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载牛乳铁蛋白肽-壳聚糖纳米粒对过氧化氢诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用

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动物营养学报 2022年第10期34卷 6726-6736页

作者：李欣牛慧詹经纬关淑文屠焰蒋林树北京农学院动物科学技术学院奶牛营养学北京市重点实验室北京102206 中国农业科学院饲料研究所北京100081

本试验以载牛乳铁蛋白肽-壳聚糖纳米粒(BLfcin-NPs)为添加剂,研究其对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)氧化损伤的保护作用。采用单因素完全随机试验设计,以BMECs为模型,采用不同浓度[0(对照组)、100、200、400、600... 详细信息

本试验以载牛乳铁蛋白肽-壳聚糖纳米粒(BLfcin-NPs)为添加剂,研究其对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)氧化损伤的保护作用。采用单因素完全随机试验设计,以BMECs为模型,采用不同浓度[0(对照组)、100、200、400、600、800、1000μmol/L]H_(2)O_(2)对BMECs分别处理0、2、4、6、8、12 h,确定构建BMECs氧化损伤模型的最佳H_(2)O_(2)浓度及作用时间。以500μg/mL的BLfcin-NPs预处理BMECs 12 h后用400μmol/L的H_(2)O_(2)处理6 h,检测BMECs内线粒体膜电位(MMP)、抗氧化指标以及抗氧化与凋亡相关基因mRNA相对表达量。结果显示:1)与0μmol/L H_(2)O_(2)处理的对照组相比,不同浓度H_(2)O_(2)作用6 h后显著或极显著降低BMECs活力(P肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性(P蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA相对表达量(P<0.05)。综上所述,BLfcin-NPs通过调控Nrf2信号通路中关键基因的表达缓解H_(2)O_(2)诱导的BMECs氧化损伤。

关键词：壳聚糖乳铁蛋白肽奶牛乳腺上皮细胞过氧化氢氧化应激

乳铁蛋白肽(Lactoferricin)作用机制研究进展

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中国生物工程杂志 2004年第1期24卷 23-26页

作者：冯兴军王建华杨雅麟滕达刘立恒中国农业科学院饲料研究所

近年来抗菌肽由于自身的优点成为抗生素的替代品 ,并已成为研究与开发的热点 ,其中乳铁蛋白肽因其强大的生物学功能而备受关注。就其结构、功能进行了综述 ,并根据其结构和生物学活性的关系探讨该肽的作用机制 ,同时也提出了乳铁蛋白肽... 详细信息

近年来抗菌肽由于自身的优点成为抗生素的替代品 ,并已成为研究与开发的热点 ,其中乳铁蛋白肽因其强大的生物学功能而备受关注。就其结构、功能进行了综述 ,并根据其结构和生物学活性的关系探讨该肽的作用机制 ,同时也提出了乳铁蛋白肽研究中存在的一些问题及相应对策。

关键词：乳铁蛋白肽作用机制抗菌免疫调节

表达乳铁蛋白肽的猪源罗伊氏乳酸杆菌对断乳仔猪抗霍乱沙门菌感染的效果分析

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畜牧兽医学报 2021年第10期52卷 2874-2886页

作者：王雪莹高亢蔡吉垚张森豪解伟纯王晓娜崔文姜艳平周晗王丽乔薪瑗徐义刚李一经唐丽杰东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 农业农村部动物疫病病原生物学重点实验室东北科学观测实验站哈尔滨150030

旨在分析表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21作为饲用微生态制剂对仔猪促生长与抵抗猪霍乱沙门菌感染的作用。将该重组菌连续饲喂28日龄断乳仔猪21 d,并设立空菌组、对照组以及抗生素组。第21天时对断乳仔猪... 详细信息

旨在分析表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21作为饲用微生态制剂对仔猪促生长与抵抗猪霍乱沙门菌感染的作用。将该重组菌连续饲喂28日龄断乳仔猪21 d,并设立空菌组、对照组以及抗生素组。第21天时对断乳仔猪连续口服感染猪霍乱沙门菌3 d,并设置7 d的观察期;仔猪感染后采集试验组与对照组血清、肠黏液及肠组织。检测结果显示重组菌组仔猪平均日增重与免疫器官指数均显著提高(P蛋白ZO-1、Claudin-1的基因转录水平和TLR4、Myd88和MLCK的基因转录水平极显著提高(P0.05)。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21可以提高断乳仔猪的生长性能、促进肠道形态发育、增强肠道屏障功能,并且在一定程度上可以保护仔猪免受猪霍乱沙门菌的感染,表明重组菌作为微生态制剂替代断乳仔猪的饲用抗生素具有一定的应用前景。

关键词：乳铁蛋白肽重组罗伊氏乳酸杆菌猪霍乱沙门菌断乳仔猪

转乳铁蛋白肽和α干扰素基因的牛胎儿成纤维细胞的制备

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畜牧兽医学报 2012年第10期43卷 1547-1553页

作者：余大为张守峰朱化彬张锦霞范宗兴郝海生刘岩赵学明秦彤杜卫华中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

旨在构建含有乳铁蛋白肽基因和α干扰素基因的载体,并制备转基因牛胎儿成纤维细胞,为研制抗乳房炎和口蹄疫转基因克隆牛提供供体细胞。本研究构建了由山羊β-酪蛋白启动子启动的牛乳铁蛋白肽基因和由CMV启动子调控的人α干扰素基因的载... 详细信息

旨在构建含有乳铁蛋白肽基因和α干扰素基因的载体,并制备转基因牛胎儿成纤维细胞,为研制抗乳房炎和口蹄疫转基因克隆牛提供供体细胞。本研究构建了由山羊β-酪蛋白启动子启动的牛乳铁蛋白肽基因和由CMV启动子调控的人α干扰素基因的载体,以EGFP基因作为报告基因,neo基因作为筛选基因;分别采用脂质体和电击法转染牛胎儿成纤维细胞,G418筛选得到转基因阳性细胞,并用PCR方法检测转基因细胞中目的基因的整合情况,用Western blotting检测α干扰素蛋白的表达。结果,得到了同时含有牛乳铁蛋白肽基因和人α干扰素基因的转基因牛胎儿成纤维细胞,并且α干扰素蛋白在转基因细胞中能有效表达。

关键词：乳铁蛋白肽 α干扰素转基因牛胎儿成纤维细胞

猪乳铁蛋白肽的分子改良及改良肽的生物学活性研究

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动物营养学报 2011年第2期23卷 241-249页

作者：韩菲菲安沙谢永刚刘倚帆汪以真浙江大学饲料科学研究所动物分子营养学教育部重点实验室浙江省动物饲料与营养重点实验室杭州310029

本研究采用化学合成的方法获得了猪源乳铁蛋白肽LFP-20及其改良肽，旨在通过研究该抗菌肽一级结构与抗菌活性的关系，获得抗菌活性更高的改良肽。微量肉汤稀释法测定的最小抑菌浓度（MIC）及溶血性分析结果表明，猪乳铁蛋白肽LFP-20及... 详细信息

本研究采用化学合成的方法获得了猪源乳铁蛋白肽LFP-20及其改良肽，旨在通过研究该抗菌肽一级结构与抗菌活性的关系，获得抗菌活性更高的改良肽。微量肉汤稀释法测定的最小抑菌浓度（MIC）及溶血性分析结果表明，猪乳铁蛋白肽LFP-20及其改良肽LF2A、LF-1和LF-3对大肠杆菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌均具有抗菌活性；LFP-20对5种试验菌株的MIC为64~128 μg/mL，改良肽LF-1和LF-3的MIC降低了2~4倍；改良肽LF2A对5种试验菌株的抗菌活性没有提高，但溶血性降低；改良肽LF-1的抗菌活性有所提高，但在4、32、64、128和256 μg/mL时的溶血性也显著提高（P〈0.05）。WST-1和LDH法检测4种抗菌肽对人外周血单核细胞（PBMC）增殖的影响及细胞毒性结果表明，LF2A、LF-1和LF-3对PBMC增殖的影响具有剂量依赖性；与LFP-20相比，25~200 μg/mL的LF-1显著提高了PBMC的增殖（P〈0.05），但在400 μg/mL浓度下却抑制了PBMC的增殖（P〈0.05）；200和400 μg/mL LF-1使得PBMC的乳酸脱氢酶（LDH）释放百分率显著提高（P〈0.05），在25~50 μg/mL浓度下却对LDH释放具有降低作用（P〈0.05）。对细胞膜去极化作用研究结果表明，4 μg/mL的改良肽LF-3对大肠杆菌细胞膜的去极化作用明显增强，而抗菌活性较低的LFP-20和LF2A对细菌细胞膜的去极化作用低于LF-3。由此可知，改良肽LF-3的抗菌活性比猪乳铁蛋白肽LFP-20提高了2~4倍，且溶血作用和细胞毒性均没有显著增强；LF-3可通过对细胞膜的去极化作用破坏大肠杆菌细胞膜电势梯度平衡，推测对细胞膜的破坏作用是其发挥抗菌作用的途径之一。

关键词：猪乳铁蛋白肽抗菌活性溶血性细胞毒性

表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌微胶囊制备工艺的优化

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中国畜牧兽医 2021年第12期48卷 4607-4617页

作者：张珺妍谭宏超陈佩佩王晓娜姜艳平崔文乔薪瑗王丽周晗徐义刚李一经唐丽杰东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 江苏省宿迁市宿城区畜牧兽医站宿迁223800 农业农村部动物疫病病原生物学东北科学观测实验站重点实验室哈尔滨150030

为使重组乳酸乳球菌在发酵生产后便于存储、运输,本试验利用可表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFBA/MG1363制备微胶囊,优化微胶囊的制备工艺条件,并对胶囊化后重组菌的相关生物学特性进行检测。通过对不同壁材及壁材浓度进行... 详细信息

为使重组乳酸乳球菌在发酵生产后便于存储、运输,本试验利用可表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌pAMJ399-LFBA/MG1363制备微胶囊,优化微胶囊的制备工艺条件,并对胶囊化后重组菌的相关生物学特性进行检测。通过对不同壁材及壁材浓度进行控制单一变量试验,测定其包埋量,以筛选出最佳壁材及浓度。通过模拟胃肠液环境试验,比较微胶囊释放率,并对不同壁材进行保存期试验,比较最低活菌数,利用响应面试验确定最佳工艺条件,使用最佳工艺条件制备微胶囊后进行验证。优化后的结果为:选取海藻酸钠和壳聚糖作为壁材,在海藻酸钠浓度为2.49%,壳聚糖浓度为0.96%,CaCl_(2)浓度为6.67%,凝固时间为57 min的条件下微胶囊效果最佳,预测包埋量为7.85×10^(8) CFU/g。微胶囊在模拟胃液中稳定存在,在模拟肠液中可完全破裂,能释放出微胶囊内95%以上的乳酸乳球菌。海藻酸钠-壳聚糖微胶囊在4℃保存3周后,微胶囊中活菌数为1.41×10^(7) CFU/g。对微胶囊的最佳工艺条件验证结果为微胶囊的包埋量为8.08×10^(8) CFU/g;常温保存2周后,活菌数仍可达到3.89×10^(6) CFU/g;ELISA方法检测微胶囊内重组乳酸乳球菌可见表达的牛乳铁蛋白肽,抑菌试验可见微胶囊内重组乳酸乳球菌表达的牛乳铁蛋白肽对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌仍具有明显的抑制作用。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌可制备成为低成本、保存期长、耐胃液的微胶囊,为重组乳酸菌在生产中的进一步应用奠定基础。

关键词：重组乳酸乳球菌乳铁蛋白肽微胶囊工艺优化

同方期刊数据库

乳铁蛋白及乳铁蛋白肽结构抗菌功能及基因表达

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中国畜牧杂志 2003年第3期39卷 53-54页

作者：汪以真胡迎利许梓荣林文学浙江大学饲料科学研究所杭州310029 河南省郑州牧工专科学校 450008

乳铁蛋白 (LF)是一种天然的铁结合蛋白。乳铁蛋白肽 (Lfcin)是从LF上被胃蛋白酶水解下来的 2 5个氨基酸残基的小肽。本文综述了LF和Lfcin的结构。

关键词：乳铁蛋白乳铁蛋白肽结构特征抗菌功能基因表达

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乳铁蛋白肽的作用机制及其转基因研究进展

新疆农业科学 2008年第3期45卷 498-503页

作者：林松涛张居农王亮石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 中科院新疆理化技术研究所

近年来抗菌肽由于自身的优点已成为抗生素的替代品,并已成为研究与开发的热点,乳铁蛋白活性多肽(Lfcin)就是其中的一种,它是乳铁蛋白(LF)经胃蛋白酶在酸性条件下降解所产生的小肽,它构成了完整乳铁蛋白主要功能区的大部分,当它被降解下... 详细信息

近年来抗菌肽由于自身的优点已成为抗生素的替代品,并已成为研究与开发的热点,乳铁蛋白活性多肽(Lfcin)就是其中的一种,它是乳铁蛋白(LF)经胃蛋白酶在酸性条件下降解所产生的小肽,它构成了完整乳铁蛋白主要功能区的大部分,当它被降解下来后不仅仅保持了原来完整乳铁蛋白的活性甚至比原来完整乳铁蛋白的活性更强,因其具有广谱的抗细菌、抗病毒、抗真菌等多种独特的生物学活性而备受关注。对其结构、作用及作用机制、转基因研究这几方面的最新国内外研究动态进行综述。

关键词：乳铁蛋白肽乳铁蛋白牛乳铁蛋白肽人乳铁蛋白肽结构活性表达量

表达牛乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳杆菌微胶囊的制备及其在仔猪体内的初步应用

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表达牛乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳杆菌微胶囊的制备及其在仔猪体内...

作者：王雪莹东北农业大学

学位级别：硕士

我国是世界第一大生猪生产和猪肉消费国,在生猪饲养过程中,早期断奶引起的仔猪腹泻是制约仔猪健康生长的重要因素之一。近年来,抗菌肽和益生菌在预防仔猪腹泻的生产应用研究上越来越受到重视,本课题基于实验室已构建的具有益生菌和抗菌... 详细信息

我国是世界第一大生猪生产和猪肉消费国,在生猪饲养过程中,早期断奶引起的仔猪腹泻是制约仔猪健康生长的重要因素之一。近年来,抗菌肽和益生菌在预防仔猪腹泻的生产应用研究上越来越受到重视,本课题基于实验室已构建的具有益生菌和抗菌肽双重特性的表达牛乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳杆菌p PG-LFCA-E/LR-CO21,为增强重组菌的抗逆性和便于生产中的存储及运输,以喷雾干燥法对重组菌进行微胶囊化,并优化微胶囊的制备工艺条件;对重组菌微胶囊的相关抗逆性、存储特性、微观结构进行检测,并对重组菌微胶囊作为饲用微生态制剂对仔猪促生长与抵抗鼠伤寒沙门菌感染的作用进行分析。为制备重组菌微胶囊,首先对其壁材进行了比较与选择,实验中用9种复合壁材制备重组菌微胶囊。未被包埋的重组菌在喷雾干燥过程中全部死亡,脱脂乳-谷氨酸钠-PVPK-30-麦芽糊精-明胶微胶囊(配方9)表现出了最高的存活率83.56%。其次是脱脂乳-蔗糖-甘油-甘氨酸微胶囊(配方4)及海藻糖-脱脂乳-麦芽糊精微胶囊(配方8),存活率分别为66.67%和64.17%。对存活率最高的3种重组菌微胶囊微观结构测定,扫描电镜结果发现微胶囊颗粒呈不规则球形,颗粒互相粘附,表面有皱褶凹坑,微胶囊颗粒破碎情况出现较少,保持了结构的完整性。对重组菌微胶囊相关抗逆性进行检测,结果发现,9种重组菌微胶囊在人工胃液中可稳定存在,并对人工肠液及猪胆盐溶液、酸碱溶液有较强的耐受能力。将9种重组菌微胶囊分别置于-20℃、4℃、25℃、30℃、37℃环境中存储,每种温度下设置真空与自然环境条件。结果表明,5种温度条件下,真空环境重组菌微胶囊相较于自然环境重组菌微胶囊存活率较高,但是差异不显著。37℃环境中,9种重组菌微胶囊的存活率下降速度均相对较快,-20℃、4℃、25℃、30℃四种温度环境中配方9微胶囊贮藏时间最长,贮藏154 d后重组菌活菌数为10 CFU/g。25℃环境中,将重组菌微胶囊分别置于0.33、0.54、0.76三种水分活度条件下存储,结果发现,0.76水分活度条件下重组菌微胶囊存活率下降速度最快,其中L-谷氨酸钠-蔗糖-麦芽糊精微胶囊(配方6)及脱脂乳-谷氨酸钠-PVPK-30-麦芽糊精-明胶微胶囊(配方9)贮藏时间最长。以存活率最高的配方9微胶囊连续饲喂3日龄新生仔猪3 d,刮取肠黏液。用平板计数法及实时荧光定量PCR法检测菌体在仔猪体内定殖,结果发现相对于菌液组,微胶囊组的重组菌在仔猪肠道内定殖量更高,说明微胶囊可保护重组菌抵抗胃液侵袭在肠道内定殖。以重组菌微胶囊饲喂21日龄断乳仔猪21 d,并设立对照组、空菌组以及重组菌组。记录仔猪采食量与日增重,采集仔猪器官、血清、全血。结果表明重组菌组与对照组相比,仔猪的日增重、日采食量以及胸腺、脾脏免疫器官指数增加,差异极显著;在一定程度上减少了仔猪应激引起的腹泻。仔猪血液生理生化表明重组菌微胶囊可以促进仔猪生长。第14 d时对断乳仔猪连续口服感染鼠伤寒沙门菌3 d,并设置7 d的观察期,设立对照组、感染组,空菌组以及重组菌组。每日记录每组仔猪的体重变化和腹泻情况。采集仔猪血清、肠黏液及肠组织。结果可见重组菌微胶囊一定程度上缓解了仔猪感染沙门菌引起的腹泻率升高和体重降低的现象。相对于感染组,重组菌组白细胞及中性粒细胞数目降低,差异极显著。总蛋白极显著提高,球蛋白含量相对上升,甘油三酯含量相对下降。与感染组相比,重组菌组s IgA、IgA、IgM、IgG水平显著升高,炎症因子IL-10、IL-4含量显著升高,IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著降低,抗氧化因子GSH-Px极显著升高。重组菌微胶囊显著缓解了鼠伤寒沙门菌感染引起的肠黏膜表面破损及炎性细胞浸润的情况,重组菌组仔猪肠道菌群的代谢、信号转导等功能相对于感染组均有所增强,肠道菌群多样性更接近对照组。表明口服重组菌可提高血清和黏液中免疫球蛋白水平,调节先天免疫系统及炎症反应,促进仔猪免疫器官的发育并对鼠伤寒沙门菌感染仔猪的肠道环境起到一定的保护作用。可见表达牛乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳杆菌微胶囊对感染鼠伤寒沙门菌的仔猪具有一定的保护作用。综上所述,本研究筛选有效包埋剂对重组菌进行包埋,确定以脱脂乳、L-谷氨酸钠、PVPK-30、麦芽糊精、明胶作微胶囊壁材对重组菌喷雾干燥,菌体存活率最高,达到85.36%。微胶囊化重组菌可有效地在仔猪体内定殖,同时微胶囊化重组菌有效延长了贮存时间。口服重组菌微胶囊能够提高仔猪机体免疫力,对感染鼠伤寒沙门菌仔猪具有一定的保护作用,重组菌微胶囊作为促进仔猪健康生长的微生态制剂具有潜在的应用前景。

关键词：乳铁蛋白肽重组罗伊氏乳杆菌微胶囊断乳仔猪抗沙门菌感染