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二去水卫矛醇对人肺癌细胞株体外抗癌活性及机制探讨

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中国实验方剂学杂志 2016年第10期22卷 122-127页

作者：苏桂玉刘华钢黄慧学彭晓丽梁乔芳徐红娟王小洁广西中医药大学药学院南宁530299 广西医科大学药学院南宁530021

目的:研究二去水卫矛醇(DAG)对人肺癌细胞株的体外增殖及凋亡的影响。方法:Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测DAG对11株人肺癌细胞株Calu-1,NCI-H1650,NCI-H358,NCI-H1299,HCC827,PC-9,A549,NCI-H661,NCI-H292,95-D和NCI-H446的体外增殖抑制率,筛选出抑制率相对较高且生长状态良好的细胞;应用台盼蓝拒染法检测DAG作用后的细胞存活率,透射电镜观察细胞凋亡亚显微结构的改变,实时定量荧光PCR(Real-time PCR)检测DAG对细胞内B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达水平的影响。结果:DAG对11株肺癌细胞株均有明显的抑制作用,并呈现出良好的浓度-效应相关性,与空白组比较,随着浓度的增加,细胞的增殖抑制率上升(P<0.01);台盼蓝拒染实验显示随着药物浓度的增加,蓝染细胞数量增多,即死亡或细胞膜遭到破坏的细胞增多;药物作用48 h以后,透射电镜下可见凋亡细胞整体圆缩,微绒毛脱落,核固缩、边集,核内出现高电子密度的异染色质,浓缩成块状,边集于核膜,线粒体肿胀,细胞内出现空泡样变;Real-time PCR结果显示,促凋亡基因Bax表达上调,抗凋亡基因Bcl-2表达下调,Caspase-3被激活。结论:DAG能够抑制肺癌细胞的增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调Bax,下调Bcl-2,激活Caspase-3有关。

关键词：二去水卫矛醇人肺癌细胞抗癌活性

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二去水卫矛醇对血管生成影响的实验研究

二去水卫矛醇对血管生成影响的实验研究

作者：王小洁广西医科大学

学位级别：硕士

目的:(1)研究抗肿瘤药物二去水卫矛醇(DAG)对人脐静脉血管内皮细胞HUVEC增殖的抑制作用的影响。(2)研究抗肿瘤药物二去水卫矛醇对人脐静脉血管内皮细胞HUVEC迁移和管腔形成的影响。(3)通过检测相关基因表达的变化,探讨二去水卫矛醇抗血... 详细信息

目的:(1)研究抗肿瘤药物二去水卫矛醇(DAG)对人脐静脉血管内皮细胞HUVEC增殖的抑制作用的影响。(2)研究抗肿瘤药物二去水卫矛醇对人脐静脉血管内皮细胞HUVEC迁移和管腔形成的影响。(3)通过检测相关基因表达的变化,探讨二去水卫矛醇抗血管生成的可能机制。(4)利用斑马鱼为模型,探讨二去水卫矛醇的抗血管生成作用及其可能的机制。方法:(1)DAG对体外人脐静脉血管内皮细胞HUVEC增殖的影响。(1)建立HUVEC细胞培养体系,应用MTT法对细胞增殖抑制率进行检测,计算增殖抑制率及半数抑制浓度IC,由半数抑制浓度筛选后续实验浓度;(2)采用倒置显微镜观察不同浓度的DAG(0.00μg/ml、10.00μg/ml、20.00μg/ml、40.00μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)处理HUVEC细胞24h后,细胞形态的变化,不给药组为空白对照组。(2)DAG对人脐静脉血管内皮细胞HUVEC迁移和管腔形成的影响。(1)划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移情况;(2)Matrigel胶实验检测HUVEC细胞管腔形成情况。(3)DAG抑制新血管生成的作用机制。以不同浓度的DAG作用于HUVEC细胞24h后:(1)釆用Real-time PCR技术检测HUVEC细胞内VEGFA、VEGFR-2、FGF-2、MMP-2、MMP-9的m RNA表达水平;(2)釆用ELISA法检测HUVEC细胞上清液中VEGF、FGF-2蛋白的表达水平;(3)釆用免疫组化法检测HUVEC细胞中VEGF、FGF-2蛋白的表达水平;(4)采用Western blot法检测HUVEC细胞中MMP-2的蛋白表达水平。(4)利用斑马鱼为模型检测DAG的抗血管生成作用。(1)NBT/BCIP血管染色法,检测DAG对斑马鱼胚胎肠下静脉血管生成情况的影响;(2)釆用Real-time PCR技术检测斑马鱼胚胎内VEGFAA、VEGFR-2、FGF-2、FGFR-2的m RNA表达水平。结果:(1)MTT结果显示DAG对人脐静脉血管内皮细胞的增殖具有一定的抑制作用,并且与DAG的浓度以及作用时间具有依赖关系。(2)划痕实验、Transwell模型结果显示DAG能抑制HUVEC细胞的迁移能力。(3)Matrigel胶管腔形成实验结果显示DAG对HUVEC细胞的管腔形成有一定的抑制作用,随着药物浓度的增加,其抑制作用提高,有较好的量效关系。(4)RT-PCR、ELISA、免疫组化、WB法结果均显示DAG总体上下调促血管生成相关因子的相对表达水平。(5)NBT/BCIP血管染色结果显示,DAG抑制斑马鱼胚胎肠下静脉血管生长作用;RT-PCR法结果显示,DAG下调斑马鱼胚胎内VEGFAA、VEGFR-2、FGF-2、FGFR-2的m RNA表达水平。结论:(1)DAG对HUVEC细胞增殖、迁移、管腔形成均有抑制作用。(2)DAG下调HUVEC细胞VEGFA、VEGFR-2、FGF-2、MMP-2、MMP-9的m RNA表达水平;下调VEGF、FGF-2、MMP-2的蛋白表达水平。(3)DAG抑制斑马鱼胚胎肠下静脉血管生长;以及DAG下调斑马鱼胚胎内VEGFAA、VEGFR-2、FGF-2、FGFR-2的m RNA表达水平。

关键词：二去水卫矛醇血管生成人脐静脉血管内皮细胞斑马鱼

二去水卫矛醇体外抗肿瘤作用及诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

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二去水卫矛醇体外抗肿瘤作用及诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

作者：张慧玲广西医科大学

学位级别：硕士

目的： 1.考察抗肿瘤药物二去水卫矛醇（DAG）对肿瘤细胞的体外抗肿瘤效应。 2.研究DAG诱导肿瘤细胞SMMC-7721的凋亡作用,并探讨其诱导凋亡的作用机制。方法： 1.不同浓度的DAG处理肿瘤细胞H460, SGC-7901, BEL-7404和... 详细信息

目的： 1.考察抗肿瘤药物二去水卫矛醇（DAG）对肿瘤细胞的体外抗肿瘤效应。 2.研究DAG诱导肿瘤细胞SMMC-7721的凋亡作用,并探讨其诱导凋亡的作用机制。方法： 1.不同浓度的DAG处理肿瘤细胞H460, SGC-7901, BEL-7404和SMMC-772172h后,利用MTT法考察其对肿瘤细胞珠的体外生长抑制作用。 2.通过透射电子显微镜（TEM）观察SMMC-7721肿瘤细胞超微结构改变;并运用流式细胞术研究DAG对SMMC-7721细胞凋亡的影响。 3.采用RT-PCR法检测DAG作用SMMC-7721细胞后,相关凋亡基因Caspase-3、Bcl-2和Bax等mRNA表达水平的变化。结果： 1、DAG对H460, SGC-7901, BEL-7404和SMMC-7721肿瘤细胞有明显的体外增殖抑制作用,并呈剂量依赖关系;药物作用72h后的IC50值分别为15.98μg·mL-1,16.00μg·mL-1,16.73μg·mL-1和16.46μg·mL-1 2、以浓度为16.0μg·mL-1的DAG处理SMMC-7721细胞24h后,相比较于对照组,电镜下可见DAG组细胞出现胞体变小,染色质浓缩成团并边集等细胞早期凋亡形态特征;流式细胞仪检测结果显示,DAG作用细胞24h后,对照组的凋亡率为（3.57±0.58）%,而给药浓度为4.0μg·mL-1,8.0μg·mL-1和16.0μg·mL-1的细胞凋亡率依次为（6.49±0.70）%,（14.90±0.56）%和（22.47±1.21）%,凋亡率随DAG给药浓度增加而升高。 3、PT-PCR结果经分析可知,DAG作用于SMMC-7721细胞24h后,与对照组相比,Caspase-3、Bax和P53的mRNA表达上调,而凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达下调,Bcl-2表达变化不明显。结论： 1、DAG对H460, SGC-7901, BEL-7404和SMMC-772肿瘤细胞有明显的生长抑制作用,具有体外抗肿瘤作用。 2、DAG诱导肿瘤细胞SMMC-7721产生凋亡,其凋亡机制可能是增加了Caspase-3的mRNA表达水平,Caspase-3的表达升高可能与Bax, P53和Survivin的表达改变有关。

关键词：二去水卫矛醇 SMMC-7721 凋亡作用机制

二去水卫矛醇对肺癌NCI-H460细胞的影响及基于拓扑异构酶Ⅱ探讨其抗肿瘤作用

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二去水卫矛醇对肺癌NCI-H460细胞的影响及基于拓扑异构酶Ⅱ探讨其...

作者：黄银妹广西医科大学

学位级别：硕士

目的:评价二去水卫矛醇(dianhydrogalactitol,DAG)对肺癌NCI-H460细胞的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用机制。方法:(1)DAG对NCI-H460细胞增殖的影响。(1)采用CCK-8法、细胞克隆形成实验,计算增殖抑制率及半数抑制浓度IC50,评价DAG对NCI-H... 详细信息

目的:评价二去水卫矛醇(dianhydrogalactitol,DAG)对肺癌NCI-H460细胞的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用机制。方法:(1)DAG对NCI-H460细胞增殖的影响。(1)采用CCK-8法、细胞克隆形成实验,计算增殖抑制率及半数抑制浓度IC50,评价DAG对NCI-H460细胞的增殖抑制作用。(2)采用显微拍照观察不同浓度DAG给药48 h后,肺癌NCI-H460细胞形态的改变。(2)DAG对NCI-H460细胞迁移的影响。(1)采用划痕实验评价DAG对NCI-H460细胞横向迁移的影响。(2)采用Transwell-migration小室模型评价DAG对NCI-H460细胞纵向迁移的影响。(3)DAG对NCI-H460细胞DNA、Ca和线粒体膜电位的影响。(1)采用Hoechst 33342染色检测DAG对细胞核染色质的影响。(2)采用单细胞凝胶电泳检测DAG对细胞DNA的损伤作用。(3)采用Fluo-3 AM为Ca荧光探针,检测DAG对细胞内Ca的影响。(4)采用Rhodamine123(Rhm 123)为线粒体膜电位荧光探针,检测DAG对细胞线粒体膜电位的影响。(4)DAG对Topo Ⅱα、Topo Ⅱβ的影响。(1)采用Real-time PCR法检测拓扑异构酶Ⅱα(Topo Ⅱα)、拓扑异构酶Ⅱβ(Topo Ⅱβ)mRNA的表达水平。(2)采用Western blot法检测Topo Ⅱα、Topo Ⅱβ蛋白表达水平。(3)应用计算机模拟分子对接技术预测DAG与Topo Ⅱα、Topo Ⅱβ的相互作用。结果:(1)CCK-8法检测结果显示,DAG对NCI-H460细胞的体外抗肿瘤活性显著,与对照组比较有显著性差异,其48 h的IC50为9.68±1.02μg/mL。细胞克隆形成实验结果表明,DAG能持续抑制肿瘤细胞的增殖。(2)划痕实验和Transwell-migration小室检测结果表明,DAG能抑制肿瘤细胞的迁移。(3)Hoechst 33342检测细胞凋亡结果显示,DAG使细胞核染色质发生明显改变,与空白对照组比较,各给药组细胞均不同程度出现细胞变圆缩小、贴壁能力减弱、胞浆内颗粒边缘化甚至细胞破碎等损伤现象;此外,单细胞凝胶电泳检测出DAG可导致DNA损伤。Fluo-3 AM荧光染色结果显示,与空白对照组比较,各给药组荧光强度增强,即细胞内Ca浓度增加,说明DAG诱导细胞凋亡与细胞内Ca浓度增加有关;Rhm 123荧光染色结果显示,与空白对照组比较,各给药组荧光强度减弱,表明DAG使细胞线粒体膜电位下降,即DAG诱导细胞凋亡与线粒体膜电位下降有关。(4)Real-time PCR检测结果显示不同浓度的DAG均能明显降低Topo Ⅱα、Topo ⅡβmRNA表达量降低;Western blot检测表明,DAG明显使Topo Ⅱα、Topo Ⅱβ蛋白表达量降低,提示DAG诱导细胞凋亡与下调Topo Ⅱα、Topo Ⅱβ有关;计算机模拟分子对接显示DAG与Topo Ⅱα、Topo Ⅱβ有相互结合作用。结论:(1)DAG能显著抑制NCI-H460细胞的增殖。(2)DAG能显著抑制NCI-H460细胞的迁移。(3)DAG诱导细胞损伤与其改变细胞内Ca浓度、线粒体膜电位及DNA损伤有关。(4)作用机制研究表明DAG能降低Topo Ⅱα、Topo ⅡβmRNA和蛋白水平,并与Topo Ⅱα、Topo Ⅱβ结合,最终可能导致DNA双链断裂,引起细胞死亡。

关键词：二去水卫矛醇肺癌拓扑异构酶Ⅱ 拓扑异构酶Ⅱ抑制剂分子对接

二去水卫矛醇在裸鼠体内对人NCI-H460肺癌细胞诱导凋亡的作用及其机制研究

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二去水卫矛醇在裸鼠体内对人NCI-H460肺癌细胞诱导凋亡的作用及其...

作者：周莹广西医科大学

学位级别：硕士

目的：通过培养体外人NCI-H460肺癌细胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型,考察抗肿瘤药物二去水卫矛醇(DAG)对人NCI-H460肺癌细胞在裸鼠体内诱导凋亡的作用机制。方法：1.对数生长期的NCI-H460细胞1×107/ml,取0.2ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下建立... 详细信息

目的：通过培养体外人NCI-H460肺癌细胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型,考察抗肿瘤药物二去水卫矛醇(DAG)对人NCI-H460肺癌细胞在裸鼠体内诱导凋亡的作用机制。方法：1.对数生长期的NCI-H460细胞1×107/ml,取0.2ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下建立移植瘤模型;将裸鼠随机分成5组：***组(6只)：腹腔注射等体积生理盐水;B. DAG-D组(6只)：腹腔注射DAG 3mg/kg;C. DAG-Z组(6只)：腹腔注射DAG 6mg/kg;D. DAG-G组(6只)：腹腔注射DAG 9mg/kg;E.顺铂(DDP)组(6只)：腹腔注射DDP 3mg/kg。每天1次,连续给药7天,给药后,裸鼠颈椎脱臼死亡后,剥离瘤块待用。***染色法观察病理形态学的改变;***法检测DAG对移植瘤组织凋亡程度的影响;4.实时荧光定量PCR检测不同给药组对相关凋亡基因Bax、Bcl-2、 Caspase-3、Caspase-9、P53、Survivin、Cytm等表达的影响;5.免疫组化染色观察DAG对对移植瘤组织中Bcl-2、P53、Caspase-3蛋白表达的影响;6.蛋白印迹western blot法检测DAG对凋亡相关蛋白如Bcl-2、P53、 Caspase-3的表达的影响。结果：1.在给药之前各组裸鼠瘤体体积无明显差异;给药后各组裸鼠肿瘤的生长速度有明显差异(P水平上评价了DAG通过线粒体途径对人非小细胞肺癌细胞NCI-H460凋亡的影响。

关键词：二去水卫矛醇 NCI-H460裸鼠凋亡作用机制

二去水卫矛醇对慢性粒细胞白血病疗效的超微结构观察

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山西医学院学报 1989年第3期20卷 135-140页

作者：王济张炜芳张彰范建李建平王毓銮张文姝归薇郭宏唐泽忠张巧花山西医学院病理生理教研室山西医学院电镜室山西省肿瘤医院

本文就3例慢粒患者经DAG治疗前后骨髓及外周血中白血病细胞的光镜、电镜所见,讨论了DAG的疗效原理。认为DAG主要作用于分裂间期的幼稚粒细胞,干扰了核酸代谢,从而加速其以“凋落”的形式变性坏死。文中并对少数病理细胞的肿胀、溶解性... 详细信息

本文就3例慢粒患者经DAG治疗前后骨髓及外周血中白血病细胞的光镜、电镜所见,讨论了DAG的疗效原理。认为DAG主要作用于分裂间期的幼稚粒细胞,干扰了核酸代谢,从而加速其以“凋落”的形式变性坏死。文中并对少数病理细胞的肿胀、溶解性坏死进行了讨论。

关键词：二去水卫矛醇白血病粒细胞性

二去水卫矛醇和二乙酰二去水卫矛醇抗肿瘤作用的研究进展

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天津中医药大学学报 2021年第5期40卷 653-658页

作者：申雅娟邓楠丁辉张丽娟宋新波杨建会天津中医药大学天津301617 天士力集团有限公司天津300402

二去水卫矛醇(DAG)和二乙酰二去水卫矛醇(DADAG)在抗肿瘤方面有较强的药理作用,对白血病、脑肿瘤、肝癌、肺癌等皆有效,尤其是治疗慢性粒细胞白血病方面效果较好,鉴于其医疗价值,且DAD和DADAG生物活性多样,可以从多个方面实现抗肿瘤的作... 详细信息

二去水卫矛醇(DAG)和二乙酰二去水卫矛醇(DADAG)在抗肿瘤方面有较强的药理作用,对白血病、脑肿瘤、肝癌、肺癌等皆有效,尤其是治疗慢性粒细胞白血病方面效果较好,鉴于其医疗价值,且DAD和DADAG生物活性多样,可以从多个方面实现抗肿瘤的作用,学者们也将其作用于不同类型的肿瘤细胞,以挖掘更大的应用价值。文章通过综述其对肿瘤的作用及机制,希望能够较为全面地揭示出DAG和DADAG可能的应用方向,为其更好地应用于临床提供启示和思路。

关键词：二去水卫矛醇二乙酰二去水卫矛醇抗肿瘤

二去水卫矛醇对人非小细胞肺癌H460细胞体内抗癌活性及其机制研究

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广西医科大学学报 2022年第2期39卷 215-220页

作者：周莹刘华钢孙悦文李健哲陈清洁张小军广西中医药大学附属瑞康医院药学部南宁530001 广西医科大学药学院南宁530001

目的:研究二去水卫矛醇(DAG)对人非小细胞肺癌(NSCLC)H460细胞体内抗癌作用及其机制。方法:建立裸鼠人NSCLC H460细胞移植瘤模型,分为模型组、阳性对照组及DAG低、中、高剂量组(DAG-L组、DAG-M组、DAG-H组)。采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋... 详细信息

目的:研究二去水卫矛醇(DAG)对人非小细胞肺癌(NSCLC)H460细胞体内抗癌作用及其机制。方法:建立裸鼠人NSCLC H460细胞移植瘤模型,分为模型组、阳性对照组及DAG低、中、高剂量组(DAG-L组、DAG-M组、DAG-H组)。采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,分别采用RT-qPCR法和Western blotting法检测肿瘤组织凋亡相关基因和蛋白表达。结果:与模型组比较,DAG各剂量组和阳性对照组瘤体体积和瘤重减小,抑瘤率均高于40%,肿瘤细胞凋亡率增高(均P<0.05);DAG-M组、DAG-H组和阳性对照组Bax、Caspase-3、Caspase-9、P53 mRNA相对表达量升高,DAG-L组Caspase-9 mRNA相对表达量升高,DAG各剂量组Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量均降低,Bax、P53蛋白表达量升高(均P<0.05)。结论:DAG可抑制人NSCLC H460裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制与诱导线粒体凋亡途径有关。

关键词：二去水卫矛醇非小细胞肺癌移植瘤 H460细胞凋亡

二去水卫矛醇治疗慢性粒细胞白血病骨髓细胞周期及Ph~1染色体的变化

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四川医学 1986年第6期 342-343页

作者：廖小梅黄宗干龚懋明吴茂娥重庆医科大学第一医院

利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷替代掺入到细胞DNA的姐妹染色单体互换(SCE)技术,不仅可观察细胞SCE变化,还可准确而迅速地辨认已通过了不同细胞周期的中期分裂相,以了解细胞周期或生长动力学的变化,可用于监测化疗药物的治疗效应。本文应用此方... 详细信息

利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷替代掺入到细胞DNA的姐妹染色单体互换(SCE)技术,不仅可观察细胞SCE变化,还可准确而迅速地辨认已通过了不同细胞周期的中期分裂相,以了解细胞周期或生长动力学的变化,可用于监测化疗药物的治疗效应。本文应用此方法,观察了7例接受二去

关键词：二去水卫矛醇慢粒白血病血癌细胞生活周期细胞周期治疗后染色体