检索结果-南通市图书馆

作者：黄芙静武汉大学

学位级别：硕士

肺是一个在胚胎前期开始发育,出生后短时间内发育完全的器官,生理条件下细胞更新缓慢。肺组织可分为气道部分和肺泡部分,肺泡由一型肺泡上皮细胞及二型肺泡上皮细胞构成。二型肺泡上皮细胞亚群具有异质性,不同亚群具有不同的蛋白表达特... 详细信息

肺是一个在胚胎前期开始发育,出生后短时间内发育完全的器官,生理条件下细胞更新缓慢。肺组织可分为气道部分和肺泡部分,肺泡由一型肺泡上皮细胞及二型肺泡上皮细胞构成。二型肺泡上皮细胞亚群具有异质性,不同亚群具有不同的蛋白表达特点及功能。SFTPC(surfactant associated protein C)二型肺泡上皮细胞亚群被定义为祖细胞,具有高表达程序性死亡蛋白配体PD-L1(programmed death-1 ligand 1)的特点。PD-L1在正常组织器官中低表达,但免疫细胞和肿瘤细胞显著表达PD-L1,通过结合PD-1向T细胞传递负向调控信号实现抑制自身免疫疾病或促进肿瘤细胞免疫逃逸的目的。因此,PD-L1作为一个有效的癌症免疫治疗靶点,已有诸多研究,但是对其在免疫系统外的组织器官中的分布及功能研究相对薄弱。在本研究中,我们对PD-L1二型肺泡上皮细胞的特点及其在肺损伤修复中发挥的功能进行了初步探索。流式分析和肺组织切片免疫荧光染色实验证明二型肺泡上皮细胞群中存在PD-L1细胞,生理状态下PD-L1细胞比例低于0.5%。与小鼠原代肺成纤维细胞体外共培养实验结果显示PD-L1抑制二型肺泡上皮细胞形成肺类器官的效率,但对其在体外分化为一型肺泡上皮细胞的能力没有显著影响。通过构建LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型,同时使用PD-L1敲入突变型小鼠,我们发现气管注射LPS导致二型肺泡上皮细胞比例降低以及PD-L1二型肺泡上皮细胞比例升高,并且这种变化与LPS使用浓度相关;二型肺泡上皮细胞中PD-L1的表达量在肺损伤修复过程中呈现先增高后降低的趋势。对PD-L1敲入突变型小鼠气管注射LPS的实验结果显示PD-L1缺失导致小鼠对LPS诱导的肺损伤刺激更加敏感,同时抑制肺损伤的修复过程。通过胸腔局部辐照构建小鼠肺损伤模型的实验结果显示,辐照肺损伤小鼠中PD-L1二型肺泡上皮细胞比例显著升高。通过分析PD-L1和PD-L1二型肺泡上皮细胞的测序数据,我们发现PD-L1细胞低表达Sftpc、Sftpb(surfactant associated protein B)等成熟二型肺泡上皮细胞特征基因以及二型肺泡上皮细胞分化标记基因Fgfr2(fibroblast growth factor receptor 2)、Etv5(ets variant 5);GSEA分析和GO分析结果显示PD-L1细胞富集细胞因子及免疫细胞调控相关通路。对博来霉素处理后二型肺泡上皮细胞谱系的单细胞测序数据进行分析,结果显示肺损伤修复中扩增的PD-L1亚群属于肺损伤相关过渡祖细胞。综上所述,我们发现小鼠二型肺泡上皮细胞中存在PD-L1细胞,PD-L1抑制二型肺泡上皮细胞在体外培养时形成类器官的能力,缺失PD-L1抑制肺损伤的修复过程,PD-L1可能通过与肺泡微环境中的免疫细胞相互作用调控二型肺泡上皮细胞的功能以及参与肺损伤修复。

关键词： PD-L1 二型肺泡上皮细胞祖细胞肺损伤修复

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lncRNA介导的SIRT1信号通路调控的Ⅱ型肺泡上皮细胞衰老在慢性阻塞性肺疾病中的作用及机制研究

lncRNA介导的SIRT1信号通路调控的Ⅱ型肺泡上皮细胞衰老在慢性阻...

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作者：刘元顺浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的收集慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)和对照组肺组织标本,探究COPD与对照组Ⅱ型肺泡上皮细胞(TypeⅡalveolar epithelial cells,AECⅡ)细胞衰老水平,体外分离、培养并鉴定AECⅡ,研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)介导的SIRT1信号通路调控的AECⅡ细胞衰老在慢性阻塞性肺疾病中的作用。方法收集COPD患者肺组织标本26例及非COPD患者肺组织标本31例,将其分为COPD组和对照组,分析比较两组患者的一般临床情况:年龄,性别,体重指数,吸烟指数,肺功能(FVC、FEV/FVC、FEV,%predicted)。HE染色观察肺组织病理学特征,衰老相关β半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色观察两组肺组织细胞SA-β-gal活性,Real-time PCR检测COPD组与对照组肺组织衰老相关的lnc RNA SAL-RNA1、lnc RNA SAL-RNA2和lnc RNA SAL-RNA3表达,衰老相关的SIRT1、FOXO3α、P53和P21 m RNA表达,免疫组化和Western blot分析SIRT1、FOXO3α、P53和P21蛋白表达。体外分离培养并电镜鉴定AECⅡ,建立香烟烟雾混悬液(Cigarette smoke extract,CSE)诱导的AECII衰老模型。建立慢病毒过表达的lnc RNA SAL-RNA1载体,分析AECⅡ组、AECⅡ+CSE组、SAL-NC+CSE组、SAL-RNA1+CSE组细胞SA-β-gal活性。结果COPD组患者肺功能指标FVC、FEV/FVC(%)、FEV(%预计值)均明显低于对照组(P肺泡面积(MAA)明显高于对照组(P肺泡数(MAN)明显小于对照组(P细胞数多于对照组,大部分染色阳性的细胞位于肺泡角部。RT-q PCR检测肺组织结果显示,Lnc RNA SAL-RNA2和Lnc RNA SAL-RNA3在COPD组高表达(P型排列。透射电子显微镜鉴定,可清楚观察到AECII细胞内特征性嗜饿板层小体结构,呈同心圆状。CSE可以呈浓度依赖的诱导AECⅡ细胞SIRT1 m RNA下调,呈浓度和时间依赖的诱导衰老相关β-半乳糖苷酶(SAβ-gal)活性增加。Lnc RNA SAL-RNA1慢病毒过表达能够延缓CSE诱导的AECⅡ中SA-β-gal活性上调。结论COPD患者肺组织中细胞衰老水平上调,Lnc RNA SAL-RNA1慢病毒过表达能够延缓CSE诱导的AECⅡ细胞衰老。

关键词：慢性阻塞性肺疾病长链非编码RNA SIRT1 二型肺泡上皮细胞细胞衰老

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非编码RNA与特发性肺纤维化进程中的干细胞异常

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中国组织工程研究 2023年第1期27卷 130-137页

作者：黄彬郑金旭张军江苏大学附属医院呼吸与危重症医学科江苏省镇江市212001 江苏大学附属澳洋医院呼吸与危重症医学科江苏省苏州市215600

背景:非编码RNA随着高通量技术的发展而逐渐引发关注,其广泛参与呼吸系统各疾病病程。特发性肺纤维化进程伴随着干细胞功能异常,近来研究表明非编码RNA与干细胞功能异常存在联系,进而影响肺纤维化进展。以非编码RNA为靶点的基因疗法暗... 详细信息

背景:非编码RNA随着高通量技术的发展而逐渐引发关注,其广泛参与呼吸系统各疾病病程。特发性肺纤维化进程伴随着干细胞功能异常,近来研究表明非编码RNA与干细胞功能异常存在联系,进而影响肺纤维化进展。以非编码RNA为靶点的基因疗法暗示了阻断纤维化过程的可能性。目的:总结非编码RNA在特发性肺纤维化干细胞功能异常和治疗中的研究进展。方法:以“IPF,Stem cells,miRNA,lncRNA,circRNA,treatment”为英文检索词,以“特发性肺纤维化、干细胞、miRNA、lncRNA、circRNA、治疗”为中文检索词,检索PubMed、Wiley InterScience、中国知网和万方数据库,范围囊括近10年的文献,然后依据纳入和排除标准进行筛选,最终纳入82篇文献进行分析。结果与结论:①文章首次总结了近年来非编码RNA在特发性肺纤维化的干细胞异常机制中的相关性研究,揭示了miRNA,lncRNA及circRNA共同调控了干细胞的异常激活、分化等活动,并且miRNA常作为后两者作用的中心环节。②现有的临床试验一定程度上肯定了干细胞移植疗法治疗特发性肺纤维化的安全性,但在疗效方面,仅稍改善了患者弥散功能却未能明确缓解纤维化病变的程度,其结果还需要更多设立安慰剂对照的随机试验来验证。③靶向非编码RNA的基因治疗优势在于具有多基因调控特性,可以从上游干预干细胞异常,目前其在体内外实验已取得突破性进展,并被证实与部分药物的作用靶点相关。④然而,特发性肺纤维化基因疗法的缺点是只能产生短期效应,同时其面临着有效剂量、体内稳定性及输送等问题,这些问题还需未来研究进一步解决。⑤总之,虽然非编码RNA疗法自身存在缺陷,但也不失为一种改善肺纤维化干细胞功能异常的新途径,将其与干细胞移植结合,取长补短,可能发挥更好的疗效。

关键词：特发性肺纤维化干细胞微RNA 长链非编码RNA 环状RNA 二型肺泡上皮细胞间充质干细胞成纤维细胞

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