检索结果-南通市图书馆

维普期刊数据库博看期刊

血清4型禽腺病毒Hexon-Penton串联蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2019年第7期41卷 20-24页

作者：庞洪泽吴同垒李蕴玉李佩国闫艳娟河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066604

为了获得血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体蛋白(Hexon)和五邻体蛋白(Penton)的串联蛋白及其多克隆抗体血清,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出Hexon基因和Penton基因,使用重叠PCR将Hexon基因和Penton基因串联,得到Hexon-Penton(... 详细信息

为了获得血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体蛋白(Hexon)和五邻体蛋白(Penton)的串联蛋白及其多克隆抗体血清,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出Hexon基因和Penton基因,使用重叠PCR将Hexon基因和Penton基因串联,得到Hexon-Penton(HP)串联基因,将HP基因导入表达载体pET32a(+),获得重组质粒pET32a-HP,将其转化表达菌株BL21经IPTG诱导表达,得到HP原核蛋白,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,HP原核蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清。SDS-PAGE分析显示,HP原核蛋白分子质量约为108 ku,Western Blot结果显示,HP原核蛋白可与His标签抗体和多克隆抗体血清特异性识别,说明HP原核蛋白具有良好的免疫原性,为进一步建立FAdV-4的血清学检测方法奠定了基础。

关键词：血清4型禽腺病毒六邻体蛋白五邻体蛋白多克隆抗体血清

维普期刊数据库

血清4型禽腺病毒hexon-penton串联蛋白在293T细胞中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2020年第6期40卷 1109-1113页

作者：庞洪泽吴同垒李蕴玉李佩国闫艳娟河北科技师范学院动物科技学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066604

为了获得293T细胞表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体(hexon)和五邻体(penton)的串联蛋白,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出hexon基因和penton基因,其大小分别为1014,900 bp。使用重叠PCR将hexon基因和penton基因串联,得到h... 详细信息

为了获得293T细胞表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体(hexon)和五邻体(penton)的串联蛋白,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出hexon基因和penton基因,其大小分别为1014,900 bp。使用重叠PCR将hexon基因和penton基因串联,得到hexon-penton(HP)串联基因。将HP基因导入表达质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-HP,转染293T细胞,获得HP真核蛋白。经间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定结果表明,HP真核蛋白可与多抗血清发生特异性反应,蛋白质相对分子质量约为90000,HP串联蛋白在293T细胞中获得了良好表达。研究结果表明成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-HP,并在真核细胞中获得表达,为进一步研制FAdV-4核酸疫苗奠定基础。

关键词：血清4型禽腺病毒六邻体蛋白五邻体蛋白真核蛋白

维普期刊数据库

禽腺病毒4型核酸疫苗的构建及免疫效果初步评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

禽腺病毒4型核酸疫苗的构建及免疫效果初步评价

作者：庞洪泽河北科技师范学院

学位级别：硕士

禽腺病毒是一种对家禽危害极大的病原体,其中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)主要引起禽的心包积水-包涵体肝炎综合征。该病发病快、死亡率高,目前预防该病主要靠灭活苗和弱毒苗,但是这两种疫苗存在很多的缺点,所以研发一种安全、高效的新型核... 详细信息

禽腺病毒是一种对家禽危害极大的病原体,其中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)主要引起禽的心包积水-包涵体肝炎综合征。该病发病快、死亡率高,目前预防该病主要靠灭活苗和弱毒苗,但是这两种疫苗存在很多的缺点,所以研发一种安全、高效的新型核酸疫苗对该病的防控很有帮助。本研究对其结构蛋白Hexon和Penton进行了串联,分别进行了原核表达和真核表达,获得了Hexon-Penton串联蛋白,对其免疫效果进行了初步研究,其结果如下:1.禽腺病毒血清4型Hexon-Penton串联蛋白的原核表达及多抗制备本研究根据NCBI GenBank中公布的Hexon基因和Penton基因序列设计引物,克隆出Hexon基因和Penton基因并串联,得到Hexon-Penton(HP)串联基因,将HP基因导入表达载体pET32a(+),获得重组质粒pET32a-HP,将其转化表达菌株BL21经IPTG诱导表达,得到分子质量约为108kDa的HP原核蛋白,HP原核蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠制备多抗血清,说明HP原核蛋白具有良好的免疫原性,为进一步建立FAdV-4的血清学检测方法奠定了基础。2.禽腺病毒血清4型Hexon-Penton串联蛋白的真核表达与分析为了获得293T细胞表达的FAdV-4 HP串联蛋白,本研究将FAdV-4 HP串联基因导入表达质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-HP,转染293T细胞,获得HP真核蛋白,经间接免疫荧光试验(IFA)和Western Blot鉴定。真核蛋白免疫印迹分析和IFA鉴定表明,HP真核蛋白可与多抗血清发生特异性反应,蛋白质分子质量约为90kDa,HP真核蛋白在293T细胞中获得了良好表达。本研究构建了重组质粒pcDNA3.1-HP,并在真核细胞中获得表达,为进一步研制FAdV-4核酸疫苗奠定了基础。3.核酸疫苗免疫效果初步研究本研究制备了FAdV-4 HP串联基因核酸疫苗,使用不同的剂量免疫雏鸡。对雏鸡产生的抗体进行了免疫原性与效价检测,结果表明,该疫苗免疫雏鸡后在雏鸡体内传产生了特异性抗体,抗体水平在免疫后21天达到最高,免疫剂量为100μg效果较好。

关键词：禽腺病毒血清4型六邻体蛋白五邻体蛋白原核表达真核表达核酸疫苗免疫效果

EDSV京911株五邻体优势抗原表位的筛选及鉴定

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

EDSV京911株五邻体优势抗原表位的筛选及鉴定

作者：王晓东东北农业大学

学位级别：硕士

减蛋综合征（Egg Drop Syndrome, EDS-76）,又名鸭腺病毒Ⅰ型（DAV Ⅰ）。该病是由减蛋综合征病毒（EDSV）引起的一种以产蛋鸡产畸形蛋、薄壳或无壳蛋,产蛋率严重下降为主要特征的传染病。1976年首先在荷兰发生,以后在西欧国家相继发生... 详细信息

减蛋综合征（Egg Drop Syndrome, EDS-76）,又名鸭腺病毒Ⅰ型（DAV Ⅰ）。该病是由减蛋综合征病毒（EDSV）引起的一种以产蛋鸡产畸形蛋、薄壳或无壳蛋,产蛋率严重下降为主要特征的传染病。1976年首先在荷兰发生,以后在西欧国家相继发生报道,乃至在世界范围内许多国家都有发生,给养禽业带来了巨大的经济损失。五邻体蛋白（Penton）是减蛋综合征病毒主要的结构蛋白之一,五邻体蛋白具有良好的免疫原性和抗原性,并且含有中和抗原表位,其与细胞表面的整联蛋白作用,有助于腺病毒对宿主细胞的吸附结合、侵入和内化。本研究将携带五邻体基因的重组质粒pET-30a-Penton作为PCR扩增模板,利用基因片段重叠表达技术对EDSV五邻体蛋白的抗原表位进行筛选,为EDSV主要抗原结构的深入研究、亚单位疫苗及诊断试剂的研制提供物质基础。本研究为了鉴定EDSV五邻体蛋白的优势抗原表位,制备了鸭抗EDSV阳性血清和鹅抗EDSV血清,可用作血清学诊断试剂,并设计了6个覆盖五邻体结构蛋白的多肽片段,短肽长为84-97aa,相互重叠14-24aa,进行融合表达,利用Ni-NTA对蛋白进行纯化,经Western blot分析表明PA（1-87aa）能够被鸭抗EDSV阳性血清所识别。根据以上试验结果,进一步设计了4个覆盖PA（1-87aa）的多肽片段,这些短肽长为29-33aa,相互重叠12-13aa,进行了第二轮的抗原表位筛选,结果显示PA-1（1-33aa）、PA-2（21-49aa）、PA-3（37-68aa）具有抗原性,将3个抗原优势区合并为一段进行了第三轮筛选,结果显示PA-H-1（1-17aa）、PA-H-4（22-39aa）、PA-H-5（30-47aa）、PA-H-6（38-53aa）、PA-H-8（51-68aa）具有抗原性,其中PA-H-1和PA-H-8抗原性最强,取这两个抗原性最强的短肽进行了第四轮筛选,设计了6个覆盖PA-H-1和PA-H-8的短肽片段,各合成一对寡聚核酸片段,进行融合表达及纯化,经Western blot分析表明PA-H-1.1（1-10aa）、PA-H-1.2（4-13aa）、PA-H-8.1（51-61aa）具有良好的抗原性。最后,为了精确定位EDSV五邻体蛋白的抗原表位进行了第五轮和第六轮的筛选,对Western blot结果加以分析,最终确定EDSV五邻体蛋白的抗原表位区位于N端的M1ESFVPPPR9、V5PPPRVF11和H53SDYFT58处。其中最靠近N段的两个抗原表位有部分氨基酸重合。

关键词：减蛋综合征病毒五邻体蛋白优势抗原表位筛选

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基因测序在人类腺病毒分型中的应用

国际流行病学传染病学杂志 2013年第5期40卷 353-357页

作者：王旌朱剑锋童晓维上海市眼病防治中心眼科 200040 上海市眼病防治中心防治科 200040

人类腺病毒可引起呼吸道、胃肠道和眼部的感染,不同类型的腺病毒引起的疾病类型及表现不尽相同.因此,腺病毒的分型具有重要的临床研究价值.在基因学上,编码六邻体蛋白,五邻体蛋白和纤维蛋白的区域是腺病毒基因组中变异最大的区域,通过... 详细信息

人类腺病毒可引起呼吸道、胃肠道和眼部的感染,不同类型的腺病毒引起的疾病类型及表现不尽相同.因此,腺病毒的分型具有重要的临床研究价值.在基因学上,编码六邻体蛋白,五邻体蛋白和纤维蛋白的区域是腺病毒基因组中变异最大的区域,通过对其编码区的测序,尤其是六邻体蛋白编码区的测序,是快速可靠的确定腺病毒类型的重要方法之一.此文主要对基因测序在腺病毒分型中的优势、应用现状,在腺病毒突变重组、种系发生学中的鉴定检测等作一综述.

关键词：腺病毒,人基因测序六邻体蛋白五邻体蛋白纤维蛋白

维普期刊数据库

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人腺病毒分子分型方法及其意义

医学综述 2023年第22期29卷 4861-4866页

作者：李竹雲杨泽潘丽峰大理大学公共卫生学院云南大理671000 上海市浦东新区疾病预防控制中心上海200136 复旦大学浦东预防医学研究院上海200136

人腺病毒(HAdV)是一种重要的病原体,其分子分型对于了解HAdV的生物学、流行病学和种属结构均至关重要。目前传统的血清学方法已确定了1~51种血清型,但该方法存在一定局限性。新型的基因分型方法主要根据五邻体蛋白、六邻体蛋白和纤维蛋... 详细信息

人腺病毒(HAdV)是一种重要的病原体,其分子分型对于了解HAdV的生物学、流行病学和种属结构均至关重要。目前传统的血清学方法已确定了1~51种血清型,但该方法存在一定局限性。新型的基因分型方法主要根据五邻体蛋白、六邻体蛋白和纤维蛋白的序列分析确定了52~113型,其他新型HAdV的确定也主要依据基因组序列分析。因此,未来全面了解HAdV的分子分型方法及作用机制,可以为相关疾病的治疗提供新思路。

关键词：人腺病毒分子分型五邻体蛋白六邻体蛋白纤维蛋白