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二妙散对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞分化的影响

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中国实验方剂学杂志 2023年第2期29卷 66-72页

作者：何莲花栾慧杰何娟王小成虎义平王庆文北京大学深圳医院广东深圳518036 广州中医药大学第四临床医学院广东深圳518033 深圳华润三九医药贸易有限公司广东深圳518109

目的:观察古代经典名方二妙散(EMS)对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎(CIA)中辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)分化的影响。方法:按体质量将20只DBA/1小鼠随机分为正常组、CIA组,EMS(5.4 g·kg^(-1))组及甲氨蝶呤(MTX,0.5 mg·kg^(-1)... 详细信息

目的:观察古代经典名方二妙散(EMS)对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎(CIA)中辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)分化的影响。方法:按体质量将20只DBA/1小鼠随机分为正常组、CIA组,EMS(5.4 g·kg^(-1))组及甲氨蝶呤(MTX,0.5 mg·kg^(-1))组。CIA组、EMS组及MTX组在第1天以等体积牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂免疫DBA/1小鼠,于第21天以等体积牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂于尾根部有别于第1次免疫部位免疫DBA/1小鼠建立CIA模型(此为第2次免疫),并于第2次免疫当天开始灌胃给药,除MTX为每周3次外,其余每天1次,共给药28 d。第22天开始观察CIA小鼠的关节红肿等症状并进行关节炎评分,第49天取材后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察CIA小鼠关节滑膜炎症的情况;免疫荧光(IF)双标法检测CIA小鼠关节中CD4+T细胞中Th17细胞标志物白细胞介素-17(IL-17)和Treg细胞标志物叉头框转录因子P3(FoxP3)在关节滑膜中的表达情况;流式细胞术检测小鼠脾脏及淋巴结中Th17和Treg的细胞比例情况。结果:与正常组比较,CIA组小鼠关节滑膜炎症情况明显,小鼠关节结构严重紊乱,关节软骨及骨破坏明显,骨侵蚀严重(P<0.01);小鼠关节组织中Th17/Treg值显著升高(P<0.01);小鼠脾脏及淋巴结中Th17的细胞表达比例显著增高(P<0.01),Treg细胞表达比例显著减少(P<0.01);与CIA组比较,EMS组和MTX组两组小鼠关节结构均相对正常,骨侵蚀、骨破坏较轻,关节面相对完整光滑;EMS组和MTX组两组中Th17/Treg值显著降低(P<0.01);小鼠脾脏及淋巴结组织中,EMS组、MTX组Th17细胞表达比例显著降低(P<0.01),Treg细胞的表达比例显著增加(P<0.01)。结论:EMS通过调节Th17/Treg平衡,抑制CIA小鼠中Th17细胞的表达,促进Treg细胞的表达,进而治疗RA。

关键词：二妙散胶原诱导型关节炎辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg) 分化

二妙散对TNF-α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞功能的影响

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中国实验方剂学杂志 2020年第5期26卷 11-17页

作者：何莲花覃清霞王晗王庆文北京大学深圳医院广东深圳518036

目的:二妙散(EMS)对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、迁移、黏附、侵袭、分泌功能的作用及其可能机制。方法:TNF-α(20μg·L^-1)体外诱导RA患者FLS,加入不同质量浓度二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L^... 详细信息

目的:二妙散(EMS)对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、迁移、黏附、侵袭、分泌功能的作用及其可能机制。方法:TNF-α(20μg·L^-1)体外诱导RA患者FLS,加入不同质量浓度二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L^-1)作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法,transwell迁移、黏附及侵袭实验检测FLS细胞的增殖活性、迁移、黏附及侵袭能力,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中白细胞介素(IL)^-1β的含量。提取FLS中的蛋白,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Janus激酶1(p-JAK1),p-信号转导与转录激活因子(STAT)1,p-STAT6的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,TNF-α(20μg·L^-1)能增加FLS细胞的增殖、迁移、黏附、侵袭能力及IL^-1β分泌(P二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L^-1)作用24 h对TNF-α诱导的FLS细胞增殖活性没有明显影响,作用24 h内还能明显降低TNF-α诱导升高的FLS细胞迁移、黏附、侵袭能力及分泌IL^-1β(P二妙散能明显降低p-JAK1,p-STAT1,p-STAT6的表达水平(P二妙散可降低FLS细胞增殖、迁移、黏附、侵袭及IL^-1β的分泌,而其机制可能与JAK/STAT信号通路相关。

关键词：二妙散滑膜成纤维细胞迁移侵袭黏附

二妙散通过α7nAChR-JAK2/STAT3途径改善胶原诱导性关节炎大鼠炎症的免疫学机制

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中国中药杂志 2024年第13期49卷 3591-3599页

作者：刘静淑岳进茹李玉彤李振山西中医药大学基础医学院山西晋中030619 络病理论创新转化全国重点实验室河北石家庄050035 山西白求恩医院(山西医学科学院同济山西医院) 山西医科大学第三医院山西太原030032

探讨二妙散通过α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAchR)-Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)途径改善类风湿关节炎大鼠炎症的免疫学机制。56只雌性Wistar大鼠随机分为正常(HG)组、胶原诱导性关节炎模型(CM)组、迷走神经切断(VA... 详细信息

探讨二妙散通过α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAchR)-Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)途径改善类风湿关节炎大鼠炎症的免疫学机制。56只雌性Wistar大鼠随机分为正常(HG)组、胶原诱导性关节炎模型(CM)组、迷走神经切断(VA)组、假手术(SH)组、二妙散治疗模型(EM)组、二妙散治疗迷走神经切断(EV)组、二妙散治疗假手术(ES)组,每组8只。除HG组外,其他组均构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,造模成功后进行颈部单侧迷走神经切断术及假手术(仅分离迷走神经),术后7 d开始给药治疗,持续治疗35 d。记录大鼠体质量及关节情况,观察大鼠脾脏病理学变化,ELISA检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,qRT-PCR、Western blot和免疫组化检测脾脏中α7nAchR-JAK2/STAT3通路核心基因mRNA及蛋白表达。结果显示,CM组对比HG组、VA组对比CM组和SH组,大鼠体质量显著降低(P二妙散通过迷走神经激活α7nAChR介导的JAK2/STAT3途径改善CIA大鼠炎症,提示α7nAchR-JAK2/STAT3途径可能是治疗类风湿关节炎的潜在靶标。

关键词： α7nAChR-JAK2/STAT3 胆碱能抗炎通路类风湿关节炎迷走神经二妙散

二妙散对大鼠骨髓来源的巨噬细胞M1/M2极化的影响

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中国实验方剂学杂志 2020年第11期26卷 71-77页

作者：何莲花覃清霞王晗何文成王庆文北京大学深圳医院广东深圳518036

目的:探索二妙散(EMS)对脂多糖(LPS)+干扰素(IFN)-γ诱导大鼠骨髓来源巨噬细胞(Macrophage)M1极化及白细胞介素(IL)-4+IL-13诱导M2极化的影响。方法:体外提取大鼠骨髓来源的单核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF),诱导成巨噬细胞(F4/8... 详细信息

目的:探索二妙散(EMS)对脂多糖(LPS)+干扰素(IFN)-γ诱导大鼠骨髓来源巨噬细胞(Macrophage)M1极化及白细胞介素(IL)-4+IL-13诱导M2极化的影响。方法:体外提取大鼠骨髓来源的单核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF),诱导成巨噬细胞(F4/80标记),加入LPS+IFN-γ,诱导其向M1型巨噬细胞极化;加入IL-4和IL-13,诱导其向M2型巨噬细胞极化;加入不同浓度二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L^-1)作用后,采用免疫荧光分别检测M1(CD68及iNOS标记)及M2(CD206及Arginase标记)表型,检测二妙散对大鼠骨髓来源的巨噬细胞M1/M2极化的影响。结果:与空白组比较,LPS+IFN-γ能显著增加M1的极化(P二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L^-1)作用24 h对LPS+IFN-γ诱导的M1极化具有明显抑制作用(P二妙散可抑制LPS+IFN-γ诱导的M1极化,而对IL-4+IL-13诱导的M2极化没有影响。

关键词：二妙散类风湿关节炎骨髓来源巨噬细胞 M1/M2极化

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二妙散对巨噬细胞分化的调控作用研究

中国现代应用药学 2019年第8期36卷 920-923页

作者：梁爽陈柏书朱美玲赵彩萍张贵育芦娟刘翠玲广州中医药大学附属宝安中医院广东深圳518133

目的研究二妙散对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞分化的影响。方法噻唑蓝(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法测定二妙散水煎液对细胞活力的影响;将LPS(100ng·mL^(-1))及不同浓度(0.1,1.0,10mg·mL^(-1))的二妙散水煎液共同作用RAW264.7细胞后,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)检测上清液中肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)、白介素-10(interleukin10,IL-10)的含量,实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qPCR)检测RAW264.7细胞中白介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β),IL-6的mRNA水平,Western blot检测RAW264.7细胞NOS2的蛋白表达情况。结果二妙散水煎液在0.01～100mg·mL^(-1)内对RAW264.7细胞无明显毒性。与LPS诱导的模型组相比,二妙散水煎液能明显降低细胞上清液中TNF-α的含量(P二妙散可通过抑制巨噬细胞向M1促炎方向分化,从而发挥抗炎作用。

关键词：二妙散巨噬细胞分化炎症

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二妙散治疗类风湿关节炎的作用机制

中国组织工程研究 2022年第5期26卷 742-748页

作者：赵雨薇高玉亭李振郝慧琴山西中医药大学基础医学院山西省晋中市030600 山西中医药大学中西医结合基础实验室山西省晋中市030600

背景:传统复方中药二妙散治疗类风湿关节炎具有良好的效果,已有研究证明其具有抑制血管新生的作用,延缓病情发展,但其作用机制尚不明确。目的:基于网络药理学方法和分子对接分析二妙散治疗类风湿关节炎的药理机制,为经典方剂的治疗机制... 详细信息

背景:传统复方中药二妙散治疗类风湿关节炎具有良好的效果,已有研究证明其具有抑制血管新生的作用,延缓病情发展,但其作用机制尚不明确。目的:基于网络药理学方法和分子对接分析二妙散治疗类风湿关节炎的药理机制,为经典方剂的治疗机制研究及临证运用提供参考依据。方法:通过中医药系统药理学平台(TCMSP)获取苍术、黄柏的主要化学成分及其靶点,根据ADME筛选中药活性组分;通过Gene Cards,OMIM,TTD,DRUGBANK数据库获取类风湿关节炎主要靶点,利用String平台进行蛋白质相互作用分析,构建PPI网络并挖掘网络中潜在的蛋白质功能模块。运用Metascape平台分析"药物-成分-靶点"及其参与的生物学过程及信号通路,然后使用Cytoscape 3.8.0软件构建"二妙散成分-类风湿关节炎靶点-通路"网络,最后通过Autodock软件对网络中度值较高的药物成分与核心作用靶点进行分子对接验证。结果与结论:(1)二妙散调治类风湿关节炎的核心活性成分为槲皮素、汉黄芩素及β-谷甾醇等,核心靶点有前列腺素G/H合成酶2(PTGS2)、原癌基因蛋白(JUN)及核转录因子κB/p65(RELA)等;(2)二妙散调治类风湿关节炎的生物学通路主要作用于晚期糖基化终产物(AGE-RAGE)、有丝分裂原活性蛋白激酶(MAPK)、白细胞介素17以及肿瘤坏死因子等信号通路,主要与免疫调节、细胞凋亡、炎性反应及氧化应激有关;(3)分子对接结果证实,二妙散中槲皮素、汉黄芩素及β-谷甾醇等关键化合物与前列腺素G/H合成酶2、原癌基因蛋白和核转录因子κB/p65等关键靶点有较为稳定的结合活性;(4)文章结果初步揭示了二妙散通过多成分、多靶点、多通路调控的特点发挥治疗类风湿关节炎的分子药理学作用机制,为二妙散的作用机制研究及临床应用提供了理论基础。

关键词：二妙散中医药网络药理学分子对接类风湿关节炎靶点预测免疫调节炎性反应

二妙散对CIA大鼠关节NF-κBp50和ERK1/2表达特性的影响

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中国免疫学杂志 2020年第16期36卷 1951-1956页

作者：王泽高玉亭李振刘进赵彩虹郝慧琴(指导) 山西中医药大学第四临床学院晋中030619 山西中医药大学中西医结合基础实验室晋中030619 山西中医药大学基础医学院晋中030619

目的:探究不同浓度二妙散(EMS)对CIA大鼠关节中NF-κBp50和ERK1/2表达特性的影响。方法:构建胶原性关节炎(CIA)大鼠模型,灌胃给予不同浓度EMS,ELISA检测血清IL-6、IL-10和TNF-α表达,qRT-PCR和Western blot检测大鼠关节NF-κBp50和ERK1/... 详细信息

目的:探究不同浓度二妙散(EMS)对CIA大鼠关节中NF-κBp50和ERK1/2表达特性的影响。方法:构建胶原性关节炎(CIA)大鼠模型,灌胃给予不同浓度EMS,ELISA检测血清IL-6、IL-10和TNF-α表达,qRT-PCR和Western blot检测大鼠关节NF-κBp50和ERK1/2 mRNA和蛋白表达,免疫组化技术进行定位。结果:成功构建CIA大鼠模型,NF-κBp50、ERK1/2在不同实验组大鼠关节中均有表达,在CIA大鼠关节中的表达显著高于其他实验组(P<0.01),3.0 g/kg EMS组大鼠关节NF-κBp50、ERK1/2 mRNA和蛋白水平最高(P<0.01),大鼠关节滑膜成纤维细胞、内皮细胞、基质细胞和巨噬细胞中均检测到阳性信号(P<0.05)。结论:NF-κBp50和ERK1/2参与RA发生发展,3.0 g/kg EMS可显著抑制炎症因子、NF-κBp50和ERK1/2表达,对于阐明EMS治疗RA的作用机制具有重要意义。

关键词：二妙散类风湿关节炎大鼠 NF-κBp50 ERK1/2

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二妙散对迟发型变态反应的抑制作用

中国免疫学杂志 1993年第4期9卷 244-245页

作者：徐强陈婷朱梅芬王蓉中国药科大学中药药理教研室南京210009 中国药科大学中药理论研究室

二妙散由黄柏和苍术组成,黄柏清热,苍术燥湿,二者合用有一清一燥之妙,临床用于湿热下注、足膝红肿热痛、下肢丹毒,阴囊湿疹等证。

关键词：二妙散变态反应抑制作用

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二妙散对植皮小鼠细胞免疫功能的影响

中国病理生理杂志 1994年第1期10卷 34-36页

作者：邱全瑛杨燕玲北京中医学院微生物学教研室

本文观察了二妙散（Ｅｒ－ＭｉａｏＳａｎ，ＥＭＳ）和组成该方的单味药黄柏（ｃｏｒｔｅｘｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉ，ＣＰ）和苍术（ｒｈｉｚｏｍａａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ，ＲＡ）对植皮小鼠皮片存活时间和细胞免疫功能的影响，并... 详细信息

本文观察了二妙散（Ｅｒ－ＭｉａｏＳａｎ，ＥＭＳ）和组成该方的单味药黄柏（ｃｏｒｔｅｘｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉ，ＣＰ）和苍术（ｒｈｉｚｏｍａａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ，ＲＡ）对植皮小鼠皮片存活时间和细胞免疫功能的影响，并以抗小鼠胸腺细胞血清（ａｎｔｉｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓｅｒｕｍ，ＡＴＳ）作为阳性对照。结果表明：用药各组移植皮片的半数生存期均有明显的延长，与生理盐水组相比Ｐ＜０．０５～０．０１。ＥＭＳ，ＣＰ和ＡＴＳ组的细胞免疫功能明显地受到抑制，其外周血Ｔ细胞值和脾细胞毒指数与生理盐水组比较Ｐ＜０．０１～０．００１，ＲＡ组的抑制作用较弱。上述结果提示，实验用药各组植皮小鼠的细胞免疫功能都有一定抑制作用，其抑制强度的顺序为ＡＴＳ＞ＥＭＳ＞ＣＰ＞ＲＡ。

关键词：皮肤移植免疫功能二妙散