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小球藻Chlorella variabilis NC64A二酰甘油酰基转移酶基因的克隆表达与功能研究

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北京大学学报（自然科学版） 2016年第2期52卷 187-192页

作者：杨金水高全秀李兆胜邢冠岚袁红莉中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193

为了揭示二酰甘油酰基转移酶(DGAT)在小球藻油脂合成过程中的作用,对单细胞小球藻Chlorella variabilis NC64A的二酰甘油酰基转移酶进行原核克隆表达及功能初步研究。结果表明,其编码序列为894bp,编码297个氨基酸,表达蛋白的表观分子量... 详细信息

为了揭示二酰甘油酰基转移酶(DGAT)在小球藻油脂合成过程中的作用,对单细胞小球藻Chlorella variabilis NC64A的二酰甘油酰基转移酶进行原核克隆表达及功能初步研究。结果表明,其编码序列为894bp,编码297个氨基酸,表达蛋白的表观分子量为33 k Da,p I 9.48。保守结构域分析表明,该蛋白属于Lysophospholipid acyltransferases(LPLATs)超家族,具有二酰甘油酰基转移酶活性,序列位点H68,L71,F76,R94,I97和GAA(144?146)组成特定的酰基受体结合口袋,能够结合酰基?酰基载体蛋白(ACP)或者酰基辅酶A上的酰基,催化三酰甘油合成的最后一步。表达蛋白与Ss PDAT和At PDAT的序列相似性分别为32%和24%,表明该蛋白可能具有磷脂酰甘油酰基转移酶(PDAT)活性,能利用磷脂上的酰基合成三酰甘油。因此,采用薄层层析方法以L-α-磷脂酰胆碱和1,2-二油酰-sn-甘油为底物,检测到其确实具有PDAT活性,表明限氮条件下NC64A中DGAT的PDAT活性可能促进了膜脂降解耦合三酰甘油的合成。

关键词： Chlorella variabilis 三酰甘油二酰甘油酰基转移酶磷脂酰甘油酰基转移酶克隆表达

池棕果实中果皮二酰甘油酰基转移酶（DGAT）基因的克隆及功能分析

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池棕果实中果皮二酰甘油酰基转移酶（DGAT）基因的克隆及功能分析

作者：靳远航海南大学

学位级别：硕士

油棕(Elaeis guineensis Jacq.)是世界上产量最高的油料植物之一,因其果实含油量高以及单位面积产油量大而被誉为“世界油王”(雷新涛,曹红星etal.2012)。作为最具特色的热带经济作物之一,其生产的棕榈油主要来源于油棕果实的中果皮,占... 详细信息

油棕(Elaeis guineensis Jacq.)是世界上产量最高的油料植物之一,因其果实含油量高以及单位面积产油量大而被誉为“世界油王”(雷新涛,曹红星etal.2012)。作为最具特色的热带经济作物之一,其生产的棕榈油主要来源于油棕果实的中果皮,占干重的90%,为目前所报道的含油量最高的植物组织类型。但目前,有关植物油脂积累和代谢的研究中几乎没有涉及到除种子之外的组织材料类型。三酰甘油(Triacylglycero,TAG)是大多数油料作物油脂的积累和储存形式,也是支持幼苗发育的重要碳源。在植物的TAG合成过程中,二酰甘油酰基转移酶(Diacylglycerolacyltransferase,DGAT)负责催化二酰甘油(Diacylglycerol,DAG)与脂肪酸酰基反应形成TAG的过程,是TAG合成途径中的最后一步,也是该途径唯一限速酶。为了深入了解油棕油脂积累机制,两种参与TAG合成的关键酶1型和2型二酰基甘油酰基转移酶(DGAT1、DGAT2)从油棕中克隆出来。其主要研究结果如下:1.在油棕果实发育的第二和第四时期,油棕1型二酰基甘油酰基转移酶(EgDGAT1)在中果皮中高度表达。与此同时在最后两个时期(第四和第五时期),油棕2型二酰基甘油酰基转移酶(EgDGAT2)在中果皮中高度表达,而在油棕果实成熟过程中油脂积累率逐渐升高。2.从油棕果实中果皮组织中提取RNA,通过5’RACE得到EgDGAT2全长序列。PCR扩增得到EgAGDT1和EgDGAT2基因,大小分别为1710bp和999bp。生物信息学分析结果表明,EgDGAT1基因在C-末端有个保守结构域,且属于DGAT家族。EgDGAT2基因含有两个预测的跨膜结构域,它们相邻且位于N-末端附近。此外,它还具有DGAT2的保守结构域和功能结构域。氨基酸序列分析也表明EgDGAT2编码的蛋白属于DGAT2家族。同时系统进化发育树中EgDGAT2与其他物种中的DGAT2尤其是AtDGAT2属于同一分支的结果也从侧面验证了该假设。3.将EgDGAT1与EgDGAT2基因分别与pYES2载体连接构建酵母表达载体,并将其转入缺陷型酵母H1246中以验证EgDGAT1及EgDGAT2基因在酵母中的体内活性及其功能。结果表明,两种基因均能够恢复H1246酵母合成TAG的功能,并偏好合成棕榈油酸(C16:1)和油酸(C18:1)。4.为了进一步探究EgDGAT2在植物中的体内活性,将EgDGAT2基因与pCAMBIA1300s-napin载体连接构建植物表达载体,通过蘸花法转入拟南芥。荧光定量检测筛选出3株表达量程梯度的纯合拟南芥,收集种子后对其油脂含量及脂肪酸组分进行检测。结果表明,EgDGAT2在拟南芥种子中的特异性过表达提高了种子TAG中多不饱和脂肪酸亚油酸(C18:2)和亚麻酸(C18:3)(各6mol%)的含量。相应地,硬脂酸(C18:0)脂肪酸的比例则降低。与此同时,花生酸(C20:0)的含量也有减少。综上所述,EgDGAT1及EgDGAT2基因均属于DGAT家族,且在突变酵母H1246中的异源表达恢复了具有对不饱和脂肪酸棕桐油酸(C16:1)和油酸(C18:1)的底物偏好的TAG生物合成。此外,EgDGAT2在拟南芥种子中的特异性过表达也显示出对多饱和脂肪酸的偏好性。这些结果为理解油棕中果皮中EgDGAT2的体内活性提供了新的见解,这对于不饱和脂肪酸生产的代谢增强是重要的。

关键词：油棕二酰甘油酰基转移酶 H1246 油脂积累

高山被孢霉中二酰甘油酰基转移酶的筛选鉴定及功能探究

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高山被孢霉中二酰甘油酰基转移酶的筛选鉴定及功能探究

作者：曹珺江南大学

学位级别：硕士

多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)具有多种重要的生物学功能,动、植物中的PUFAs以18碳链长以下的脂肪酸为主,而20碳链长以上的脂肪酸可由某些产油微生物提供。高山被孢霉(Mortierella alpina)是一种脂质含量可达自身... 详细信息

多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)具有多种重要的生物学功能,动、植物中的PUFAs以18碳链长以下的脂肪酸为主,而20碳链长以上的脂肪酸可由某些产油微生物提供。高山被孢霉(Mortierella alpina)是一种脂质含量可达自身干重50%以上的产油丝状真菌,能合成多种高附加值的PUFAs,目前已经是工业化生产花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)的主要菌株。二酰甘油酰基转移酶是三酰甘油(Triacylglycerol,TAG)合成途径中的关键限速酶,在不同物种中对其进行遗传改造发现其能显著影响TAG含量和组成。因为高山被孢霉中脂肪酸主要以TAG形式积累且AA含量高达总脂肪酸的30%0%,其二酰甘油酰基转移酶可能在这方面起到重要作用。本课题以高山被孢霉中二酰甘油酰基转移酶为研究对象,筛选高山被孢霉中的二酰甘油酰基转移酶编码基因,在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中异源表达进行功能鉴定,将能增强脂质积累的基因在高山被孢霉中进行过表达,探索其对高山被孢霉脂质积累的影响,为提高单细胞油脂产量和质量提供理论基础。本文主要研究结果如下:1、通过基因同源性比对分析发现高山被孢霉中含有3种二酰甘油酰基转移酶,分别为3个酰基辅酶A:二酰甘油酰基转移酶1(DGAT1;命名MaDGAT1A、MaDGAT1B、MaDGAT1C)、2个酰基辅酶A:二酰甘油酰基转移酶2(DGAT2;命名MaDGAT2A、MaDGAT2B)和1个磷脂:二酰甘油酰基转移酶(PDAT;命名MaPDAT)。对应6个候选编码基因(Madgat1a、Madgat1b、Madgat1c、Madgat2a、Madgat2b、Mapdat)。2、成功构建在酿酒酵母中分别异源表达Madgat1a、Madgat1b、Madgat1c、Madgat2a、Madgat2b、Mapdat的重组菌,且目的蛋白能正确表达。通过薄层色谱与气相-质谱联用法测定酿酒酵母重组菌中TAG和脂质的脂肪酸组成及含量,发现异源表达MaDGAT1A、MaDGAT1B、MaDGAT2A的酿酒酵母中TAG的含量分别提高7.23、12.09、4.91倍,对应总脂质含量提高了2.37、1.94、1.65倍,而MaDGAT2B、MaDGAT1C和MaPDAT则无显著效果,表明高山被孢霉来源的DGAT类二酰甘油酰基转移酶在提高脂质积累方面有显著作用。3、分析在提高脂质积累方面有显著作用的MaDGAT1A/1B/2A/2B对PUFAs的选择性。通过外加不同浓度(0.1 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L)的AA,发现MaDGAT1类型和MaDGAT2类型均能提高重组菌对AA的催化效率,且MaDGAT1类型作用效果更显著。同时发现外加不同浓度的AA会影响各酿酒酵母重组菌中TAG的积累。另一方面,通过外源添加亚油酸(Linoleic acid,LA,C18:2)和花生四烯酸(AA,C20:4),探究MaDGAT1A/1B/2A/2B对不同链长PUFAs底物的选择性,发现同时添加C18:2和C20:4可更明显地促进对应蛋白质的催化活性。与对照组相比,异源表达MaDGAT1A/1B/2A/2B对C20:4的催化效率提高倍数均大于对C18:2的,推测高山被孢霉来源的DGAT类二酰甘油酰基转移酶对20碳链长PUFAs的偏好性强于18碳链长PUFAs。4、在高山被孢霉中过表达对提高脂质积累有显著作用的MaDGAT1A/1B/2A/2B,研究结果表明,与对照菌株相比,过表达MaDGAT1B的重组菌可促进高山被孢霉脂质积累,最多使脂质积累量提高18.43%。过表达MaDGAT2A/2B的重组菌能显著提升PUFAs中AA和LA的成分含量,最多使AA和LA含量分别提高22.32%、20.40%,以上结果说明MaDGAT1和MaDGAT2对高山被孢霉脂质和某些特定PUFAs的积累均有一定的促进作用。

关键词：高山被孢霉二酰甘油酰基转移酶三酰甘油异源表达花生四烯酸

产油酵母圆红冬孢酵母二酰甘油酰基转移酶的鉴定和性质研究

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产油酵母圆红冬孢酵母二酰甘油酰基转移酶的鉴定和性质研究

作者：王珍江南大学

学位级别：硕士

微生物油脂(Microbial oils)可以作为功能性多不饱和脂肪酸(PUFAs)的来源和生物柴油原料而备受关注,其合成机制是众多研究领域中最重要的部分。中性脂是微生物油脂的主要组成部分,如甘油三酯(TAG)和甘油二酯(DAG)组成,可占到油脂组成的... 详细信息

微生物油脂(Microbial oils)可以作为功能性多不饱和脂肪酸(PUFAs)的来源和生物柴油原料而备受关注,其合成机制是众多研究领域中最重要的部分。中性脂是微生物油脂的主要组成部分,如甘油三酯(TAG)和甘油二酯(DAG)组成,可占到油脂组成的90%以上。一般来说,细胞内油脂合成主要是通过G3P通路(Glycerol-3-phosphate pathway)来完成的,其中二酰甘油酰基转移酶(diacylgycerol acyltransferase,DGAT)将甘油二酯转变为甘油三酯,DGAT是这一代谢途径中最为关键的一步,是油脂合成的限制性因素。产油酵母圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides)的DGAT在油脂合成过程中的作用还不清楚,因而本研究主要是对此酵母细胞内DGAT的鉴定和功能性分析。首先,圆红冬孢酵母CGMCC 2.1389在产脂培养基2 L发酵罐中发酵培养,发酵后期圆红冬孢酵母的生物量为23.1 g/L,油脂总量可达到细胞干重的73%(w/w),TLC分析总脂发现TAG占总细胞干重的53%,根据已经公布的基因组信息,圆红冬孢酵母基因组中存在两个DGAT的蛋白质,分别是RtDGATa和RtDGATb,在圆红冬孢酵母油脂积累过程中,DGATa基因的m RNA表达水平没有发生变化,而DGATb基因的mRNA表达水平和油脂积累存在相关性,DGATb可能在圆红冬孢酵母油脂积累中起到重要作用。其次,对圆红冬孢酵母细胞中DGATa和DGATb氨基酸序列进行生物信息学分析,并以双倒卵形红冬孢酵母细胞内RdDGAT2为对照,理化性质和保守结构域分析均发现RtDGATb与RdDGAT2具有较大的相似性,而DGATa与RdDGAT2的相似度很低,构建34个不同来源的DGAT序列的进化树发现,DGAT可以清晰分成4个家族,分别是DGAT1、DGAT2、DGAT3和WS/DGAT家族,而圆红冬孢酵母RtDGATa属于DGAT1家族,和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的胆固醇酰基转移酶有最大相似性,而Rt DGATb和RdDGAT2均属于DGAT2家族,并且二者之间有最大的相似度,RtDGATb和其他DGAT2家族类似,均包含6个保守结构域。最后,从圆红冬孢酵母的cDNA中克隆得到DGATa和DGATb基因,并导入酿酒酵母表达载体pYES2/NT C,形成目的载体pYES2-RtDGATa和pYES2-RtDGATb,同时以酿酒酵母的DGA1和双倒卵形红冬孢酵母的RdDGAT2的表达载体pYES2-DGA1和pYES2-RdDGAT2作为阳性对照,空质粒作为阴性对照。五种表达载体通过醋酸锂法转化到甘油三酯缺陷型的酿酒酵母H1246中,培养酿酒酵母H1246的突变菌种HY1(H1246/pYES2/NT C)、HY2(H1246/pYES2-DGA1)、HY3(H1246/p YES2-RdDGAT2)、HY4(H1246/pYES2-RtDGATa)和HY5(H1246/pYES2-RtDGATb),通过气相色谱分析酵母细胞内的油脂含量和脂肪酸组成。结果发现,HY2、HY3和HY5均能恢复细胞内甘油三酯的合成,而HY4中检测不到甘油三酯,说明RtDGATa不具有DGAT活性而RtDGATb具有DGAT活性。对其脂肪酸底物偏好性研究发现,RtDGATb偏好于单不饱和脂肪酸而不偏好饱和脂肪酸,而对C18:3基本没有活性。综上所述,产油酵母圆红冬孢酵母中RtDGATb具有DGAT的活性,并和油脂积累相关联,可能是调控油脂积累过程中的关键因素。

关键词：二酰甘油酰基转移酶圆红冬孢酵母脂肪酸合成油脂积累甘油三酯

卷枝毛霉二酰甘油酰基转移酶的基因鉴定与功能分析

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卷枝毛霉二酰甘油酰基转移酶的基因鉴定与功能分析

作者：张鲁宁江南大学

学位级别：硕士

二酰甘油酰基转移酶(Acyl-Co A:diacylglycerol acyltransferase,DGAT)催化三酰甘油(triacylglycerol,TAG)生物合成最后一步酯酰化反应,即二酰甘油进一步酯酰化合成TAG。DGAT是决定碳源流向TAG的一个关键酶,在TAG合成与积累中起重要作用... 详细信息

二酰甘油酰基转移酶(Acyl-Co A:diacylglycerol acyltransferase,DGAT)催化三酰甘油(triacylglycerol,TAG)生物合成最后一步酯酰化反应,即二酰甘油进一步酯酰化合成TAG。DGAT是决定碳源流向TAG的一个关键酶,在TAG合成与积累中起重要作用,已经成为油料作物改良、微生物油脂积累调控、人类肥胖症及二型糖尿病等脂质代谢综合征治疗的重要靶点。产油真菌卷枝毛霉(Mucor circinelloides)能够大量积累富含γ-亚麻酸(γ-linolenic acid,GLA)的TAG,DGAT可能是其脂质代谢调控的又一个关键基因。但是至今有关卷枝毛霉脂质积累的研究主要是围绕脂肪酸合成,对TAG合成的关键基因DGAT的研究尚未见报道。本文旨在对卷枝毛霉4个DGAT(分别命名为Mc DGAT1/2/3/4)的基因鉴定和功能特性进行初步探索,从4个DGAT中鉴定出具有DGAT催化活性的Mc DGAT,研究其产脂特性,为揭示DGAT在卷枝毛霉TAG合成与积累中的作用以及为研究其对油脂积累调控奠定基础。首先,研究了卷枝毛霉的发酵培养和其4个DGAT在不同发酵时期的相对表达水平,结果显示,发酵培养14 h氮源耗尽,培养80 h后,卷枝毛霉细胞干重达到12 g/L,TAG约占细胞干重的6%,总脂约占细胞干重的10%;卷枝毛霉Mc DGAT的表达水平与其生长、产脂具有一定的相关性。其次,利用生物信息学方法分析了卷枝毛霉4个DGAT的结构与功能。比对了氨基酸序列,构建了分子进化树,同时预测了理化性质、二级结构、跨膜结构。研究发现,Mc DGAT1和Mc DGAT4属于DGAT2家族,相似性为68%,;Mc DGAT2和Mc DGAT3属于DGAT1家族,相似性为32%;且卷枝毛霉4个DGAT具有不同的理化性质、二级结构和跨膜结构,反应了功能的多样性与复杂性。再次,在缺陷型酿酒酵母中分别异源表达了卷枝毛霉4个DGAT。克隆了卷枝毛霉4个DGAT基因全长c DNA序列,构建了酵母表达载体p YES2-Mc DGAT1/2/3/4,并转化了缺陷型酿酒酵母菌株H1246,并分析了成功转化的4个Mc DGAT的相对转录水平,实现了卷枝毛霉Mc DGAT基因在缺陷型酿酒酵母内的异源表达。空质粒p YES2为阴性对照,酿酒酵母内源性DGAT基因Sc DGA1为阳性对照。最后,研究了重组酵母菌株的生长和产脂特点,并从4个Mc DGAT中鉴定出表现DGAT催化活性的Mc DGAT,并进一步探索了具有DGAT催化活性的重组酵母菌株在外源添加1 m M多不饱和的亚油酸(Linoleic acid,LA)或GLA时的产脂特点。研究发现,LA对除表达酿酒酵母内源性DGAT基因Sc DGA1和卷枝毛霉Mc DGAT4的重组菌株外的其余重组菌株均有生长抑制,GLA对所有重组菌株均无生长抑制现象。表达Mc DGAT4的重组酵母菌株可以合成与积累TAG,并恢复油体缺陷表型,且其TAG和总脂积累量明显大于表达Sc DGA1的阳性对照组。无外源添加脂肪酸时,表达Mc DGAT4的重组酵母菌株TAG和总脂分别是阳性对照组的1.8倍和1.1倍;相比于Sc DGA1,Mc DGAT4对C18:0更加偏好。外源添加1 m M LA时,表达Mc DGAT4的重组酵母菌株TAG和总脂分别是阳性对照组的2.5倍和1.9倍;相比于Sc DGA1,卷枝毛霉Mc DGAT4对各脂肪酸无明显的偏好。外源添加1 m M GLA时,表达Mc DGAT4的重组菌株TAG和总脂分别是阳性对照组的2.2倍和1.3倍;相比于Sc DGA1,Mc DGAT4对C18:1的偏好较差。Mc DGAT4对于外源添加的LA和GLA吸收利用率不同,相比于GLA,对外源添加的LA的利用率更高。

关键词：卷枝毛霉二酰甘油酰基转移酶三酰甘油

植物二酰甘油酰基转移酶及其编码基因研究进展

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广东农业科学 2012年第6期39卷 127-130页

作者：王婷婷马晓林李凤兰郭惠红陈发菊北京林业大学生物科学与技术学院/林木育种国家工程实验室/林木花卉遗传育种教育部重点实验室/国家林业局林木花卉育种与生物工程重点开放实验室北京100083 北京市海淀区圆明园管理处北京100083 三峡大学生物技术研究中心湖北宜昌443002

三酰甘油(TAG)是植物的主要储藏脂类,二酰甘油酰基转移酶(DGATs)催化TAG生物合成的最后一步乙酰化反应,使二酰甘油加上一个脂肪酰基形成TAG。因此,DGATs被认为是TAG生物合成过程中最关键的限速酶。重点介绍了植物DGATs及其编码基因的分... 详细信息

三酰甘油(TAG)是植物的主要储藏脂类,二酰甘油酰基转移酶(DGATs)催化TAG生物合成的最后一步乙酰化反应,使二酰甘油加上一个脂肪酰基形成TAG。因此,DGATs被认为是TAG生物合成过程中最关键的限速酶。重点介绍了植物DGATs及其编码基因的分类、结构以及在植物油脂合成中的作用及应用的最新研究进展,以期为应用基因工程等技术提高植物油脂(如种子油)含量或改善油脂品质提供参考。

关键词：二酰甘油酰基转移酶编码基因研究进展

类波氏真眼点藻二酰甘油酰基转移酶（DGAT）基因的克隆与功能分析

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类波氏真眼点藻二酰甘油酰基转移酶（DGAT）基因的克隆与功能分析

作者：王元丽暨南大学

学位级别：硕士

类波氏真眼点藻（Eustigmatos cf. polyphem）属于异鞭藻门（Heterokontophyta）真眼点藻纲（Eustigmatophyceae），是一种土壤黄绿色单细胞微藻。前期研究证实，该藻能合成多不饱和脂肪酸、β-胡萝卜素和金藻昆布糖等高附加值生物活性... 详细信息

类波氏真眼点藻（Eustigmatos cf. polyphem）属于异鞭藻门（Heterokontophyta）真眼点藻纲（Eustigmatophyceae），是一种土壤黄绿色单细胞微藻。前期研究证实，该藻能合成多不饱和脂肪酸、β-胡萝卜素和金藻昆布糖等高附加值生物活性物质，特别是在氮限制培养后期能大量积累储藏性油脂，是一株具有生物产品和生物燃料开发潜能的微藻。本文以类波氏真眼点藻（E. cf. polyphem）为研究材料，克隆藻细胞TAG合成途径中二酰甘油酰基转移酶（Diacylglycerol acyltransferase，DGAT）基因的cDNA全长序列，通过外源表达确定基因的具体功能，探讨类波氏真眼点藻（E. cf. polyphem）在氮限制培养时TAG积累过程中DGAT的转录水平表达情况，了解类波氏真眼点藻（E. cf. polyphem）中TAG合成代谢的分子机理与调控机制，为微藻生物能源的开发提供一定的理论依据。研究结果如下：（1）利用RACE技术扩增得到类波氏真眼点藻（E. cf. polyphem）二酰甘油酰基转移酶基因EcfpDGATb的cDNA全长序列2347bp，同时分别得到EcfpDGATa和EcfpDGATc的3’cDNA序列309bp和480bp。（2）DNA序列分析发现EcfpDGATb全长cDNA含有23bp5’和338bp3’非翻译区（Untranslated Regions，UTR）序列，开放阅读框（Open Reading Frame，ORF）1986bp，编码661个氨基酸;该蛋白质N端具有43个氨基酸长度的预测信号肽和9个预测跨膜区，结构域中包含6个II型DGAT的保守基序，说明EcfpDGATb可能属于编码II型DGAT的基因家族成员。（3）EcfpDGATb的异源表达证实其能使TAG合成缺陷酵母菌株恢复部分的油滴积累能力，并偏好于利用16C不饱和与18C脂肪酸合成TAG，说明EcfpDGATb参与TAG的生物合成过程。（4）EcfpDGATb的mRNA相对表达量在两种硝酸钠浓度培养条件下都呈现先上升后下降的趋势，在高氮组（18mmol/L NaNO3）中培养36h时达到最高相对表达量，低氮组（6mmol/L NaNO3）在96h达到最高，表明EcfpDGATb mRNA水平的表达对氮限制有一定的响应。

关键词：类波氏真眼点藻二酰甘油酰基转移酶 RACE技术克隆异源表达 mRNA相对表达量

甘蓝型油菜二酰甘油酰基转移酶基因微藻真核表达载体的构建

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郑州大学学报（医学版） 2012年第1期47卷 14-16页

作者：张楠楠潘卫东郑国庭李靓崔玉琳秦松薛乐勋郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州450001 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001 宁波大学海洋生物技术重点实验室宁波315211 中国科学院海洋研究所青岛266071 中国科学院烟台海岸带研究所烟台264003

目的:构建二酰甘油酰基转移酶(DGAT)的微藻真核表达载体。方法:采用RT-PCR从甘蓝型油菜中扩增得到DGAT1和DGAT22个基因cDNA编码区序列,分别连接到载体pMD18-TSimple上,经测序及与已知的DGAT1和DGAT2序列比对,将鉴定正确的基因用于微藻... 详细信息

目的:构建二酰甘油酰基转移酶(DGAT)的微藻真核表达载体。方法:采用RT-PCR从甘蓝型油菜中扩增得到DGAT1和DGAT22个基因cDNA编码区序列,分别连接到载体pMD18-TSimple上,经测序及与已知的DGAT1和DGAT2序列比对,将鉴定正确的基因用于微藻真核表达载体pSV40DGAT1/CaMVBar和pSV40DGAT2/CaMVBar的构建。结果:克隆到的甘蓝型油菜DGAT1和DGAT22个基因长度分别为1512和1026bp,同源性分别为99%和98%,构建了微藻真核表达载体pSV40DGAT1/CaMVBar和pSV40DGAT2/CaMVBar。结论:2个微藻真核表达载体构建成功。

关键词：甘蓝型油菜二酰甘油酰基转移酶微藻真核表达载体

大豆二酰甘油酰基转移酶(DGAT)基因家族的鉴定及功能分析

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大豆二酰甘油酰基转移酶(DGAT)基因家族的鉴定及功能分析