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乙酰胆碱通过作用于α7烟碱型乙酰胆碱受体抑制大鼠小胶质细胞炎性反应

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生理学报 2018年第1期70卷 33-39页

作者：蒋永莹李霖沈卫星邱一华彭聿平南通大学医学院生理学系南通226001

小胶质细胞是中枢神经系统中主要的免疫细胞。本研究旨在探讨乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)抑制小胶质细胞炎症反应的具体机制。原代培养Sprague-Dawley(SD)大鼠小胶质细胞,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导建立炎症反应模型,ACh处理2... 详细信息

小胶质细胞是中枢神经系统中主要的免疫细胞。本研究旨在探讨乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)抑制小胶质细胞炎症反应的具体机制。原代培养Sprague-Dawley(SD)大鼠小胶质细胞,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导建立炎症反应模型,ACh处理24 h后,用Western blot检测多种炎性因子、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)和α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)的蛋白表达,用ELISA检测多种炎性因子和IGF-1的释放情况,用慢病毒转染沉默α7nAChR后观察ACh作用的变化。结果显示,LPS可促进小胶质细胞的激活,上调诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)蛋白表达,增加白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的表达和释放,减少神经营养因子IGF-1的表达和释放,ACh能逆转LPS的这些作用;LPS可下调小胶质细胞的α7nAChR蛋白表达,ACh逆转该作用;α7n AChR-shRNA慢病毒转染小胶质细胞后,ACh对抗LPS的作用消失。以上结果提示,ACh对抗LPS诱导的小胶质细胞炎症反应的保护作用是通过α7nAChR实现的,这为今后神经炎症疾病的治疗提供了新的治疗靶点。

关键词：乙酰胆碱 α7烟碱型乙酰胆碱受体小胶质细胞脂多糖

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乙酰胆碱在钩吻素己致小鼠中毒死亡中的作用

生理学报 2016年第3期68卷 249-254页

作者：赖周毅王海波吕瑞玲谭秋婵邓志钦汪源孙晓雪伍嘉宝朱林燕王磊陈丽新叶文才王立伟暨南大学医学院生理学系广州510632 暨南大学医学院药理学系广州510632 暨南大学药学院广州510632

本文旨在探讨全血乙酰胆碱浓度与钩吻素己致昆明小鼠中毒死亡的关系。给昆明小鼠腹腔注射生理盐水、钩吻素己或不同剂量的氯化乙酰胆碱溶液,并对注射钩吻素己和中剂量氯化乙酰胆碱的小鼠给予阿托品解救。中毒死亡小鼠死后即时取血;存活... 详细信息

本文旨在探讨全血乙酰胆碱浓度与钩吻素己致昆明小鼠中毒死亡的关系。给昆明小鼠腹腔注射生理盐水、钩吻素己或不同剂量的氯化乙酰胆碱溶液,并对注射钩吻素己和中剂量氯化乙酰胆碱的小鼠给予阿托品解救。中毒死亡小鼠死后即时取血;存活小鼠在注射药液后20 min处死取血。用试剂盒测定小鼠全血乙酰胆碱浓度与乙酰胆碱酯酶活性,计算各组死亡率并分析其死亡情况。结果显示,相对于生理盐水对照组,腹腔注射半数致死量(0.15 mg/kg)的钩吻素己后,小鼠全血乙酰胆碱酯酶活力降低,全血乙酰胆碱水平升高,但其中死亡小鼠的全血乙酰胆碱浓度显著低于中剂量氯化乙酰胆碱组死亡小鼠的水平,而与中剂量乙酰胆碱组存活小鼠的水平无差异。阿托品可有效解救氯化乙酰胆碱中毒小鼠,但对钩吻素己中毒小鼠的抢救效果不明显。以上结果提示,钩吻素己可引起小鼠全血胆碱酯酶活力下降,乙酰胆碱浓度升高,但体内乙酰胆碱堆积可能并不是钩吻素己致小鼠中毒死亡的主要或唯一原因。

关键词：昆明小鼠钩吻素己乙酰胆碱乙酰胆碱酯酶

乙酰胆碱抑制去甲肾上腺素诱导的心肌H9c2细胞凋亡

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中国病理生理杂志 2019年第3期35卷 393-399页

作者：罗斌郑茜王林琪邰烨唐俊明陈晋湖北医药学院生理学教研室湖北十堰442000 湖北医药学院药护学院湖北十堰442000 湖北医药学院口腔学院湖北十堰442000 湖北医药学院公共卫生与管理学院湖北十堰442000

目的:探讨乙酰胆碱(ACh)对去甲肾上腺素(NE)诱导心肌H9c2细胞凋亡的作用及机制。方法:用不同浓度(0、5、10和20μmol/L)NE诱导心肌H9c2细胞凋亡,用ACh预处理细胞观察其作用,用MTT法检测细胞存活率,选出最适NE和ACh剂量。其次,分别加入... 详细信息

目的:探讨乙酰胆碱(ACh)对去甲肾上腺素(NE)诱导心肌H9c2细胞凋亡的作用及机制。方法:用不同浓度(0、5、10和20μmol/L)NE诱导心肌H9c2细胞凋亡,用ACh预处理细胞观察其作用,用MTT法检测细胞存活率,选出最适NE和ACh剂量。其次,分别加入与凋亡密切相关的4种信号分子阻断剂与ACh共同干预,用激光共聚焦成像JC-1法检测线粒体膜电位水平,DCFH-DA染色及流式细胞术检测胞内活性氧簇的水平,Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:10μmol/L NE可明显诱导H9c2细胞凋亡(P<0.05);经10μmol/L ACh预处理后,可减弱NE诱导的H9c2细胞凋亡(P<0.05);在ACh预处理前分别预先加入4种分子阻断剂,发现加入PDTC后可减弱ACh的抑制作用。结论:ACh具有抑制NE诱导的心肌H9c2细胞凋亡的作用,其机制可能与NF-κB信号分子有关。

关键词：心力衰竭去甲肾上腺素乙酰胆碱细胞凋亡 NF-κB信号通路

乙酰胆碱抑制自噬保护高糖诱导的H9c2细胞损伤

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中国药理学通报 2019年第7期35卷 1008-1013页

作者：王珣柯旋张远恒张驰孙斯琴武汉市第三医院(武汉大学附属同仁医院)心内科湖北武汉430061 武汉市第三医院(武汉大学附属同仁医院)放射科湖北武汉430061 武汉市普仁医院心内科湖北武汉430080

目的研究乙酰胆碱(ACh)对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响及机制。方法应用高糖处理H9c2细胞72 h,建立心肌细胞损伤模型。实验分为:①对照组(control);②高糖组(HG);③HG+ACh(10 -4 nmol·L^-1 )组;④HG+ACh+AICAR(0.5 nmol·L^-1 )组;... 详细信息

目的研究乙酰胆碱(ACh)对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响及机制。方法应用高糖处理H9c2细胞72 h,建立心肌细胞损伤模型。实验分为:①对照组(control);②高糖组(HG);③HG+ACh(10 -4 nmol·L^-1 )组;④HG+ACh+AICAR(0.5 nmol·L^-1 )组;⑤HG+ACh+雷帕霉素(rapamycin, Rap)组(Rap 50 nmol·L^-1 );⑥HG+3-MA(2 mmol·L^-1 )组。MTT及ATP含量检测,评估各组细胞活性;Western blot观察各组自噬、凋亡及AMPK/mTOR信号通路相关蛋白表达变化;透射电镜观察各组细胞自噬小体的数量变化。结果与对照组相比,HG组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK比值降低( P <0.05),p-mTOR/mTOR、Bax/Bcl-2比值升高( P <0.05);与HG组相比,HG+3-MA组Bax/Bcl-2比值降低( P <0.05),HG+ACh组心肌细胞活性增加( P <0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK、Bax/Bcl-2比值降低( P <0.05),p-mTOR/mTOR比值升高( P <0.05);与HG+ACh组相比,HG+ACh+AICAR组p-AMPK/AMPK比值升高( P <0.05),p-mTOR/mTOR比值降低( P <0.05),而LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高( P <0.05),HG+ACh+Rap组Bax/Bcl-2比值升高( P <0.05)。结论 ACh通过AMPK信号通路抑制自噬,保护高糖诱导的心肌细胞损伤。

关键词：乙酰胆碱自噬凋亡 H9c2 糖尿病 AMPK

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乙酰胆碱经人工通道的跨膜输送

有机化学 2015年第9期35卷 1994-1998页

作者：祝平平辛鹏洋侯军利黎占亭复旦大学化学系上海200433

乙酰胆碱具有重要的生理活性,其跨膜输送是实现神经信号传递的重要过程之一.利用人工合成体系来模拟乙酰胆碱的跨膜输送过程不仅具有重要的理论研究价值,而且还具有生物医用前景.目前,由于缺乏合适尺寸大小的骨架,构筑具有跨膜输送乙酰... 详细信息

乙酰胆碱具有重要的生理活性,其跨膜输送是实现神经信号传递的重要过程之一.利用人工合成体系来模拟乙酰胆碱的跨膜输送过程不仅具有重要的理论研究价值,而且还具有生物医用前景.目前,由于缺乏合适尺寸大小的骨架,构筑具有跨膜输送乙酰胆碱功能的人工通道还具有较大的挑战性.利用含有Phe三肽的芳香酰肼大环化合物在脂双层中构筑了人工跨膜通道,通过基于囊泡的动态荧光光谱实验以及基于平面脂双层的膜片钳实验证实,这类人工通道可以跨膜输送乙酰胆碱.可以发现,通道对乙酰胆碱的选择性随着通道孔穴尺寸的增加而增加.

关键词：芳香酰肼大环人工通道跨膜输送乙酰胆碱

乙酰胆碱对盐胁迫下烟草悬浮细胞生理特性的影响

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西南农业学报 2021年第4期34卷 732-738页

作者：邓金华郭晓琳黄金辉张永锋李淑娥郑玺刘祥叶爱萍穆耀辉王平平张立新西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 陕西省烟草公司商洛市公司陕西商洛726000 陕西省烟草科学研究所陕西西安710077

【目的】为明确乙酰胆碱对盐胁迫下植物生理的影响。【方法】以烟草细胞为试验材料,观察了乙酰胆碱对盐胁迫下细胞和细胞核的形态,测定了烟草悬浮细胞端粒酶活性、脯氨酸和可溶性蛋白含量、丙二醛含量以及抗氧化酶类(SOD、CAT、POD)活... 详细信息

【目的】为明确乙酰胆碱对盐胁迫下植物生理的影响。【方法】以烟草细胞为试验材料,观察了乙酰胆碱对盐胁迫下细胞和细胞核的形态,测定了烟草悬浮细胞端粒酶活性、脯氨酸和可溶性蛋白含量、丙二醛含量以及抗氧化酶类(SOD、CAT、POD)活性。【结果】在50 mmol/L NaCl胁迫下,烟草悬浮细胞畸形增多,细胞核变形,DNA浓缩受损,细胞内端粒酶活性显著下降。同时,细胞内的MDA含量显著增加,细胞内膜系统受损严重;细胞内可溶性蛋白和脯氨酸含量降低、抗氧化酶类受损,活性降低。10μmol/L乙酰胆碱处理,细胞内脯氨酸和可溶性蛋白含量显著增加,增强细胞的渗透调节能力;乙酰胆碱能减少MDA的含量,显著提高细胞中SOD、POD、CAT酶活性,增强细胞的抗氧化能力。【结论】为研究乙酰胆碱提高植物的耐盐性机理提供一定依据。

关键词：乙酰胆碱烟草悬浮细胞盐胁迫生理生化

超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中胆碱和乙酰胆碱

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分析测试学报 2022年第3期41卷 341-347页

作者：薛霞丁一公丕学卢兰香王骏张艳侠武传香宿书芳魏莉莉刘艳明胡梅山东省食品药品检验研究院山东省特殊医学用途配方食品质量控制工程技术研究中心山东省食品药品安全检测工程技术研究中心山东济南250101

建立了超高效液相色谱-串联质谱同时测定蜂蜜中胆碱和乙酰胆碱的分析方法。试样采用水-乙腈(体积比2∶3)溶液提取,乙腈-水(体积比8∶2)稀释后以0.22μm滤膜过滤上机测定。采用ACQUITY UPLC BEH HILIC(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,... 详细信息

建立了超高效液相色谱-串联质谱同时测定蜂蜜中胆碱和乙酰胆碱的分析方法。试样采用水-乙腈(体积比2∶3)溶液提取,乙腈-水(体积比8∶2)稀释后以0.22μm滤膜过滤上机测定。采用ACQUITY UPLC BEH HILIC(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,以10 mmol/L乙酸铵(含0.1%乙酸)-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)扫描,外标法定量。结果表明:在优化条件下,胆碱和乙酰胆碱的检出限(LODs,S/N≥3)分别为0.5、0.05 mg/kg,定量下限(LOQs,S/N≥10)分别为1.0、0.1 mg/kg;两者分别在0.5~50 ng/mL和0.05~5 ng/mL范围内线性良好,相关系数(r^(2))大于0.99。空白果葡糖浆(F55)在LOQs、10LOQs、50LOQs 3个浓度水平下的加标回收率为100%~103%,相对标准偏差小于5.0%;在50LOQs浓度水平下,洋槐蜜中的胆碱和乙酰胆碱的加标回收率分别为97.3%和97.8%,相对标准偏差不大于5.1%。该方法前处理简便、快捷,灵敏度高,回收率和重现性良好,适用于蜂蜜中胆碱和乙酰胆碱的测定,已成功应用于70批次蜂蜜和10批次糖浆中两种目标物的测定。

关键词：胆碱乙酰胆碱蜂蜜超高效液相色谱-串联质谱法

苦豆子总碱对大鼠学习记忆功能和乙酰胆碱生成的影响

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华西药学杂志 2024年第1期39卷 25-28页

作者：巴合沙拉·马乃甫阿力努尔·艾麦尔罗静莺高莉闫明新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所、新疆维吾尔自治区维吾尔医方剂学重点实验室新疆乌鲁木齐830011

目的研究苦豆子总碱的急性毒性,探讨苦豆子总碱对大鼠学习记忆功能和乙酰胆碱(Ach)生成的影响。方法采用急性毒性试验法测定苦豆子总碱对小鼠的急性毒性。将48只SPF级♂SD大鼠随机均分为正常对照组、苦豆子总碱组(低、中、高剂量分别为4... 详细信息

目的研究苦豆子总碱的急性毒性,探讨苦豆子总碱对大鼠学习记忆功能和乙酰胆碱(Ach)生成的影响。方法采用急性毒性试验法测定苦豆子总碱对小鼠的急性毒性。将48只SPF级♂SD大鼠随机均分为正常对照组、苦豆子总碱组(低、中、高剂量分别为4、8、16 mg·kg^(-1)),连续灌胃给药28 d。观察大鼠的体重和体温变化;采用避暗试验检测大鼠的学习记忆功能;采用比色法检测血清与脑组织中Ach、乙酰胆碱酯酶(AChE)及胆碱乙酰移位酶(ChAT)的含量或活性。结果苦豆子总碱的小鼠急性经口半数致死量为0.203±0.024 g·kg^(-1)。与对照组比较,苦豆子总碱能明显降低大鼠的体温,延长大鼠的避暗潜伏期和减少大鼠的避暗次数,同时,降低大鼠血清和脑组织中Ach的含量和ChAT的活性及升高大鼠脑组织中AChE的活性,且降低脑组织中ChAT/AChE的比值。结论苦豆子总碱具有明显的急性毒性反应,对大鼠学习记忆功能有损伤,这可能与苦豆子总碱不仅降低大鼠体温,而且降低ChAT的活性,提高AChE的活性,从而导致大鼠的学习记忆功能受损,ACh的含量下降。

关键词：苦豆子总碱神经损伤乙酰胆碱乙酰胆碱酯酶胆碱乙酰移位酶学习记忆急性毒性避暗试验

沸石咪唑酯骨架材料/石墨相氮化碳量子点/乙酰胆碱酯酶复合物定量检测小鼠脑组织中的乙酰胆碱

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理化检验（化学分册） 2023年第8期59卷 869-874页

作者：杨渊朱亮胡园园于妍妍苏州市立医院(南京医科大学附属苏州医院)药剂科苏州215008 南京医科大学附属淮安第一医院药学部淮安223300 徐州市疾病预防控制中心徐州221006 徐州医科大学药学院江苏省新药研究与临床药学重点实验室徐州221004

以二水合乙酸锌、2-甲基咪唑、石墨相氮化碳量子点(g-CNQDs,7mg)和乙酰胆碱酯酶(AchE)为起始原料,采用一锅法制备了沸石咪唑酯骨架材料(ZIFs)包载g-CNQDs和AchE的酸度敏感型复合物ZIFs@g-CNQDs@AchE,并和患阿尔茨海默病(AD)小鼠的脑组... 详细信息

以二水合乙酸锌、2-甲基咪唑、石墨相氮化碳量子点(g-CNQDs,7mg)和乙酰胆碱酯酶(AchE)为起始原料,采用一锅法制备了沸石咪唑酯骨架材料(ZIFs)包载g-CNQDs和AchE的酸度敏感型复合物ZIFs@g-CNQDs@AchE,并和患阿尔茨海默病(AD)小鼠的脑组织样品在pH 7.4磷酸盐缓冲溶液中室温反应2.5h,在380nm激发波长下测量体系在475nm处的荧光强度,用于测定乙酰胆碱(Ach)的含量。结果显示,合成的复合物呈十二面体结构,平均粒径约300nm,加入Ach后,Ach渗透进入复合物,被AchE催化生成乙酸,体系酸度增加,复合物结构瓦解,g-CNQDs释放,475nm处出现明显的荧光发射峰。Ach的浓度在5.5~82.5mmol·L^(-1)内和对应的体系荧光强度呈线性关系,检出限(3S/N)为1.83mmol·L^(-1);常见的干扰物质(葡萄糖、多巴胺)以及干扰离子(Fe^(2+)、Fe3+、Cu^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+))对Ach的检测无干扰,复合物的特异性较高;按照标准加入法对阳性实际样品进行回收试验,成功检出了Ach,回收率为93.2%~112%,测定值的相对标准偏差(n=5)为0.82%~3.4%。构建的酸度敏感型复合物可作为一种潜在的载体,用于AD诊疗。

关键词：沸石咪唑酯骨架材料乙酰胆碱酯酶石墨相氮化碳量子点荧光检测乙酰胆碱阿尔茨海默病