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二亚硝基哌嗪（DNP）上调HSP70-2在低转移潜能鼻咽癌6-10B细胞中的表达

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二亚硝基哌嗪（DNP）上调HSP70-2在低转移潜能鼻咽癌6-10B细胞中...

作者：彭正科中南大学

学位级别：硕士

目的：本文分析二亚硝基哌嗪(Dinitrosopiperazine, DNP)对鼻咽癌细胞热休克蛋白70-2 (Heat Shock Protein70-2,HSP70-2)表达的影响,探讨DNP参与鼻咽癌转移的分子机制。方法：1.选取来自同一母细胞的高转移潜能鼻咽癌5-8F细胞株和低转... 详细信息

目的：本文分析二亚硝基哌嗪(Dinitrosopiperazine, DNP)对鼻咽癌细胞热休克蛋白70-2 (Heat Shock Protein70-2,HSP70-2)表达的影响,探讨DNP参与鼻咽癌转移的分子机制。方法：1.选取来自同一母细胞的高转移潜能鼻咽癌5-8F细胞株和低转移潜能鼻咽癌6-10B细胞株作为研究材料,运用四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolyltertrazolium, MTT)实验分析DNP对6-10B细胞生长的影响,筛选出DNP对6-10B细胞的非毒性浓度(non-cytotoxic concentration, NCC)。2.采用非毒性浓度的DNP处理6-10B细胞,并以未处理的6-10B细胞、5-8F细胞作为对照,进行细胞生物学和分子生物学实验。3.采用细胞间接免疫荧光方法初步分析DNP对HSP70-2表达的影响,Western Blotting分析DNP诱导HSP70-2表达的量效关系。4.采用Real-time RT PCR技术检测DNP对HSP70-2基因表达的影响。5.利用SPSS18.0统计软件分析数据。结果：***实验分析DNP对鼻咽癌6-10B细胞生长的影响,结果表明DNP在高浓度(100μmol/L以上)时对鼻咽癌6-10B细胞生长增殖有明显的抑制作用(p0.05).0～100μmol/L为DNP对6-10B细胞的非毒性浓度。2.细胞间接免疫荧光实验观察DNP对鼻咽癌细胞HSP70-2表达的影响,结果显示DNP处理鼻咽癌6-10B细胞后,HSP70-2蛋白表达明显增强,细胞中的表达以胞浆为主,且DNP处理的6-10B细胞荧光强度同高转移潜能5-8F细胞一致。*** Blotting分析DNP诱导HSP70-2表达的量效关系,结果显示不同浓度(50μmol/L、100μmol/L)DNP处理的6-10B细胞,HSP70-2蛋白水平明显高于未处理6-10B细胞,且随DNP量增加而HSP70-2逐步增高(P0.05),但5-8F细胞中的表达量(1.84±0.79)高于6-10B细胞。结论：***处理6-10B细胞后,细胞中的HSP70-2蛋白水平明显增高,表明DNP能上调HSP70-2蛋白水平。***处理6-10B细胞后,细胞中的Hsp70-2基因的相对折合表达量并不增高,DNP可能不是在基因水平调控HSP70-2,提示DNP可能通过转录后调控机制上调HSP70-2蛋白表达。3.5-8F细胞中的HSP70-2蛋白水平高于6-10B细胞,提示HSP70-2可能与细胞的恶性程度(转移潜能)有关。

关键词：二亚硝基哌嗪鼻咽癌热体克蛋白70-2

二亚硝基哌嗪（DNP）介导Ezrin磷酸化促进鼻咽癌转移的分子机制研究

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二亚硝基哌嗪（DNP）介导Ezrin磷酸化促进鼻咽癌转移的分子机制研...

作者：刘娜中南大学

学位级别：硕士

目的：本文检测化学致癌物二亚硝基哌嗪(N,N'-Dinitrosopiperazine, DNP)处理鼻咽癌细胞(6-10B)后的运动侵袭能力,分析DNP对Ezrin和phos-Ezrin (phosphorylated ezrin, phos-Ezrin)表达的调控作用,探讨DNP参与鼻咽癌侵袭转移的分子机制。方法：1.鼻咽癌细胞6-10B为低转移、低成瘤鼻咽癌细胞系,来自鼻咽癌母细胞系SUNE-1,作为研究材料。来自同一母细胞系的5-8F,为高转移、高成瘤鼻咽癌细胞株,作为对照细胞。2.连续稀释法制备不同浓度DNP,将不同浓度DNP处理6-10B细胞,四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolyltertrazolium, MTT)实验分析DNP处理6-10B细胞的非毒性浓度(non-cytotoxic concentration,NCC)。全自动生化仪检测DNP处理6-10B细胞培养液乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenas, LDH),进一步确证DNP非毒性浓度。3.用DNP非毒性浓度处理6-10B细胞,Western Blotting分析DNP处理6-10B细胞后Ezrin和phos-Ezrin Thr567表达的影响。明确DNP是否诱导6-10B细胞Ezrin或phos-Ezrin Thr567表达。4.用DNP非毒性浓度处理6-10B细胞,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验分析非毒性浓度的DNP对6-10B细胞迁移运动和侵袭能力的影响。明确DNP是否促进6-10B细胞运动迁移和侵袭。5.通过尾静脉将6-10B细胞移植在BALB/c裸小鼠体内,皮下注射DNP,处理一定时间后,解剖裸鼠,观察6-10B细胞转移情况,常规病理学检测,确认6-10B细胞是否发生转移。分析DNP在体内对鼻咽癌细胞成瘤和转移的影响。6.将6-10B转移癌组织病理切片,免疫组化SP方法检测Ezrin和phos-Ezrin Thr567在裸鼠组织中的表达,分析DNP在体内对6-10B细胞Ezrin和phos-Ezrin Thr567表达的影响。7.利用SPSS17.0统计软件分析数据。结果：***实验和LDH检测结果显示,DNP在高浓度(100μ.mol/L以上)时对鼻咽癌6-10B细胞生长增殖有明显的抑制作用(P0.05)。DNP处理6-10B细胞的非毒性浓度为0～100μmol/L。2. Western Blotting分析DNP诱导Ezrin和phos-Ezrin Thr567表达,结果显示不同浓度DNP处理6-10B细胞组和未处理组Ezrin的表达无明显差异(P>0.05);而DNP处理6-10B细胞phos-EzrinThr567表达水平明显高于未处理6-10B细胞(P<0.05),且随剂量增加和处理时间延长phos-EzrinThr567逐步增高,呈现明显的处理剂量依赖性和时间依赖性。3.划痕实验结果显示,DNP处理组迁移生长细胞数明显多未处理组;Transwell迁移和侵袭实验结果表明,DNP处理组穿过过滤膜细胞数显著多于未处理组(P<0.05),这说明DNP能增强鼻咽癌6-10B细胞迁移和侵袭能力。4.6-10B细胞移植在BALB/c裸小鼠体内,DNP处理一定时间后,在裸鼠肺组织观察到瘤组织,常规病理检查证实为鼻咽癌细胞肺转移瘤,表明DNP促进6-10B细胞肺转移。5.转移癌组织免疫组化结果显示,DNP处理组裸鼠肺转移灶phos-EzrinThr567的表达明显高于对照组(P<0.05),总Ezrin蛋白表达无明显差异。提示DNP通过上调phos-EzrinThr567表达促进鼻咽癌6-10B细胞转移。结论：***诱导鼻咽癌6-10B细胞phos-EzrinThr567表达,呈现明显的剂量和时间依赖性,但总Ezrin的表达无明显变化。***促进鼻咽癌6-10B细胞迁移运动和侵袭能力,DNP可能参与了鼻咽癌侵袭转移。***促进鼻咽癌6-10B细胞裸鼠肺转移,上调转移组织phos-EzrinThr567的表达,提示DNP可能通过上调phos-EzrinThr567表达促进鼻咽癌细胞侵袭与转移：

关键词：二亚硝基哌嗪鼻咽癌埃兹蛋白磷酸化埃兹蛋白

人胚鼻咽粘膜异种移植及二亚硝基哌嗪的诱癌研究

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癌症 1992年第1期11卷 6-8,T000页

作者：吴枫沈淑静广东湛江医学院肿瘤研究室广东湛江医学院肿瘤研究室湛江 524023 湛江 524023 湛江 524023

人胚鼻咽粘膜移植于裸鼠皮下后可长期存活并保持其原有组织结构和功能,在此基础上用二亚硝基哌嗪皮下给药法诱发其癌变。在40周内,低剂量多次给药组(12例)见不典型增生6例次,原位癌1例,早期浸润癌1例;一次性给药组(11例)见不典型增生5例... 详细信息

人胚鼻咽粘膜移植于裸鼠皮下后可长期存活并保持其原有组织结构和功能,在此基础上用二亚硝基哌嗪皮下给药法诱发其癌变。在40周内,低剂量多次给药组(12例)见不典型增生6例次,原位癌1例,早期浸润癌1例;一次性给药组(11例)见不典型增生5例次,原位癌3例。用抗P_(21)单抗检测rasP_(21)蛋白表达,发现异型增生的基底细胞较正常基底细胞表达增强,可作为癌前病变的指标之一。

关键词：鼻肿瘤移植裸鼠二亚硝基哌嗪

二亚硝基哌嗪对大鼠致癌作用器官亲和性机理的初步研究

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中南大学学报(医学版) 1982年第2期 129-135页

作者：乐俊逸,潘世(宀成),姚开泰湖南医学院肿瘤研究室湖南医学院肿瘤研究室湖南医学院肿瘤研究室研究生指导老师指导老师

本文通过放射自显术显示皮下注射二亚硝基哌嗪后大鼠的鼻咽、食管、软腭和前胃等上皮早期的 DNA 合成水平变化和在大鼠的上述器官以及鼻甲上皮的 UDS 诱导效应。对比发癌与非发癌器官上皮的 DNA 合成水平的动态变化及 UDS 现象,试图阐... 详细信息

本文通过放射自显术显示皮下注射二亚硝基哌嗪后大鼠的鼻咽、食管、软腭和前胃等上皮早期的 DNA 合成水平变化和在大鼠的上述器官以及鼻甲上皮的 UDS 诱导效应。对比发癌与非发癌器官上皮的 DNA 合成水平的动态变化及 UDS 现象,试图阐明二亚致癌作用器官亲和性的机制。

关键词：大鼠 DNA 二亚硝基哌嗪致癌作用致癌性上皮器官 UDS 鼻咽侧壁亲和性

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二亚硝基哌嗪对大鼠鼻咽鳞状上皮更新的影响

湖南医学院学报 1984年第4期 317-324页

作者：陈主初潘世宬孙去病姚开泰湖南医学院肿瘤研究室湖南医学院肿瘤研究室

本文用放射自显影术对正常大鼠以及二亚硝基哌嗪（简称二亚）处理鼠诱癌过程中鼻咽鳞状上皮细胞的更新进行了观察。实验表明,正常情况下,大鼠鼻咽底壁鳞状上皮细胞移动的变化是“S”形曲线,其方程式为 y=ap0/bp0+（a-bp0）e-a（x/72）;... 详细信息

本文用放射自显影术对正常大鼠以及二亚硝基哌嗪（简称二亚）处理鼠诱癌过程中鼻咽鳞状上皮细胞的更新进行了观察。实验表明,正常情况下,大鼠鼻咽底壁鳞状上皮细胞移动的变化是“S”形曲线,其方程式为 y=ap0/bp0+（a-bp0）e-a（x/72）;二亚处理后,大鼠鼻咽底壁鳞状上皮细胞移动表现为抛物线,其方程式为 y=a+bx+cx2。同时对食道、颊部粘膜的细胞移动进行了观察。

关键词：鼻咽肿瘤疾病模型,动物二亚硝基哌嗪细胞运动更新,细胞大鼠自体放射显影

二亚硝基哌嗪上调AGR2促进鼻咽癌细胞转移

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癌变．畸变．突变 2016年第2期28卷 115-120页

作者：王巍巍唐发清李跃进珠海市人民医院/暨南大学附属珠海医院检验科广东珠海519000

目的：探讨二亚硝基哌嗪（DNP）通过调控AGR2表达参与鼻咽癌转移的分子机制。方法：以具有低转移潜能的鼻咽癌细胞6-10B作为研究材科,应用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测DNP对6-10B细胞的非毒性浓度;分别采用间接免疫荧光法、Western blot... 详细信息

目的：探讨二亚硝基哌嗪（DNP）通过调控AGR2表达参与鼻咽癌转移的分子机制。方法：以具有低转移潜能的鼻咽癌细胞6-10B作为研究材科,应用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测DNP对6-10B细胞的非毒性浓度;分别采用间接免疫荧光法、Western blot和实时荧光定量PCR法检测DNP对6-10B细胞中AGR2蛋白及m RNA表达的影响;采用针对AGR2基因的特异性小干扰RNA（si RNA）沉默6-10B细胞AGR2的表达,并用Transwell小室法检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响。结果：MTT法检测DNP对6-10B细胞的非毒性浓度为0-10.0μmol/L;8.0μmol/L DNP处理6-10B细胞后,间接免疫荧光法检测发现AGR2蛋白表达明显上调,且以在细胞质中表达为主;不同浓度的DNP处理6-10B细胞24 h或用8.0μmol/L的DNP处理6-10B细胞不同时间后,Western blot结果发现AGR2蛋白的表达水平增加且呈浓度和时间依赖性（P〈0.05）;siRNA-AGR2沉默6-10B细胞屮AGR2基因的表达后,DNP诱导6-10B细胞的侵袭及迁移能力较干扰前明显降低（P〈0.05）。结论：DNP可能通过在转录水平上调AGR2的表达,影响鼻咽癌细胞的侵袭和转移能力。

关键词：鼻咽癌二亚硝基哌嗪 AGR2 肿瘤转移

二亚硝基哌嗪诱发人胚鼻咽上皮姊妹染色单体交换的观察

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癌症 1988年第3期 167-170页

作者：李韵萍姚开泰胡友秋潘世宬湖南医学院肿瘤研究室

本实验用间接致癌物二亚硝基哌嗪(dinitrosopiperazine DNP)处理人胚鼻咽上皮细胞,以人胚肾上皮为对照,观察不同组织内DNP诱发的姊妹染色单体交换(Sistar Chromatid exchanges SCEs)的频率。结果表明:人胚鼻咽上皮可以活化DNP,表明诱发... 详细信息

本实验用间接致癌物二亚硝基哌嗪(dinitrosopiperazine DNP)处理人胚鼻咽上皮细胞,以人胚肾上皮为对照,观察不同组织内DNP诱发的姊妹染色单体交换(Sistar Chromatid exchanges SCEs)的频率。结果表明:人胚鼻咽上皮可以活化DNP,表明诱发的SCE濒率增加,具量效关系;相同剂量DNP处理后,鼻咽上皮内诱发的SCEs频率明显高于肾脏上皮细胞,表现器官特异性的SCE反应,证实了人胚鼻咽上皮细胞有活化DNP酶系的性能。

关键词：鼻咽上皮人胚 DNP SCE 鼻咽癌患者姊妹染色单体交换肾细胞二亚硝基哌嗪

二亚硝基哌嗪上调鼻咽癌细胞HSP70-2的表达及其意义

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中国癌症防治杂志 2015年第3期7卷 173-177页

作者：柳益群唐发清刘丽贤广东医学院附属佛山禅城中心医院检验科广东528031 暨南大学附属珠海医院珠海市人民医院检验科珠海519000

目的：分析二亚硝基哌嗪（dinitrosopiperazine，DNP）对鼻咽癌细胞热休克蛋白70-2（heat shock protein 70-2， HSP70-2）表达的影响，探讨DNP调控鼻咽癌细胞HSP70-2表达的意义和机制。方法以HSP70-2低表达的低转移潜能鼻咽癌细胞6-10... 详细信息

目的：分析二亚硝基哌嗪（dinitrosopiperazine，DNP）对鼻咽癌细胞热休克蛋白70-2（heat shock protein 70-2， HSP70-2）表达的影响，探讨DNP调控鼻咽癌细胞HSP70-2表达的意义和机制。方法以HSP70-2低表达的低转移潜能鼻咽癌细胞6-10B为实验对象，用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tertrazolium，MTT）法检测DNP对6-10B细胞的非毒性浓度；分别采用细胞间接免疫荧光法、Western blot法和RT-PCR技术检测分析DNP对6-10B细胞HSP70-2表达的影响。结果 DNP对鼻咽癌6-10B细胞的非毒性浓度为0～100μmol/L。经DNP处理6-10B细胞后，HSP70-2蛋白的表达显著增强，主要表达在细胞质。HSP70-2蛋白的表达与DNP处理的浓度呈剂量效应关系（P＜0.05）。DNP（50μmol/L、100μmol/L）处理组HSP70-2 mRNA的表达水平与未处理组的表达无明显差异（P＞0.05）。结论 DNP可能通过转录后调控机制上调鼻咽癌细胞HSP70-2蛋白的表达，推测DNP调控HSP70-2蛋白的表达并在鼻咽癌发生、发展中起重要作用。

关键词：鼻咽肿瘤亚硝基化合物二亚硝基哌嗪热休克蛋白70.2

二亚硝基哌嗪诱癌过程中大鼠外周血各类白细胞的改变

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中山大学学报(医学科学版) 1987年第1期 23-26+85页

作者：李锦添李博山陈倪勇中山医科大学肿瘤研究所

以二亚硝基哌嗪15mg/kg体重皮下注射,每周二次,共51次,诱发17例Wistar大鼠致癌过程中,以常规方法和ANAE法检测了不同阶段外周血中白细胞的变化。结果显示用药后90天和180天,ANAE阳性淋巴细胞(T细胞)总数均比用药前有明显的升高,其中代... 详细信息

以二亚硝基哌嗪15mg/kg体重皮下注射,每周二次,共51次,诱发17例Wistar大鼠致癌过程中,以常规方法和ANAE法检测了不同阶段外周血中白细胞的变化。结果显示用药后90天和180天,ANAE阳性淋巴细胞(T细胞)总数均比用药前有明显的升高,其中代表辅助性T细胞的TM细胞在早期即升高,而代表抑制性T细胞的TG细胞在后期升高,作者认为TM细胞和TG细胞比例的改变,即细胞免疫状况的改变可能有利于动物体内肿瘤的发生。

关键词：二亚硝基哌嗪大鼠白细胞酸性α—醋酸萘酯酶(ANAE)