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温郁金二萜类化合物C抗胃癌作用的实验研究

中国中西医结合杂志 2015年第2期35卷 216-221页

作者：金海峰吕宾戴金锋盛桂琴浙江中医药大学附属第一医院消化内科杭州310006

目的通过肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激胃癌细胞株SGC7901,探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶MAPK(p38MAPK)调控核转录因子(NF)-κB通路在温郁金二萜类化合物C抗炎和诱导胃癌细胞凋亡中的作用。方法将不同浓度的温郁金二萜类化合物C在不同的时... 详细信息

目的通过肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激胃癌细胞株SGC7901,探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶MAPK(p38MAPK)调控核转录因子(NF)-κB通路在温郁金二萜类化合物C抗炎和诱导胃癌细胞凋亡中的作用。方法将不同浓度的温郁金二萜类化合物C在不同的时间,体外作用于人脐静脉细胞(HUVECs)、胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测其对两种细胞株的增殖抑制率;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组胃癌细胞凋亡率;细胞免疫荧光检测p65核转位情况,采用Western blot检测各组p38MAPK/P-p38MAPK、p65/P-p65及Caspase-3/P-Caspase-3蛋白表达量。结果温郁金二萜类化合物C对SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用,并能有效地诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡;温郁金二萜类化合物C能一定程度地减少胃癌细胞SGC-7901p65核转位发生;Western blot结果提示,p38MAPK、p65蛋白的表达随着温郁金二萜类化合物C浓度的提高而减少,而Caspase-3蛋白的表达则增加(P二萜类化合物C发挥抗炎和抗癌可能的作用机制之一。

关键词：胃癌温郁金二萜类化合物丝裂原活化蛋白激酶核转录因子-κB 细胞凋亡

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二萜类化合物对土壤纤毛虫的毒性效应

二萜类化合物对土壤纤毛虫的毒性效应

作者：邹涛西北师范大学

学位级别：硕士

2006年7月至2007年12月,采用“非浸没培养皿法”(non-flooded Petri dish method)和活体观察法对小陇山自然保护区麻沿林区的土壤纤毛虫群落进行了定性、定量研究。利用花盆实验,通过添加二萜类化合物对该地区土壤纤毛虫群落的毒性进行... 详细信息

2006年7月至2007年12月,采用“非浸没培养皿法”(non-flooded Petri dish method)和活体观察法对小陇山自然保护区麻沿林区的土壤纤毛虫群落进行了定性、定量研究。利用花盆实验,通过添加二萜类化合物对该地区土壤纤毛虫群落的毒性进行了研究。并从实验土壤中分离出膨胀肾形虫、僧帽肾形虫和粘游仆虫,通过急性和慢性毒性试验,研究了二萜类化合物对土壤纤毛虫种群的毒性。主要结果如下: 1、麻沿林区土壤纤毛虫群落结构的原位研究共鉴定到土壤纤毛虫91种,其中包括7个未定名种和14个中国土壤纤毛虫新纪录种,隶属于3纲、11目、29科、42属。其中,下毛目(Hypotrichida)为优势类群,肾形目(Colpodida)和前口目(Prostomatida)为次优势类群,侧口目(Pleurostomatida)、缘毛目(Peritrichida)和寡毛目(Oligotrichida)为偶见类群,膨胀肾形虫(Colpoda inflata)、长篮环虫(Cyrtolophosis elongata)、大口薄咽虫(Leptopharynx eurystoma)和长圆膜袋虫(Cyclidium oblongum)为优势种。原位研究结果表明,小陇山麻沿林区土壤纤毛虫群落物种丰富,特有和稀有物种繁多,群落结构复杂,林区土壤纤毛虫群落与我国已有研究报道的其他地区的均不相似。同时麻沿林区土壤纤毛虫的C/P系数为0.710,反映了麻沿林区比较适合土壤纤毛虫生长繁殖。 2、模拟生态实验中,定性研究共鉴定到纤毛虫88种,其中对照组75种,实验组随添加的二萜类化合物浓度升高,纤毛虫物种数减少,群落结构简单化;回归分析表明纤毛虫物种数和二萜类化合物浓度成极显著负相关关系。当施药浓度超过32.5 mg·kg时土壤纤毛虫优势种和C/P系数发生变化,此时优势种为膨胀肾形虫(Colpoda inflata)、长篮环虫(Cyrtolophosis elongata)、苔藓膜袋虫(Cyclidium muscicola)、水藓薄咽虫(Leptopharynx sphagnetorum)、大弹跳虫(Halteria grandinella)、小尖毛虫(Oxytricha minor)、有肋薄咽虫(Leptopharynx costatus)和前口虫属一种(Frontonia sp.);C/P系数大于1,表明二萜类化合物使土壤纤毛虫群落结构遭到了相当大的破坏。定量研究发现,在相同曝露时间,不同施药浓度下土壤纤毛虫丰度与对照组相比均有极明显的降低,而同一施药浓度,随着曝露时间逐渐延长,纤毛虫的数量逐渐回升。二萜类化合物残留浓度测定结果表明,即使土壤中二萜类化合物残留浓度很低,也对纤毛虫群落有显著的抑制作用。非参数多个独立样本检验分析结果表明,各浓度组间纤毛虫的丰度存在极显著差异。 3、种群毒性试验中,12 h和24 h的急性毒性试验结果显示,浓度对数与纤毛虫死亡概率单位之间存在极显著的正相关关系。即随二萜类化合物浓度增大,对纤毛虫种群的毒性增大。膨胀肾形虫、僧帽肾形虫和粘游仆虫12 h-LC50分别为161.4 mg·L,94.8 mg·L,83.7 mg·L;24 h-LC50依次为114.9 mg·L,92.3 mg·L,65.8 mg·L。单因子方差分析(ANOVA)显示:与对照组相比,不同浓度的二萜类化合物对三种纤毛虫的致死率存在极显著差异(P﹤0.01);各浓度组之间也存在极显著差异(P﹤0.01)。以上结果表明二萜类化合物对纤毛虫种群的急性毒性作用显著。慢性毒性试验结果显示,不同浓度二萜类化合物培养液中三种纤毛虫的种群密度和种群增长率明显低于对照组,而世代时间明显高于对照组。三种纤毛虫在不同浓度二萜类化合物培养液中的种群密度和种群增长率与对照之间存在着极显著的差异(P﹤0.01)。综合以上结果:在试验浓度范围内,二萜类化合物对膨胀肾形虫、僧帽肾形虫和粘游仆虫的种群生长有明显的抑制效应。对纤毛虫个体形态的影响方面,二萜类化合物使三种纤毛虫个体形态发生显著变化。

关键词：土壤纤毛虫二萜类化合物毒性效应

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半边旗二萜类化合物的液质联用图谱鉴定

中药材 2005年第4期28卷 278-280页

作者：邓亦峰梁念慈广东医学院广东省天然药物研究与开发重点实验室广东湛江524023

用高效液相色谱-大气压化学电离源质谱联用的方法建立总离子流色谱图,以色谱保留时间和色谱峰的质谱图为依据,对不同地区和不同采集时间的半边旗LC-MS图谱中的主要色谱峰进行了对比分析和质谱鉴定.色谱分析条件:色谱柱为Diamonsil ODS、... 详细信息

用高效液相色谱-大气压化学电离源质谱联用的方法建立总离子流色谱图,以色谱保留时间和色谱峰的质谱图为依据,对不同地区和不同采集时间的半边旗LC-MS图谱中的主要色谱峰进行了对比分析和质谱鉴定.色谱分析条件:色谱柱为Diamonsil ODS、4.6 mm×150mm,流动相为30%CH3CN-70%2mmol/L NH4AC、流速1.0 ml/min,进样5 μl;质谱分析条件:APCI负离子源,质谱扫描范围m/z 50～700,扫描间隔1s.以对照品为参比,鉴定出贝壳杉烷系二萜类化合物4F、5F和6F的色谱峰;根据色谱行为和质谱行为,推测出6F的16位饱和态化合物以及4F和5F的甙.对不同地区和采集时间的半边旗LC-MS指纹图谱中的主要色谱峰进行比较分析得出,广州市郊和湛江地区以及在11～12月采集的半边旗中5F含量较高.本法简便、快速,可为半边旗中二萜类抗癌化合物的深入研究和新药资源的开发提供参考.

关键词：二萜类化合物半边旗液-质联用大气压化学电离高效液相色谱一 LC-MS 采集时间不同地区分析条件抗癌化合物色谱峰方法建立质谱联用保留时间质谱鉴定对比分析 APCI 扫描范围贝壳杉烷色谱行为比较分析指纹图谱

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几种香茶菜属二萜类化合物的抗氧化作用

中国药理学通报 2003年第9期19卷 1009-1012页

作者：王筠戈士文王毅叶启霞张覃沐河南省医学科学研究所药理室郑州450052

目的　了解香茶菜属二萜类化合物冬凌草乙素(Pon)、香茶菜醛 (Ame)、毛叶香茶菜醇 (Iso)是否具有抗氧化作用。方法　用分光光度法测定Fenton反应体系中细胞色素C(Ⅱ )的含量 ,了解清除·OH的能力 ;用紫外分光光度法测定N-2 的含量 ,了... 详细信息

目的　了解香茶菜属二萜类化合物冬凌草乙素(Pon)、香茶菜醛 (Ame)、毛叶香茶菜醇 (Iso)是否具有抗氧化作用。方法　用分光光度法测定Fenton反应体系中细胞色素C(Ⅱ )的含量 ,了解清除·OH的能力 ;用紫外分光光度法测定N-2 的含量 ,了解清除O-·2 的能力 ,用DTNB法测定GSH的含量。结果　Orid、Pon、Ame、Iso ,5 0、10 0、2 0 0 μmol·L-1可清除H2 O2 Fe2 + 反应体系中产生的·OH ,且呈剂量依赖关系。Orid、Pon、Ame、Iso ,4 0 0、80 0 μmol·L-1可清除黄嘌呤 -黄嘌呤氧化酶系统产生的NO-2 。Orid、Pon、Ame、Iso ,1、2 μmol·L-1可明显的减少LPS刺激巨噬细胞产生的NO-2 。Orid、Pon、Ame、Iso ,2、4 μmol·L-1可明显抑制CCl4造成的GSH含量降低 ,具有剂量依赖性。结论　Orid、Pon、Ame、Iso能有效地清除羟自由基和一氧化氮。

关键词：二萜类化合物谷胱甘肽抗氧化作用羟自由基超氧阴离子自由基一氧化氮

二萜类化合物抑制巨噬细胞泡沫化的具体机制研究

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二萜类化合物抑制巨噬细胞泡沫化的具体机制研究

作者：方飞云南大学

学位级别：硕士

目的:动脉血管内皮下巨噬细胞对胆固醇酯,尤其表现为对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的调节紊乱被认定是致使泡沫细胞形成及初始动脉粥样硬化病变的重要原因。二萜类化合物可以有效调节大鼠心血管系统微循环,调节血脂代谢及心率,显著降低大... 详细信息

目的:动脉血管内皮下巨噬细胞对胆固醇酯,尤其表现为对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的调节紊乱被认定是致使泡沫细胞形成及初始动脉粥样硬化病变的重要原因。二萜类化合物可以有效调节大鼠心血管系统微循环,调节血脂代谢及心率,显著降低大鼠体内肝甘油三酯的蓄积。然而,二萜类化合物对胆固醇酯代谢的具体分子机制还有待进一步的研究,本文旨在探究二萜类化合物抑制RAW264.7细胞泡沫化的具体机制,为深入揭示其在动脉粥样硬化的作用和功能提供理论基础,并为抗动脉粥样硬化药物研发提供新的视角。方法:用80μg/m L ox-LDL诱导RAW264.7细胞泡沫化,用油红O染色对泡沫细胞进行鉴定。MTT法检测二萜类化合物对RAW264.7细胞活力的影响。用western blot及实时定量PCR检测胆固醇逆向转运通路相关基因的蛋白表达水平及m RNA转录水平。用NBD-胆固醇结合荧光酶标仪检测技术检测二萜类化合物对RAW264.7细胞内胆固醇外排的影响。用3T3-L1前脂肪细胞分化模型检测二萜类化合物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果:二萜类化合物(D-1&D-2)减少了RAW264.7细胞内脂质的蓄积,抑制了巨噬细胞泡沫化,通过激活胆固醇逆向转运通路,升高通路中关键基因(PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1)的蛋白表达水平及m RNA转录水平,促进了细胞内胆固醇的外排。同时,研究发现,二萜类化合物可能还具有促进3T3-L1前脂肪细胞分化为脂肪细胞的功能。但具体机制尚不清晰,有待进一步探索。结论:二萜类化合物(D-1&D-2)通过激活胆固醇逆向转运通路减轻脂质蓄积、促进胆固醇外排,来发挥抑制RAW264.7细胞泡沫化的作用。并且发现其可能会促进3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞的分化过程。

关键词：二萜类化合物动脉粥样硬化胆固醇逆向转运 RAW264.7细胞 3T3-L1前脂肪细胞细胞分化

穿心莲二萜类化合物对B16细胞致敏小鼠CTL杀伤活性的影响

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中国药理学通报 2007年第5期23卷 688-692页

作者：李满妹徐炎程燕张坤吕艳青姚新生栗原博暨南大学中药及天然药物研究所广东广州510632

目的研究穿心莲二萜类化合物(DAP)对B16细胞致敏小鼠脾脏CTL杀伤活性的影响。方法将♂BALB/c小鼠分为对照组、致敏组、50mg·kg-1及150mg·kg-1DAP给药组,制备小鼠脾脏淋巴细胞悬液,流式细胞术分析T淋巴细胞亚群,乳酸脱氢酶(LDH)法和DiO... 详细信息

目的研究穿心莲二萜类化合物(DAP)对B16细胞致敏小鼠脾脏CTL杀伤活性的影响。方法将♂BALB/c小鼠分为对照组、致敏组、50mg·kg-1及150mg·kg-1DAP给药组,制备小鼠脾脏淋巴细胞悬液,流式细胞术分析T淋巴细胞亚群,乳酸脱氢酶(LDH)法和DiO/PI双染色法分别测定CTL杀伤活性。结果50mg·kg-1及150mg·kg-1DAP口服给药可以增加B16细胞致敏小鼠脾脏淋巴细胞中T细胞及CD8+T细胞比例,降低T细胞中CD4+/CD8+比值并增强CTL对B16细胞的杀伤活性。结论DAP可增加B16细胞致敏小鼠脾脏T细胞比例及提高CTL杀伤活性。

关键词：穿心莲二萜类化合物 B16细胞 CTL 流式细胞术

HPLC-APCI-MS分析半边旗中二萜类化合物

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药学学报 2002年第6期37卷 444-446页

作者：邓亦峰梁念慈梁统广东医学院广东省天然药物研究与开发重点实验室广东湛江524023

目的　建立一种准确可靠的分析半边旗中二萜类化合物的方法。方法　用高效液相色谱 (HPLC) 大气压化学电离源 (APCI) 质谱 (MS)联用的方式 ,以选择离子监测 (SIM)方式进行测定。主要的二萜类化合物 5F和 4F的准分子离子为 [M -H]- 1 ... 详细信息

目的　建立一种准确可靠的分析半边旗中二萜类化合物的方法。方法　用高效液相色谱 (HPLC) 大气压化学电离源 (APCI) 质谱 (MS)联用的方式 ,以选择离子监测 (SIM)方式进行测定。主要的二萜类化合物 5F和 4F的准分子离子为 [M -H]- 1 ,发生源内分子离子碰撞活化解离 (CID)现象时 ,出现 [M -H]- 1 和 [M -H2 O -H]- 1 离子峰。采用 [M -H]- 1 为选择监测离子 ,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量 ,优选质谱条件和色谱条件。分析色谱柱为DiamonsilODS ,4 6mm× 15 0mm ,流动相为 3 0 %CH3CN 70 % 2mmol·L- 1 NH4 Ac,流速 1 0mL·min- 1 ,进样 5 μL。以测定半边旗中二萜类化合物 5F为例 ,对此方法进行了应用。结果　半边旗中二萜类化合物 5F为 1 18mg·g- 1 ,方法线性范围 0 0 5～ 2 5 μg,相关系数均优于 0 999,检出限达 0 4ng(进样 5 μL)。 5F的加标回收率为 97 8% (n =3 ) ,5F保留时间为 4 3min。结论　本法灵敏、准确、可靠。

关键词：高效液相色谱质谱大气质化学电离源半边旗二萜类化合物

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一种新二萜类化合物的体外抗肿瘤研究

中国药理学通报 1998年第1期14卷 50-52页

作者：崔燎张晓梁念慈蔡康荣王媚广东医学院药理教研室

目的研究一种新二萜类化合物凤厥内酯Ａ（Ｆ－Ａ）的抗肿瘤活性。方法采用体外培养的人癌细胞株——早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０和红白细胞白血病Ｋ５６２作对象，观察Ｆ－Ａ对其抑瘤活性、诱导分化、细胞周期的影响。结果Ｆ－Ａ对ＨＬ... 详细信息

目的研究一种新二萜类化合物凤厥内酯Ａ（Ｆ－Ａ）的抗肿瘤活性。方法采用体外培养的人癌细胞株——早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０和红白细胞白血病Ｋ５６２作对象，观察Ｆ－Ａ对其抑瘤活性、诱导分化、细胞周期的影响。结果Ｆ－Ａ对ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞２４ｈ的半数抑制浓度ＩＣ５０分别为７．６ｍｇｇ－１和９．１ｍｇｇ－１，在４ｍｇＬ－１时即明显抑制ＨＬ－６０细胞的对数生长；对３Ｈ－ＴｄＲ参入作用在培养４８ｈ后有一定抑制作用；透视电镜显示肿瘤细胞有损伤表现；细胞周期分析显示Ｇ２＋Ｍ期细胞增多；ＮＢＴ还原反应试验阴性。结论Ｆ－Ａ明显抑制ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞生长，抗肿瘤活性强，对细胞周期的影响提示Ｍ期阻滞，研究初步提示Ｆ－Ａ不具细胞诱导分化作用。

关键词：二萜类化合物抗肿瘤白血病动物实验

半边旗中二萜类化合物的超临界CO_2萃取及HPLC-MS分析

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中草药 2004年第2期35卷 145-148页

作者：邓亦峰梁念慈广东医学院广东省天然药物研究与开发重点实验室广东湛江524023

目的　建立一种高效准确的提取和分析半边旗中二萜类化合物的方法。方法　以超临界 CO2 与改性剂乙醇组成的复合流体萃取半边旗中二萜类化合物 ,采用正交设计法优化萃取条件 ;建立了 HPL C-大气压化学电离源(APCI) - MS联用的分析方法 ... 详细信息

目的　建立一种高效准确的提取和分析半边旗中二萜类化合物的方法。方法　以超临界 CO2 与改性剂乙醇组成的复合流体萃取半边旗中二萜类化合物 ,采用正交设计法优化萃取条件 ;建立了 HPL C-大气压化学电离源(APCI) - MS联用的分析方法 ,以选择离子监测 (SIM)方式进行含量测定 ,以选择离子峰面积与总离子流峰面积的比值优选改性剂。主要的二萜类化合物 5 F的准分子离子为 [M- H]- 1。采用 [M- H]- 1为选择监测离子 ,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量。结果　超临界流体萃取最佳条件 :2 5 MPa、6 0℃、15 %甲醇、流量 3.0 m L /min;分析条件 :Diamonsil ODS色谱柱 (15 0 mm× 4 .6 mm,5 μm) ,流动相为 CH3CN- 2 mm ol/ L NH4 AC(35∶ 6 5 ) ,流速 1.0 m L / m in,进样 5μL ,线性范围为 0 .0 5～ 2 .5μg,检出限达 0 .4 ng。 5 F的加样回收率为 97.8% (n=3)。结论　本法提取效率高、检测灵敏度高、选择性好 ,可应用于半边旗中二萜类抗癌化合物的深入研究和质量标准的制定。

关键词：半边旗二萜类化合物超临界CO2 萃取液相色谱—质谱联用改性剂