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乙酰短杆菌酶法合成2′-脱氧鸟苷

药物生物技术 2011年第2期18卷 119-123页

作者：李喻窦洁曹静邱蔚然周长林中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 南通秋之友生物科技有限公司江苏南通226200

胸苷和鸟苷酸在乙酰短杆菌的核苷磷酸化酶和磷酸单酯酶作用下转化成鸟嘌呤、胸腺嘧啶、鸟苷和产物2′-脱氧鸟苷。通过考察菌体量、反应温度、反应pH值、底物浓度和磷酸盐浓度等参数,得到反应最适条件为20 mmol/L的胸苷和鸟苷酸,30 mmol/... 详细信息

胸苷和鸟苷酸在乙酰短杆菌的核苷磷酸化酶和磷酸单酯酶作用下转化成鸟嘌呤、胸腺嘧啶、鸟苷和产物2′-脱氧鸟苷。通过考察菌体量、反应温度、反应pH值、底物浓度和磷酸盐浓度等参数,得到反应最适条件为20 mmol/L的胸苷和鸟苷酸,30 mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.0),5%游离乙酰短杆菌在60℃下进行反应,经6 h胸苷转化率就可达到最高为56.4%。反应液通过离子交换的方法进行分离,可以得到纯度90.2%的2′-脱氧鸟苷。

关键词：核苷磷酸化酶乙酰短杆菌 2′-脱氧鸟苷酶法合成

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应用乙酰短杆菌酶法合成2’-脱氧腺苷

工业微生物 2006年第1期36卷 30-33页

作者：洪云海丁庆豹欧伶邱蔚然华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 上海秋之友生物科技有限公司

胸苷和腺嘌呤在乙酰短杆菌作用下转化成胸腺嘧啶和目标产物2’-脱氧腺苷。50mL的三角瓶装液10mL,40mmol/L的底物,50mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7)进行反应,5%游离乙酰短杆菌在55℃下,经1h转化率就可达到65.6%。

关键词：核苷磷酸化酶乙酰短杆菌 2’-脱氧腺苷酶法合成

乙酰短杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆及其表达

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德州学院学报 2005年第4期21卷 5-7页

作者：沈亮德州学院生物系山东德州253023

用PCR方法扩增乙酰短杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因(ALDC),得到0.78 kb的DNA片段,扩增片段重组到表达载体pQE-9中,在大肠杆菌中得到高效表达,酶活性可达100 U/mL发酵液.

关键词：乙酰短杆菌 α-乙酰乳酸脱羧酶基因大肠杆菌高效表达

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乙酰短杆菌中核苷磷酸化酶的性质研究

现代生物医学进展 2013年第23期13卷 4419-4423页

作者：张春艳许彦梅王玥丁庆豹欧伶上海斯贝生物科技有限公司上海200235 华东理工大学生物反应器重点实验室上海200237

以乙酰短杆菌完整细胞为酶源,研究不同条件下核苷磷酸化酶的性质。方法:将乙酰短杆菌湿菌体置于不同保藏温度及在不同种类缓冲溶液中考察其稳定性;在有或无核保护下核苷磷酸化酶对热的稳定性;并设计核苷的磷酸解反应或合成反应,测定核... 详细信息

以乙酰短杆菌完整细胞为酶源,研究不同条件下核苷磷酸化酶的性质。方法:将乙酰短杆菌湿菌体置于不同保藏温度及在不同种类缓冲溶液中考察其稳定性;在有或无核保护下核苷磷酸化酶对热的稳定性;并设计核苷的磷酸解反应或合成反应,测定核苷磷酸化酶的活力及酶促反应的表观米氏常数。结果:乙酰短杆菌中的核苷磷酸化酶经低温保藏可以保持较长时间的稳定性;菌体在60℃处理1小时即失去核苷磷酸化酶的活力,但是添加胸腺嘧啶有明显的保护作用;菌体中核苷磷酸化酶的合成能力明显大于磷酸解能力;对尿苷和5-甲基尿苷的表观米氏常数和最大反应速率分别为16.7、11.4 mmol/L,0.0063、0.0041 mmol/***。结论:含核苷磷酸化酶的乙酰短杆菌完整细胞作为酶源,在低温下可以长时间保藏,反应中的碱基对核苷磷酸化酶的抗热性有益,该菌种可以作为工业上核苷磷酸化酶的来源。

关键词：核苷磷酸化酶乙酰短杆菌酶学性质 5-甲基尿苷尿苷

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由鸟苷经酶法生产利巴韦林

中国医药工业杂志 1997年第1期28卷 14-17页

作者：邱蔚然唐洁宇高媛唐孝宣华东理工大学生化工程研究所

利用乙酰短杆菌ＴＱ－９５２细胞为酶源，酶法生产利巴韦林。当在２５ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ７．０）磷酸钾缓冲液中鸟苷和１，２，４－三唑－３－甲酰胺浓度分别为２００ｍｍｏｌ／Ｌ，酶用量为５０ｍｇ／ｍｌ（湿重），最适反应温度为６... 详细信息

利用乙酰短杆菌ＴＱ－９５２细胞为酶源，酶法生产利巴韦林。当在２５ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ７．０）磷酸钾缓冲液中鸟苷和１，２，４－三唑－３－甲酰胺浓度分别为２００ｍｍｏｌ／Ｌ，酶用量为５０ｍｇ／ｍｌ（湿重），最适反应温度为６５℃，２４ｈ达到反应终点，收率为７８％。该菌种酶活力高，稳定性好，本法高效低耗，有较高实用价值

关键词：利巴韦林乙酰短杆菌核苷磷酸化酶

细胞酶促转化过程中胸苷磷酸化酶(TPase)活性测定方法的研究

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药物生物技术 2014年第3期21卷 222-225页

作者：冯璐夏晓敏邱蔚然周长林中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 南通秋之友生物科技有限公司江苏南通226236

β-胸苷在乙酰短杆菌胸苷磷酸化酶的作用下,反应生成胸腺嘧啶。该文利用紫外分光光度法建立了细胞酶促转化过程中胸苷磷酸化酶活性的测定方法。β-胸苷在胸苷磷酸化酶作用下生成胸腺嘧啶,由于β-胸苷与胸腺嘧啶在300 nm处均有吸光度,反... 详细信息

β-胸苷在乙酰短杆菌胸苷磷酸化酶的作用下,反应生成胸腺嘧啶。该文利用紫外分光光度法建立了细胞酶促转化过程中胸苷磷酸化酶活性的测定方法。β-胸苷在胸苷磷酸化酶作用下生成胸腺嘧啶,由于β-胸苷与胸腺嘧啶在300 nm处均有吸光度,反应后通过测量反应液300 nm处的吸光度,可测定反应中生成的胸腺嘧啶的量,从胸腺嘧啶的生成量的多少来判断胸苷磷酸化酶的活性。研究结果表明,在5%菌体浓度、10 mmol/Lβ-胸苷、0.1 mol/L的磷酸缓冲液(pH 6.9)中,37℃反应20 min,即可准确测定胸苷磷酸化酶的活性。利用上述方法测定胸苷磷酸化酶活性,活性能达80%,高于前人报道的方法所测得的酶活性。其中,乙酰短杆菌来源的胸苷磷酸化酶的表观米氏常数Km为11.9 mmol/L。

关键词：胸苷磷酸化酶乙酰短杆菌紫外分光光度法细胞酶酶活性表观米氏常数

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酶法合成抗癌新药氟铁龙前体——5-FUR

华东理工大学学报（自然科学版） 2001年第2期27卷 143-146页

作者：闫蓬勃丁庆豹邱蔚然严滢石佳瑛华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

筛选得到一株核苷磷酸化酶活力高的乙酰短杆菌 ,以该菌体为酶源酶法合成抗癌新药氟铁龙前体 5-氟尿苷 ,所用反应物为鸟苷和 5-氟尿嘧啶。在 1 50 m L的摇瓶装液 1 5m L的条件下进行研究 ,结果显示 :菌体添加量 2 0～ 30 g/L,底物浓度 1 ... 详细信息

筛选得到一株核苷磷酸化酶活力高的乙酰短杆菌 ,以该菌体为酶源酶法合成抗癌新药氟铁龙前体 5-氟尿苷 ,所用反应物为鸟苷和 5-氟尿嘧啶。在 1 50 m L的摇瓶装液 1 5m L的条件下进行研究 ,结果显示 :菌体添加量 2 0～ 30 g/L,底物浓度 1 0 0 mmol/L,磷酸盐浓度 50 mmol/L( p H8.0 ) ,60°C,摇床转速 1 60 r/min,反应 4h,5-氟尿苷的转化率可以达到 60

关键词：酶法合成 5-氟尿苷乙酰短杆菌 5-氟尿嘧啶鸟苷抗癌药物