTS（Bam-Sau)]。其包装效价达到1．1×10^6pfu,重组率为98％。用动物肌动蛋白（actin)基因为探针，从这一基因库中筛选出3．9Kb的泡桐DNA同源顺序进行亚克隆。所得结果表明：动物actin基因在木本植物基因组中存在一定的同源性。

关键词：泡桐基因文库同源顺序亚克隆动物肌动蛋白抗病基因抗病育种

不同表型的人宫颈癌细胞亚克隆株的基因表达谱

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西安交通大学学报（医学版） 2004年第6期25卷 562-566页

作者：陈葳李旭杨玉琮程小丽西安交通大学第一医院检验医学中心陕西西安710061

目的　采用基因芯片技术分析同一人宫颈癌细胞株来源 ,锚着依赖性不同的两个亚克隆细胞株的侵袭相关基因表达。方法　采用有限稀释法建立CS12 13细胞的CS0 3和CS0 7亚克隆细胞株 ,检测其在软琼脂中的集落形成率 ,分别用流式细胞术和免... 详细信息

目的　采用基因芯片技术分析同一人宫颈癌细胞株来源 ,锚着依赖性不同的两个亚克隆细胞株的侵袭相关基因表达。方法　采用有限稀释法建立CS12 13细胞的CS0 3和CS0 7亚克隆细胞株 ,检测其在软琼脂中的集落形成率 ,分别用流式细胞术和免疫组化法观察细胞黏附分子CD4 4和E cadherin、Fibronetin的表达 ,并将CS0 3和CS0 7细胞的总RNA经逆转录获得的cDNA作为探针 ,与含 10 11个与细胞信号转导和细胞膜受体相关基因表达谱芯片杂交 ,信号用ScanArray 30 0 0扫描分析。结果　CS0 3和CS0 7细胞的集落形成率分别是 0和 38.5 % ,CD4 4表达分别是 35 .1%和 13.7% ;两者的基因表达谱差异明显 ,CS0 3细胞中表达上调的基因为 12个 ,CS0 7细胞中有 2 1个基因表达增加 ,其中一些与细胞增生、迁移、凋亡 ,细胞间信号传导和肿瘤转移相关 ,包括p34cdc2 、转化生长因子 β刺激蛋白 (TSC2 2 )、纤维蛋白酶原活性因子抑制剂 (PAI 1)和桥粒相关蛋白 (PININ)等。结论　同一来源的人宫颈癌细胞株中有多个差异表达基因 ,它们参与人宫颈癌细胞的表型特征 ,可能影响肿瘤的进展。

关键词：官颈癌亚克隆基因芯片

高低不同转移特性骨肉瘤亚克隆细胞系的分离与鉴定

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中华实验外科杂志 2005年第2期22卷 156-158页

作者：石晓兵陈安民蔡贤华华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科武汉430030

目的　建立高低不同转移特性人成骨肉瘤MG 63亚克隆细胞系 ,为研究成骨肉瘤转移机制提供较好的实验模型。方法　通过体外培养和裸鼠体内移植 ,初步分离并建立了 2个亚克隆细胞系A1和A2 ,并利用细胞电泳、细胞增殖、琼脂克隆形成、体外... 详细信息

目的　建立高低不同转移特性人成骨肉瘤MG 63亚克隆细胞系 ,为研究成骨肉瘤转移机制提供较好的实验模型。方法　通过体外培养和裸鼠体内移植 ,初步分离并建立了 2个亚克隆细胞系A1和A2 ,并利用细胞电泳、细胞增殖、琼脂克隆形成、体外侵袭实验、裸鼠体内异位和原位移植对两者的生物学特性进行比较、分析和鉴定。结果　A1和A2的电泳率、琼脂克隆形成能力、体外侵袭能力、自发性肺转移率分别为 (1.0 8± 0 .12 ) μm ,(0 .64± 0 .13 ) μm ;2 1.0± 2 .3 ,9.5±2 .9;186.0± 16.7,84.0± 12 .6;10 0 .0 0 % ,6.67% ,A1均明显高于A2 ,两者的差异有统计学意义(P 亚克隆细胞系的建立 ,能为成骨肉瘤转移机制的研究提供较理想的实验模型。

关键词：成骨肉瘤细胞系亚克隆体外侵袭体内裸鼠实验模型电泳率琼脂形成能力