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伊拉兔肺中硫酸软骨素C的分离纯化及二糖组成分析

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中国新药杂志 2016年第10期25卷 1165-1169页

作者：郎银芝王超陈晨张晓刘潇潇单鑫迪蔡超于广利山东省糖科学与糖工程重点实验室海洋药物教育部重点实验室中国海洋大学医药学院青岛266003 青岛市食品药品检验研究院青岛266071

目的:从伊拉兔肺中提取分离硫酸软骨素C(chondroitin sulfate C,CSC),并对其进行二糖组成分析。方法:采用丙酮、氯仿-甲醇(2∶1)对兔肺进行脱脂,利用木瓜蛋白酶对脱脂粉进行酶解。提取的粗品经75%乙醇沉淀,氯代十六烷基吡啶(CPC)将其中... 详细信息

目的:从伊拉兔肺中提取分离硫酸软骨素C(chondroitin sulfate C,CSC),并对其进行二糖组成分析。方法:采用丙酮、氯仿-甲醇(2∶1)对兔肺进行脱脂,利用木瓜蛋白酶对脱脂粉进行酶解。提取的粗品经75%乙醇沉淀,氯代十六烷基吡啶(CPC)将其中的酸性多糖富集获得总糖胺聚糖TFH。采用Q-Sepharose Fast Flow树脂对TFH分级纯化获得TF-C。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生反相HPLC法分析单糖组成,利用硫酸软骨素酶ABC降解,SAX-HPLC法分析二糖组成。结果:所得TF-C不含蛋白质,主要由葡萄糖醛酸(Glc A)和氨基半乳糖(Gal N)组成,二糖组成以不饱和△UA-Gal NAc6S为主,含有少量的△UA-GalNAc4S。结论:首次从伊拉兔肺中分离获得低硫酸化高纯度CSC,为伊拉兔肺高值化产品的开发和利用提供了理论依据。

关键词：伊拉兔肺硫酸软骨素C 分离纯化二糖组成

鲨鱼硫酸软骨素二糖组成分析及其4S/6S比值的讨论

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海峡药学 2024年第5期36卷 49-53页

作者：焦广飞福建天泉药业股份有限公司福建龙岩364000

目的研究鲨鱼来源硫酸软骨素的二糖组成,并对鲨鱼硫酸软骨素(shark-CS)4S/6S(N-乙酰半乳糖胺上4-硫酸化基团/N-乙酰半乳糖胺上6-硫酸化基团)比值进行探讨。方法通过酶解液相色谱法及文献比较对鲨鱼来源的硫酸软骨素二糖组成进行分析。... 详细信息

目的研究鲨鱼来源硫酸软骨素的二糖组成,并对鲨鱼硫酸软骨素(shark-CS)4S/6S(N-乙酰半乳糖胺上4-硫酸化基团/N-乙酰半乳糖胺上6-硫酸化基团)比值进行探讨。方法通过酶解液相色谱法及文献比较对鲨鱼来源的硫酸软骨素二糖组成进行分析。结果鲨鱼硫酸软骨素主要由6-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-6S)、4-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-4S)、2,6-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-2,6diS)以及无硫酸化的软骨素二糖(ΔDi-0S)组成,其百分含量分别为28%~65%、10%~44%、9%~25%、0.5%~23%。Shark-CS 4S/6S比值不超过0.8。结论提出Shark-CS 4S/6S比值的正确计算方法,解决了数据相互矛盾的问题。指出USP43中关于shark-CSΔDi-6S峰面积百分比大于ΔDi-4S峰面积百分比的不合理规定,为USP43修订提供参考与依据。

关键词：鲨鱼软骨硫酸软骨素二糖组成 4S/6S

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猪脑来源糖胺聚糖的分离纯化及精细组成分析

中国新药杂志 2019年第6期28卷 726-731页

作者：金鑫王晨赵小亮李国云于广利海洋药物教育部重点实验室中国海洋大学青岛266003 山东省糖科学与糖工程重点实验室中国海洋大学医药学院青岛266003

目的:从猪脑中提取分离糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAGs),并进行精细结构分析。方法:猪脑组织经脱脂、蛋白酶酶解后,经氯代十六烷基吡啶(CPC)富集,乙醇沉淀获得糖胺聚糖粗品。利用Q-Sepharose Fast Flow离子交换柱纯化,获得7个组分(P1... 详细信息

目的:从猪脑中提取分离糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAGs),并进行精细结构分析。方法:猪脑组织经脱脂、蛋白酶酶解后,经氯代十六烷基吡啶(CPC)富集,乙醇沉淀获得糖胺聚糖粗品。利用Q-Sepharose Fast Flow离子交换柱纯化,获得7个组分(P1～P7)。所得分级样品分别经肝素裂解酶与硫酸软骨素裂解酶酶解,2-氨基吖啶酮(AMAC)荧光标记后,利用液质联用方法分析其精细结构。结果:猪脑GAGs粗品中主要获得硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)、硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)和少量透明质酸(hyaluronic acid,HA),含量分别为307,293和18 mg·kg^(-1)。P2～P4组分GAGs含量较少; P5～P7组分CS和HS含量相当,CS中以ΔUA-GalNAc4S为主; HS组成以ΔUA-GlcNAc为主,电荷密度略低,未获得肝素组分。结论:基于液质联用技术分析猪脑组织的精细结构,为动物来源糖胺聚糖的研究提供依据。

关键词：猪脑组织分离纯化糖胺聚糖二糖组成精细结构

3种鱼鳃中糖胺聚糖的分离纯化及细微结构比较分析

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中国海洋药物 2014年第5期33卷 1-8页

作者：祝贺张玉倩陈璇郎银芝吕友晶张晓丛大鹏于广利中国海洋大学海洋药物教育部重点实验室山东省糖科学与糖工程重点实验室山东青岛266003

目的从狭鳕（Alaska pollack）、褐牙鲆（Bastard halibut）和真鲷（Red seabream）3种鱼鳃中提取分离糖胺聚糖并对其细微结构进行比较分析。方法利用酶法降解并以阴离子交换色谱法分离纯化糖胺聚糖,通过单糖组成和醋酸纤维素薄膜电泳... 详细信息

目的从狭鳕（Alaska pollack）、褐牙鲆（Bastard halibut）和真鲷（Red seabream）3种鱼鳃中提取分离糖胺聚糖并对其细微结构进行比较分析。方法利用酶法降解并以阴离子交换色谱法分离纯化糖胺聚糖,通过单糖组成和醋酸纤维素薄膜电泳对其种类进行鉴别,采用高效液相色谱法对其相对分子量和二糖组成进行比较分析,最后利用核磁共振波谱法（1 H-NMR）对其结构进行表征。结果从3种鱼鳃组织中提取分离得到54种多糖组分,其中18种是电荷和分子量均一的糖胺聚糖,它们集中在0.8mol·L-1 NaCl洗脱部分（P4）和1.0mol·L-1 NaCl洗脱部分（P5）,占多糖总量的17.4%～58.4%;P4主要为硫酸软骨素C（CSC）,P5主要为硫酸软骨素A（CSA）和杂合硫酸软骨素（HyCS）,尤其,与牛气管来源CSA比较,HyCS的4S/6S比和电荷密度均较大。结论狭鳕、褐牙鲆和真鲷鱼鳃组织中的糖胺聚糖主要为CSA、CSC和HyCS。

关键词：鱼鳃糖胺聚糖杂合硫酸软骨素二糖组成核磁共振氢谱

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鼠肝硫酸乙酰肝素生化结构的试验分析

中国现代医学杂志 2007年第18期17卷 2185-2188页

作者：周少波刘会春李宗狂鲁贻民周磊安徽省蚌埠医学院附属医院肝胆外科安徽蚌埠233004

目的评估一种硫酸乙酰肝素的生化学分析方法,并对小鼠肝脏硫酸乙酰肝素的二糖组成及分子量进行生化分析。方法充分利用硫酸乙酰肝素的物理化学特点,进行提取及纯化。用酶降解及2-AB标记后,行高效液相色谱分析。所得色谱与二糖标准色谱... 详细信息

目的评估一种硫酸乙酰肝素的生化学分析方法,并对小鼠肝脏硫酸乙酰肝素的二糖组成及分子量进行生化分析。方法充分利用硫酸乙酰肝素的物理化学特点,进行提取及纯化。用酶降解及2-AB标记后,行高效液相色谱分析。所得色谱与二糖标准色谱比较得出样品的二糖组成,与分子量色谱比较得出样品的分子量。结果纯化提取的小鼠肝脏糖胺聚糖经肝素酶消化后,可获得相近的二糖含量及二糖组成。0S二糖,含量最高为(7.01±0.81)pmol/mg干重,占二糖总量的58.27%,其次为NS二糖,含量为(3.47±0.99)pmol/mg,占28.27%,再次依次为6S二糖[(0.85±0.99)pmol/mg,6.87%],Tris二糖[(0.50±0.33)pml/mg,3.85%],S1二糖(0.21pmol/mg,1.65%)和S2二糖(0.14pmol/mg,1.1%)。硫酸乙酰肝素二糖总量为(12.17±2.44)pmol/mg。硫酸乙酰肝素的分子量大小约为28kD。结论采用该文提取纯化方法的硫酸乙酰肝素纯度高,得出的小鼠肝脏硫酸乙酰肝素二糖组成及分子量可信度高,适于用来分析各种肝脏疾病时硫酸乙酰肝素的生化改变。

关键词：硫酸乙酰肝素二糖组成链长糖胺聚糖

平颏海蛇皮中新型硫酸皮肤素的分离纯化和结构表征

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中国海洋药物 2018年第1期37卷 7-14页

作者：白明月王清池邓世明赵峡中国海洋大学海洋药物教育部重点实验室山东省糖科学与糖工程重点实验室医药学院山东青岛266003 青岛海洋生物医药研究院山东青岛266071 青岛海洋国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室山东青岛266237 海南大学海洋学院海南海口570228

目的从平颏海蛇皮中提取分离糖胺聚糖(GAGs),并对其结构进行初步表征。方法对海蛇皮进行脱脂处理后,采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶联合酶解提取粗多糖,采用氯代十六烷基吡啶(CPC)沉淀和Q-Sepharose Fast Flow离子交换树脂对粗多糖进行分离... 详细信息

目的从平颏海蛇皮中提取分离糖胺聚糖(GAGs),并对其结构进行初步表征。方法对海蛇皮进行脱脂处理后,采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶联合酶解提取粗多糖,采用氯代十六烷基吡啶(CPC)沉淀和Q-Sepharose Fast Flow离子交换树脂对粗多糖进行分离纯化。运用醋酸纤维素薄膜电泳分析其GAGs种类,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生高效液相色谱(HPLC)法分析其单糖组成,利用硫酸软骨素酶降解结合质谱和强阴离子交换色谱(SAX-HPLC)法分析其二糖组成。结果获得了2种GAGs纯化组分,并对其中1种含量较高的纯化组分(HSAP-2)进行了初步结构表征。HSAP-2中含有4种二糖,主要为单硫酸化二糖(4S和6S);单糖组成中含有艾杜糖醛酸(IdoA)、葡萄糖醛酸(GlcA)和乙酰氨基半乳糖(GalNAc);是1种高度杂合的新型硫酸皮肤素(DS)。结论从平颏海蛇皮中分离纯化获得了1种结构新颖的DS,为平颏海蛇多糖结构与生物活性的深入研究提供了基础。

关键词：平颏海蛇糖胺聚糖分离纯化二糖组成

2型糖尿病大鼠肾脏糖胺聚糖组成和结构的变化

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2型糖尿病大鼠肾脏糖胺聚糖组成和结构的变化

作者：王皓中国海洋大学

学位级别：硕士

糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAGs),如硫酸软骨素A(Chondroitin sulfate A,CSA),硫酸软骨素B(Chondroitin sulfate B,CSB)或硫酸皮肤素(Dermatan sulfate,DS),硫酸软骨素C(Chondroitin sulfate C,CSC),肝素(Heparin,HP),硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)以及透明质酸(Hyaluronic acid,HA)等,是生物体中一类重要的生物大分子,广泛存在于细胞表面和细胞外基质中。在很多癌症中,均发现糖胺聚糖的含量、组成、分子大小及分子细微结构等发生不同程度的变化,但对于2型糖尿病的研究并不多。因此,本论文的目的在于通过对2型糖尿病肾脏糖胺聚糖组成和结构的研究,揭示在2型糖尿病的发生发展过程中糖胺聚糖的生物学作用。本论文以高脂饲料加果糖水饲喂诱发胰岛素抵抗,然后注射小剂量链脲菌素(streptozocin,STZ)的方法以构建2型糖尿病Wistar大鼠模型。模型组大鼠血糖为25.0±2.8 mmol/L,远高于正常组4.0±0.4 mmol/L(P糖尿病标准,成功建立了2型糖尿病大鼠模型。本论文以大鼠肾脏为原料,对组织中糖胺聚糖的提取、分离纯化的方法进行了探索,采用丙酮-氯仿脱脂,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶联合酶解的方法,从肾脏中提取出微量的糖胺聚糖并通过透析、离子交换色谱、凝胶过滤色谱进行了纯化。本论文对大鼠肾脏组织中微量糖胺聚糖组成分析方法进行了探索,分别以咔唑法分析糖胺聚糖总含量,HPGPC法分析其分子量,并通过比较阴离子色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳、醋酸纤维素薄膜电泳,建立了醋酸纤维素薄膜电泳灰度积分定量糖胺聚糖各组分的方法。利用建立的方法对糖尿病和正常大鼠肾脏糖胺聚糖进行分析,发现糖尿病大鼠和正常大鼠肾脏糖胺聚糖均由硫酸皮肤素和硫酸乙酰肝素组成;糖尿病大鼠糖胺聚糖总含量较正常大鼠增多(P糖胺聚糖细微结构进行了分析,采用特异的糖酶将糖胺聚糖各组分水解为二糖,通过高效液相离子交换色谱将各二糖分离并确定其含量。结果表明,糖尿病大鼠糖尿病组硫酸软骨素二糖中非硫酸化二糖较正常组有明显增加(P二硫酸化和三硫酸化二糖则较糖尿病组有显著降低(P糖尿病组硫酸乙酰肝素二糖中N-乙酰化二糖较正常组明显增加(P二糖则明显降低(P糖尿病大鼠肾脏糖胺聚糖的组成变化及各成分结构的差异,这些差异为揭示在2型糖尿病的发生发展过程中肾脏糖胺聚糖的结构与生物学作用关系提供了有用信息。

关键词： 2型糖尿病大鼠肾脏硫酸软骨素硫酸乙酰肝素结构二糖组成

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一种鉴别粗品肝素钠不同种属来源的简便方法

食品与药品 2015年第5期17卷 318-323页

作者：马志华李志敏姬胜利杜旭召白文举崔洁河北常山生化药业股份有限公司河北石家庄050800

目的采用SAX-HPLC快速鉴别不同种属来源的粗品肝素钠。方法通过肝素酶酶解不同种属来源的粗品肝素钠,以其酶解后的二糖组份为考察对象,通过SAX HPLC法比较二糖的相对组成,鉴定种属来源。同时在猪来源肝素中分别添加不同比例(5%,10%,15%,... 详细信息

目的采用SAX-HPLC快速鉴别不同种属来源的粗品肝素钠。方法通过肝素酶酶解不同种属来源的粗品肝素钠,以其酶解后的二糖组份为考察对象,通过SAX HPLC法比较二糖的相对组成,鉴定种属来源。同时在猪来源肝素中分别添加不同比例(5%,10%,15%,20%,25%)的牛来源肝素或羊来源肝素,经肝素酶酶解后,通过SAX HPLC法鉴别在猪来源肝素中是否能快速检出不同种属来源的其他肝素。结果对于不同种属来源的粗品肝素钠,它们的二糖组成具有显著差异;若猪来源肝素混入5%羊来源肝素,即可通过其二糖组成判断。结论此法操作简便,成本较低,可用于不同种属来源的粗品肝素钠的定性检测。

关键词：粗品肝素钠二糖组成 SAX-HPLC 种属

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安康鱼鱼骨糖胺聚糖的提取及组成分析

食品与药品 2016年第6期18卷 391-393页

作者：陈磊侯重文陈勉刘飞朱希强凌沛学山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室山东济南250101 山东福瑞达医药集团公司山东济南250101

目的提取安康鱼鱼骨中的糖胺聚糖并分析其二糖组成。方法以碱解-酶解法提取安康鱼头骨中的糖胺聚糖,检测提取物中总糖醛酸、总氮、总硫含量,并进行红外检测及高效液相色谱(HPLC)分析。结果提取物总硫含量与硫酸软骨素差别较大,红外图谱... 详细信息

目的提取安康鱼鱼骨中的糖胺聚糖并分析其二糖组成。方法以碱解-酶解法提取安康鱼头骨中的糖胺聚糖,检测提取物中总糖醛酸、总氮、总硫含量,并进行红外检测及高效液相色谱(HPLC)分析。结果提取物总硫含量与硫酸软骨素差别较大,红外图谱中指纹区域与硫酸软骨素标准图谱不符,酶解液相图谱与硫酸软骨素不同。结论该提取物并非硫酸软骨素,而是一种非硫酸化的糖胺聚糖。

关键词：硫酸软骨素糖胺聚糖二糖组成安康鱼