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乳腺癌细胞株对TRAIL敏感性不同的分子机制

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科学通报 2004年第17期49卷 1737-1742页

作者：张晋丹刘彦信刘士廉郑德先中国医学科学院基础医学研究所

不同的乳腺癌细胞株对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的敏感性不同. 为了揭示其分子机制, 分别以对TRAIL敏感和不敏感的乳腺癌细胞株(MDA-MB-231和MCF-7)为模型, 比较分析了这2株细胞对重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)的不同敏感性的分... 详细信息

不同的乳腺癌细胞株对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的敏感性不同. 为了揭示其分子机制, 分别以对TRAIL敏感和不敏感的乳腺癌细胞株(MDA-MB-231和MCF-7)为模型, 比较分析了这2株细胞对重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)的不同敏感性的分子机制. 首先使用不同的抑制剂分别阻断细胞内3条主要存活通路(PKCd, MAPK, PI3K)后, 研究细胞对rsTRAIL的敏感性, 结果表明, 阻断这3条存活通路, 都不影响MD-MB-231细胞对rsTRAIL的敏感性, 说明MD-MB-231细胞对rsTRAIL敏感与这3条存活通路无关; 以MEK1/2抑制剂阻断MAPK途径或以Ly294002阻断PI3K途径都不影响MCF-7细胞对rsTRAIL的敏感性; 但以PKCd抑制剂rottlerin抑制PKCd活性, 能显著促进rsTRAIL诱导的MCF-7细胞凋亡, 提示PKCd高表达可能是MCF-7细胞对rsTRAIL不敏感的重要原因. 应用RNA干扰技术抑制PKCd的表达, 确证PKCd高表达是MCF-7细胞对rsTRAIL不敏感的关键因素. 同时, 进一步证明 caspase-3 表达重建不能改变MCF-7 细胞中PKCd的总体表达水平, 说明凋亡执行蛋白酶caspase-3缺陷, 不是PKCd高表达的主要原因.

关键词： TRAIL MCF-7细胞乳腺癌细胞株敏感性分子机制 PKCδ 高表达存活 MAPK 表达水平

FuGENE6介导雌激素受体质粒HEGO5转染不同乳腺癌细胞株后受体的表达

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癌症 2004年第10期23卷 1166-1170页

作者：陶德定江敏冯永东吴剑宏龚建平华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科湖北武汉430030

背景及目的:基因转染技术是研究乳腺癌细胞雌激素受体(estrogenreceptor,ER)的表达及其作用机制的重要手段。本研究检测不同人类乳腺癌细胞株以FuGENE6试剂为载体进行转染时的转染效率,以及ER质粒HEGO5转染后ER的表达情况。方法:不同乳... 详细信息

背景及目的:基因转染技术是研究乳腺癌细胞雌激素受体(estrogenreceptor,ER)的表达及其作用机制的重要手段。本研究检测不同人类乳腺癌细胞株以FuGENE6试剂为载体进行转染时的转染效率,以及ER质粒HEGO5转染后ER的表达情况。方法:不同乳腺癌细胞株先用pEGFP-N1质粒转染,流式细胞术(flowcytometry,FCM)对转染效率进行测定。将转染效率高的细胞株分别再用HEGO5转染,用FCM和Westernblot方法对ER的表达情况进行检测。结果:乳腺癌细胞株MM-231、MM330、MM134Ⅵ、MM175Ⅶ、MM157、MM361、MM436、MM453、UaCC812、UaCC893、BT-549、BT-20、HBL-100、Hs578t、MCF-7、T-47d、ZR-75-1的转染效率存在很大差异。细胞株HBL-100重复性转染实验的变异系数为5.1。几种转染效率较高的细胞株MCF-7、HBL-100、Hs578t、MM436、MM453和BT-20用HEGO5转染后,ER阳性的表达率介于12.9%～54.8%之间,与pEGFP-N1的转染效率相当;不同细胞ER的FCM和Westernblot检测结果一致。此外,ER的表达具有一定的细胞周期特异性。结论:FuGENE6试剂介导乳腺癌细胞进行转染时重复性好、结果稳定。HEGO5转染后ER的表达情况可分别用Westernblot和FCM进行定性、定量检测。

关键词： MM 转染效率 ER 乳腺癌细胞株表达 FCM 雌激素受体质粒 EGFP 介导

pcDNA3.1(+)/caveolin-1真核表达质粒的构建及其在MCF-7乳腺癌细胞株中的表达

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西安交通大学学报（医学版） 2013年第1期34卷 16-19页

作者：马小斌康华峰包兴代志军刁岩闵卫利王西京西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科陕西西安710004

目的明确正常组织和人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1的表达情况,构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1表达质粒,并鉴定其表达。方法 RT-PCR法检测9种正常人体组织及人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1基因的扩增情况;Western blotting法检测MCF-7... 详细信息

目的明确正常组织和人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1的表达情况,构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1表达质粒,并鉴定其表达。方法 RT-PCR法检测9种正常人体组织及人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1基因的扩增情况;Western blotting法检测MCF-7细胞中caveolin-1蛋白的表达情况。设计克隆引物和表达引物,RT-PCR法扩增caveolin-1基因,用EcoRⅠ+XbaⅠ内切酶消化回收PCR产物和质粒pcDNA3.1(+),连接后构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒。挑选pcDNA3.1(+)/caveolin-1转染感受态细菌后的单菌落进行PCR鉴定,阳性菌落培养后提取质粒行酶切鉴定及测序鉴定。瞬时转染MCF-7细胞后Western blotting检测caveolin-1蛋白的表达情况。结果①9种正常组织中均有caveolin-1基因扩增,MCF-7细胞中无caveolin-1基因扩增且无蛋白表达;②pcD-NA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒转染MCF-7细胞后caveolin-1蛋白表达良好。结论成功构建了pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒,瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞后caveolin-1表达稳定。

关键词： caveolin-1 真核表达质粒真核细胞转染乳腺癌细胞株

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S细胞周期的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2003年第2期23卷 138-141页

作者：牛雯李忠陈龙南京医科大学公共卫生学院营养与食品科学系江苏南京210029 南京师范大学江苏省资源生物技术重点实验室江苏南京210097

目的:观察三羟异黄酮(genistein,Gen)对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)法观察Gen对MDA-MB-435S细胞生长的影响;流式细胞仪观察Gen处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效... 详细信息

目的:观察三羟异黄酮(genistein,Gen)对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)法观察Gen对MDA-MB-435S细胞生长的影响;流式细胞仪观察Gen处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应关系;吖啶橙/溴乙锭染色法(acridine orange/ethidium bromide staining)在荧光显微镜下观察Gen对MDA-MB-435S细胞的凋亡作用。结果:随剂量增大和作用时间延长,Gen对MDA-MB-435S细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2-M期,而且随剂量的增大,作用时间的延长,阻滞作用也增强。吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见,随Gen剂量增大,细胞凋亡也逐渐明显。结论:Gen可抑制人乳腺癌细胞的增殖,其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2-M期阻滞。

关键词：三羟异黄酮乳腺癌细胞株细胞增殖细胞凋亡细胞周期

RNA干扰对乳腺癌细胞株MCF-7/Adr多药耐药性的逆转

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江苏医药 2005年第5期31卷 365-367页

作者：曾爱华何蕴韶王穗海王伟毅钟女奇广州市中山大学基础医学院人体解剖学教研室 510080 中山大学达安基因股份有限公司中山大学动物实验中心

目的研究小分子干扰RNA对乳腺癌耐药细胞株MCF7/Adr多药耐药性的逆转作用。方法设计针对mdrl基因的SiRNA,转染进MCF-7/Adr细胞;用荧光定量PCR检测mdrlmRNA的表达,流式细胞仪分析Pgp表达,MTT法检测阿霉素对MCF-7/Adr细胞的半数抑制浓度(I... 详细信息

目的研究小分子干扰RNA对乳腺癌耐药细胞株MCF7/Adr多药耐药性的逆转作用。方法设计针对mdrl基因的SiRNA,转染进MCF-7/Adr细胞;用荧光定量PCR检测mdrlmRNA的表达,流式细胞仪分析Pgp表达,MTT法检测阿霉素对MCF-7/Adr细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果该SiRNA能使耐药细胞株MCF-7/Adr的mdrlmRNA和Pgp表达水平分别显著下调(P乳腺癌MCF7/Adr细胞株的多药耐药性。

关键词： RNA干扰乳腺癌细胞株 MCF-7 Adr 多药耐药性乳腺癌耐药细胞

硫酸化茯苓多糖对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响

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基因组学与应用生物学 2018年第5期37卷 2170-2174页

作者：高贵珍吴超翟科峰薛宏宇华明辉杨红勤江涛宿州学院生物与食品工程学院宿州234000 大连理工大学生命与医药学院盘锦124221

为了探讨硫酸化茯苓多糖（SP）对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响,采用MTT法检测不同浓度、作用时间SP对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,倒置显微镜观察MCF-7细胞的形态学变化,RT-PCR检测SP处理MCF-7细胞凋亡相关基因（Bcl-2,Bax）的表达;Wes... 详细信息

为了探讨硫酸化茯苓多糖（SP）对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响,采用MTT法检测不同浓度、作用时间SP对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,倒置显微镜观察MCF-7细胞的形态学变化,RT-PCR检测SP处理MCF-7细胞凋亡相关基因（Bcl-2,Bax）的表达;Western blotting技术检测SP对乳腺癌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达变化。结果表明,SP对MCF-7细胞增殖有抑制作用,且在一定范围内呈剂量效应;细胞贴壁能力减弱,细胞间隙增大,胞膜褶皱;Bcl-2基因表达水平和蛋白表达水平明显降低（p〈0.05）,Bax基因表达水平和蛋白表达水平明显升高（p〈0.05）。基于以上研究,SP通过促凋亡基因Bax的表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达来下调Bcl-2/Bax比值,激活凋亡途径,诱导MCF-7细胞的凋亡。

关键词：硫酸化茯苓多糖(SP) 乳腺癌细胞株 MCF-7 Bcl-2 Bax

Mage-A1、A2、A3在乳腺癌组织及乳腺癌细胞株中表达的研究

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中华普通外科杂志 2004年第11期19卷 693-695页

作者：马全范萍郑伟王萱仪武正炎南京医科大学第一附属医院普外科 210029

目的研究乳腺癌组织和细胞株中Mage基因的表达情况。方法采用RTPCR检测33例乳腺癌组织和4株乳腺癌细胞株MCF7、SkBr3、MDAMB435s和TM40D中Mage基因的表达。结果33例乳腺癌组织中13例(39%)至少表达一种MageA基因,4例(12%)MageA1阳性,8例(... 详细信息

目的研究乳腺癌组织和细胞株中Mage基因的表达情况。方法采用RTPCR检测33例乳腺癌组织和4株乳腺癌细胞株MCF7、SkBr3、MDAMB435s和TM40D中Mage基因的表达。结果33例乳腺癌组织中13例(39%)至少表达一种MageA基因,4例(12%)MageA1阳性,8例(24%)MageA2阳性,7例(21%)MageA3阳性,细胞株MCF7中MageA1和MageA3阳性表达,SkBr3中MageA1和MageA3阳性表达,MDAMB435s中MageA2和MageA3阳性表达,TM40D中MageA3阳性表达。结论Mage基因在乳腺癌中表达率较高,不同的乳腺癌细胞表达Mage基因有差别,Mage蛋白可望成为乳腺癌免疫治疗的靶抗原。

关键词：乳腺癌组织阳性表达 Mage基因 Mage-A1 Mage-A3 乳腺癌细胞株 MCF-7 MB MDA 靶抗原

MG132对乳腺癌细胞株MICA蛋白稳定性及NK杀伤活性作用

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免疫学杂志 2018年第6期34卷 476-481,491页

作者：周智锋陈淑萍李洁羽林万松王玲郑庆丰叶韵斌福建省肿瘤医院福建医科大学附属肿瘤医院福建省肿瘤转化医学重点实验室免疫学研究室福州350014 福建省肿瘤医院福建医科大学附属肿瘤医院胸外科福州350014

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对乳腺癌细胞株MHC-I类相关分子A(MHC class I-related molecules A,MICA)蛋白稳定性及NK杀伤活性作用。方法乳腺癌细胞株MICA全基因检测。构建乳腺癌细胞株MICA等位基因真核表达载体,转染293T细胞。流式细... 详细信息

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对乳腺癌细胞株MHC-I类相关分子A(MHC class I-related molecules A,MICA)蛋白稳定性及NK杀伤活性作用。方法乳腺癌细胞株MICA全基因检测。构建乳腺癌细胞株MICA等位基因真核表达载体,转染293T细胞。流式细胞术及Western blot检测乳腺癌细胞株MICA表达。MTT检测MG132对乳腺癌细胞生长抑制。LDH检测NK细胞杀伤活性。结果 MDA-MB-231基因序列为MICA*019/A5,MDA-MB-435S基因序列为MICA*010/A5,仅在蛋白N端(膜外区)第29位氨基酸有差异:MICA*019/A5在该位点为Arg(精氨酸),而MICA*010/A5在该位点为Pro(脯氨酸),Arg或Pro位点在蛋白结构的一个beta折叠上,而且是处于偏中间的位置。MG132对转染的293T细胞增殖均有明显抑制作用。MG132处理转染的293T细胞后,MDA-MB-435S MICA基因来源的293T细胞MICA表达降低,并随作用时间影响更明显,对NK杀伤敏感下降。MDA-MB-231 MICA基因来源的293T细胞MICA表达无明显改变,对NK杀伤活性敏感性不受影响。结论 NK杀伤敏感性与乳腺癌细胞MICA表达密切相关,MG132影响MDA-MB-435S MICA稳定性,所以影响NK杀伤敏感性,MDA-MB-231不受影响。

关键词： MG132 乳腺癌细胞株 MHC-I类相关分子A 自然杀伤细胞

rhCD40L联合化疗药物对乳腺癌细胞株生物学行为的影响

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现代免疫学 2005年第1期25卷 5-10页

作者：施勤陈永井谢芳马泓冰季玉红於葛华王勤葛彦张学光苏州大学医学生物技术研究所苏州215007

为了研究人重组CD40L(rhCD40L)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞生物学行为的影响,运用多种细胞生物学、分子生物学方法检测细胞生长、细胞周期、细胞膜分子、凋亡相关基因Bcl-Xl、Bax及趋化因子RANTESmRNA水平的改变,并观察了... 详细信息

为了研究人重组CD40L(rhCD40L)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞生物学行为的影响,运用多种细胞生物学、分子生物学方法检测细胞生长、细胞周期、细胞膜分子、凋亡相关基因Bcl-Xl、Bax及趋化因子RANTESmRNA水平的改变,并观察了rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素(ADM)对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果发现rhCD40L抑制MDA-MB-435、MDA-MB-231细胞增殖,与剂量呈负相关(P株乳腺癌细胞分别在CD40配基化(ligation)作用48、72h进入G1期细胞阻滞;MDA-MB-231细胞CD54、CD95(Fas)、CD120b等分子表达均显著上调,CD95L(FasL)表达下调(P细胞CD49e、CD95L、CD120a、HLA-DR等分子有显著性变化。两株乳腺癌细胞经rhCD40L作用4、24h后,RT-PCR半定量Bax/Bcl-Xl的比率、RANTES的表达与对照组相比均上调。rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素对MDA-MB-231细胞增殖有较强的抑制作用(P乳腺癌细胞周期及TNF家族成员及MHCII类分子的表达,上调凋亡相关基因Bax/Bcl-Xl的比值和趋化因子RANTESmRNA水平,直接或间接介导抗肿瘤作用。同时,rhCD40L还可增强肿瘤细胞对细胞因子和化学药物的敏感性。

关键词： rhCD40L 乳腺癌细胞株 IFN-γ 阿霉素抗肿瘤