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二苯基碘和夹竹桃麻素通过降低早产儿外周血单个核细胞p47phox位移与水平减少活性氧的产生

细胞与分子免疫学杂志 2016年第1期32卷 59-62页

作者：张玲萍董文斌李清平康兰张莲玉卢佑英翟雪松四川医科大学附属第一医院新生儿科四川泸州646000

目的观察NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)和夹竹桃麻素(apocynin)对NADPH氧化酶亚基p47phox介导的活性氧(ROS)产生的影响,探讨细胞在高氧条件下,p47phox介导ROS产生的机制。方法 32周以下早产儿,尚未吸氧前取外周血2 m L,分离纯化外周... 详细信息

目的观察NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)和夹竹桃麻素(apocynin)对NADPH氧化酶亚基p47phox介导的活性氧(ROS)产生的影响,探讨细胞在高氧条件下,p47phox介导ROS产生的机制。方法 32周以下早产儿,尚未吸氧前取外周血2 m L,分离纯化外周血单个核细胞(PBMC)将所得细胞分为对照组、高氧组、高氧联合DPI处理组、高氧联合apocynin处理组进行培养。对照组置于37℃、50 m L/L的CO2培养箱中,高氧及相应处理组置于950 m L/L的O2与50 m L/L的CO2混合气体中培养48 h。采用Mitosox Red标记结合激光共聚焦显微镜检测PBMC内ROS的生成量、硫代巴比妥酸比色法检测培养液丙二醛含量、免疫荧光检测p47phox在细胞内的定位及移位率、Western blot法检测p47phox的蛋白水平。结果与高氧组相比,其余三组ROS和丙二醛明显减少,p47phox移位率与含量也显著降低;与对照组相比,高氧联合DPI处理组及高氧联合apocynin处理组ROS、丙二醛、p47phox移位率与含量并无显著差异。结论 DPI和apocynin能通过降低p47phox移位与含量来减少高氧诱导的ROS升高。

关键词：高氧暴露二苯基碘罗布麻宁 p47phox

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高糖对人脐静脉内皮细胞NADPH氧化酶表达和活性氧生成的影响

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中南大学学报（医学版） 2014年第12期39卷 1253-1258页

作者：王蕾苏华斌卢琼吴和平湖南医药学院基础医学部湖南怀化418000 湖南医药学院临床医学系湖南怀化418000

目的:探讨高糖对内皮细胞活性氧生成和NADPH氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOX)表达的影响。方法:本实验以人脐静脉内皮细胞为研究对象,分为正常对照组、20 mmol/L甘露醇处理4 h高渗对照组、20 mmol/L葡... 详细信息

目的:探讨高糖对内皮细胞活性氧生成和NADPH氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOX)表达的影响。方法:本实验以人脐静脉内皮细胞为研究对象,分为正常对照组、20 mmol/L甘露醇处理4 h高渗对照组、20 mmol/L葡萄糖处理2 h组、20 mmol/L葡萄糖处理4 h组、20 mmol/L葡萄糖处理6 h组和NOX特异性抑制剂二苯基碘(diphenylene iodonium,DPI)5 mol/L预处理0.5 h再加入20 mmol/L葡萄糖处理组(DPI预处理组)。用流式细胞仪检测各组细胞内活性氧的浓度;反转录聚合酶链反应及Western印迹法分别检测各组细胞内NOX各亚基m RNA和蛋白的表达变化。结果:1)与正常对照组相比,20 mmol/L葡萄糖处理2,4和6 h组活性氧增高(均P0.05);2)与正常对照组相比,20 mmol/L葡萄糖处理4 h组NOX4 m RNA和蛋白的表达明显增加(均P0.05);3)与正常对照组相比,DPI预处理组NOX4,NOX2,P67phox,P22phox和Rac表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:高糖可能通过上调NOX4表达以增加活性氧生成而发挥氧化应激作用。

关键词：尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶活性氧葡萄糖二苯基碘

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P47phox介导氧暴露后单个核细胞内活性氧簇产生的机制

P47phox介导氧暴露后单个核细胞内活性氧簇产生的机制

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作者：张玲萍四川医科大学

学位级别：硕士

目的:观察32周以下早产儿不同浓度氧暴露后,外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)内p47phox与活性氧簇产生的变化;以及运用NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)和夹竹桃麻素(apocynin)联合高浓度氧处理PBMCs后,p47pho... 详细信息

目的:观察32周以下早产儿不同浓度氧暴露后,外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)内p47phox与活性氧簇产生的变化;以及运用NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)和夹竹桃麻素(apocynin)联合高浓度氧处理PBMCs后,p47phox与活性氧簇水平的改变,来探讨NADPH氧化酶亚单位p47phox调节PBMCs内活性氧簇升高的机制,为临床中减轻早产儿氧化应激损伤寻找新的靶点。方法:实验分两部分进行。第一,以临床中32周以下早产儿为对象,将其中入院时诊断为新生儿呼吸窘迫综合征(Neonatal respiratory distress syndrom,NRDS)且需要吸氧的患儿作为氧暴露组,根据吸氧浓度不同分为三组:FiO240%为高浓度吸氧组,每组患儿各10例,其中男18例,女12例。胎龄(28-32)周,体重(1350±138)g,组间患儿胎龄、出生体重无显著性差异。同期选择10例32周以下暂未吸氧的早产儿作为空气组,其中男5例,女5例。胎龄(30-32)周,体重(1347±116)g。氧暴露组与空气组间患儿胎龄、出生体重无显著性差异,具有可比性。该实验通过四川医科大学附属医院伦理委员会的批准,所有患儿进行实验前均征得家属同意并签署知情同意书。空气组及氧暴露组患儿不同浓度氧疗48小时后,均经桡动脉采血3ml。分离取得PBMCs及血清标本用于检测。实验第二部分,出生后即入我科的32周以下早产儿,尚未吸氧前,征得家属同意并签署知情同意书后经桡动脉采血2 ml,经Ficoll密度梯度离心法,分离纯化PBMCs,以PBMCs为对象,将其分为以下四组:常规培养组,置于37℃、50ml/l的co2培养箱中培养48h;高氧处理组,按3l/min通入950ml/l的o2与50ml/l的co2混合气体,10min后,立即用封口胶密封培养瓶,置于培养箱中培养48h;高氧联合dpi处理组与高氧联合夹竹桃麻素(apocynin)处理组根据文献报道和预实验结果,分别选择5μmol/l、100μmol/l处理细胞后再按上述方法建立高氧损伤模型并培养48h;高氧及相应处理组培养48h后,均用cys-1数字式测氧仪检测培养瓶中o2的浓度,将低于900ml/lo2的标本弃去。离心采集pbmcs和培养液作为标本。将两部分实验中所获得的标本,均采用mitosoxred标记结合激光共聚焦显微镜检测pbmcs内ros的生成量、硫代巴比妥酸比色法检测血清/培养液中丙二醛含量、免疫荧光检测p47phox在细胞内的定位及移位率、westernblot检测p47phox的蛋白表达量。结果:第一,临床样本中,随着早产儿吸氧浓度的升高,pbmcs内活性氧与血清丙二醛明显升高,p47phox由包质向包膜移位的细胞数增多,p47phox的移位率明显增加,p47phox的蛋白表达量也随之增加(p均二,培养pbmcs各组中,pbmcs经高氧及相应药物处理48h后,与高氧处理组相比,其余三组活性氧和丙二醛明显减少,p47phox移位率与表达量也显著降低(p均二醛、p47phox移位率与表达量并无显著差异(p均>0.05)。结论:早产儿和pbmcs经氧暴露后,p47phox可增加向胞膜移位,上调其表达量,这与ros和丙二醛增加是一致的。而对pbmcs运用nadph氧化酶抑制剂dpi和apocynin处理后,p47phox移位率、表达量出现减少,此时,ros和丙二醛也相应减少。这提示p47phox可增加向胞膜移位,上调其表达量来调节PBMCs内活性氧簇的升高,而DPI和apocynin能通过降低p47phox移位与表达来减少高氧诱导的PBMCs内活性氧簇的产生。

关键词：早产儿外周血单个核细胞高氧暴露 p47phox 二苯基碘夹竹桃麻素

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