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利用MODDE软件全因子分析优化乙脑灭活疫苗的纯化工艺

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生物化工 2022年第6期8卷 78-80页

作者：李庆岸于海曹鹏康文哲辽宁成大生物股份有限公司辽宁沈阳110179

目的:通过MODDE软件全因子分析实验方法建立一种乙脑灭活疫苗纯化新工艺,进一步去除乙脑灭活疫苗中细胞残留DNA。方法:将传统的Sepharose 6 Fast Flow层析所获得的初步纯化液作为样品,进行Sartobind Q膜层析,选取上样量、盐浓度、pH、流... 详细信息

目的:通过MODDE软件全因子分析实验方法建立一种乙脑灭活疫苗纯化新工艺,进一步去除乙脑灭活疫苗中细胞残留DNA。方法:将传统的Sepharose 6 Fast Flow层析所获得的初步纯化液作为样品,进行Sartobind Q膜层析,选取上样量、盐浓度、pH、流速4个因子为输入变量,以乙脑疫苗抗原回收率、细胞残留DNA去除率为输出响应值,使用全因子DOE模型进行实验。结果:在实验参数范围内[上样量(40~100 mL)、盐浓度(0.3~0.7 mol/L)、pH(6.0~8.0)、流速(1~20 mL/min)],增加Sartobind Q膜层析的样品细胞残留DNA低于每剂50 pg,去除率在90%以上。结论:通过应用DOE实验设计,找到Sartobind Q膜合适的工艺设计空间,有效去除乙脑灭活疫苗中的细胞残留DNA,提高疫苗临床应用的安全性。

关键词： DOE 乙脑灭活疫苗抗原回收率细胞DNA残留量

细胞因子基因多态性与乙脑灭活疫苗抗体反应及HCV慢性感染相关性研究

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细胞因子基因多态性与乙脑灭活疫苗抗体反应及HCV慢性感染相关性...

作者：许秀雯北京协和医学院

学位级别：硕士

背景：细胞因子充当免疫细胞间的信使分子,而在机体固有免疫与适应性免疫中发挥重要作用。Thl细胞分泌的细胞因子TNF-α, IL-2, IFN-γ等参与细胞免疫及迟发型超敏反应,在机体抗细胞内微生物感染和细胞免疫所引起的炎症反应中发挥重要作... 详细信息

背景：细胞因子充当免疫细胞间的信使分子,而在机体固有免疫与适应性免疫中发挥重要作用。Thl细胞分泌的细胞因子TNF-α, IL-2, IFN-γ等参与细胞免疫及迟发型超敏反应,在机体抗细胞内微生物感染和细胞免疫所引起的炎症反应中发挥重要作用;Th2细胞分泌的细胞因子IL-4、IL-5、IL-10等参与体液免疫,在抗胞外微生物和寄生虫感染免疫,以及变态反应中发挥重要作用。机体细胞因子网络受到严密控制,细胞因子的表达与功能受基因多态性位点的调节,近年来发现这些多态性位点与一些自身免疫病,病毒感染过程,以及疫苗抗原诱导的免疫反应过程密切相关。宿主遗传因素是影响疫苗免疫反应的重要因素。在不同个体中,相同的疫苗所诱导的免疫应答也是不一致的。然而,有关这方面的研究多集中于乙肝,麻疹,天花等诱导的免疫应答水平相对较低的疫苗。而在一些免疫原性较好的传统灭活疫苗中,宿主遗传因素的效应常常被忽视。因此,本研究从细胞因子基因多态性位点着手,探究其与乙脑灭活疫苗的体液免疫是否相关。此外,多项研究表明,细胞因子基因多态性同样影响着病原的感染进程。丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染后,80%人群发展为慢性感染。在病毒感染过程中,机体的天然免疫、固有免疫、适应性免疫对病毒的清除具有重要作用。其中,Thl类细胞因子TNF-α, IL-2, IFN-γ介导细胞免疫过程对HCV的清除尤为重要。因此,本文进行的Thl类细胞因子TNF-α, IL-2基因多态性位点与HCV慢性感染相关性研究,可能为临床诊断及治疗提供基础数据。方法：第一部分：以525名乙脑灭活疫苗接种儿童为研究对象,采用Taqman探针基因分型方法检测细胞因子TNF-a基因rs1800629(-308, G/A), rs3093668(G/C), rs3093726(T/C);IL-2基因rs11932411(A/G), rs11575812(A/G), rs2069762(-330, A/C), rs2069763(-34, T/G), rs4833248(-2811, A/G);IL-4基因rs2243247(-1138, G/A), rs2243248(-1100, A/C), rs2243250(-590, T/C), rs2070874(-33, C/T), rs2227284(2979, T/G), rs2243291 (C/G), rs2243292(A/G);以及IL-10基因rs1800896(-1082, A/G), rs1800871 (-819, T/C), rs1800872(-592, A/C)共18个位点的基因多态性,DNA测序验证,构建单倍型,评估细胞因子多态性位点与乙脑灭活疫苗免疫反应的相关性。第二部分：以云南地区HCV慢性感染者380名,正常对照367名为研究对象,采用TaqMan探针基因分型方法对TNF-α基因rs1800629(-308,G/A),rs3093668(G/C), rs3093726(T/C) IL-2基因rs11575812(A/G), rs2069762(-330, A/C), rs2069763(-34, T/G), rs4833248(-2811, A/G)共7个多态性位点进行基因分型,构建单倍型,评估细胞因子多态性位点与HCV慢性感染相关性。结果：(1)在乙脑疫苗接种的免疫应答研究中,IL-2基因s11932411(A/G), IL-4基因rs2243247(-1138, G/A), rs2243292(A/G)在研究人群中不存在多态性。携带IL-10基因rs1800896(-1082,A/G)位点基因型GG的人群,其乙脑几何平均抗体滴度显著高于携带AA+AG基因型的人群(P乙脑几何平均抗体滴度及阳转率都显著低于携带AA+GG基因型的人群(P乙脑几何平均抗体滴度显著低于携带GG+TT基因型的人群(P乙脑几何平均抗体滴度显著低于携带GG+TT基因型的人群(P<0.05)。(2)在HCV慢性感染研究中,IL-2基因rs2069762(-330, A/C) CC基因型频率在HCV慢性感染组显著高于正常对照组(0.161 vs 0.101, P<0.05), rs2069763(-34,T/G)等位基因G的频率在HCV慢性感染组显著高于正常对照组(0.56

关键词：乙脑灭活疫苗细胞因子单核苷酸多态性 HCV慢性感染

miRNAs基因多态性与HCV慢性感染和乙脑灭活疫苗诱导抗体反应的相关性研究

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miRNAs基因多态性与HCV慢性感染和乙脑灭活疫苗诱导抗体反应的相...

作者：檀林萍北京协和医学院

学位级别：硕士

丙型肝炎病毒感染（hepatitis C virus,HCV）是世界范围的严重公共卫生问题之一。除了大约25%感染者能自发清除以外,其他的感染者会转变成慢性感染,导致肝硬化甚至肝癌,严重危害人类健康。HCV感染机体会造成不同的疾病图谱,其原因主要... 详细信息

丙型肝炎病毒感染（hepatitis C virus,HCV）是世界范围的严重公共卫生问题之一。除了大约25%感染者能自发清除以外,其他的感染者会转变成慢性感染,导致肝硬化甚至肝癌,严重危害人类健康。HCV感染机体会造成不同的疾病图谱,其原因主要包括环境因素、病毒因素以及宿主遗传因素等多个方面。其中,关于宿主遗传因素在病毒感染机体过程中作用的研究受到了广泛的关注。同时,研究发现,在同一人群的不同个体中,疫苗所诱导的免疫应答不一致,这也提示我们在评估疫苗免疫应答效果的过程中应该考虑到遗传因素的影响。近年来,关于宿主遗传因素在病原感染及疫苗诱导的免疫反应的免疫应答中的作用越来越被重视。miRNA是一类由约22个核苷酸组成的单链小分子RNA,主要通过形成RNA介导的沉默复合物（RNA-induced silencing complex silencing complex,RISC）与病毒或宿主RNA靶向互补结合,导致翻译受抑制。通过这一作用机制,miRNA在机体的免疫防御系统和病毒感染机体过程中扮演着重要角色,已有多项研究表明miRNAs基因的多态性影响病原体的感染进程。因此,本研究分别以HCV慢性感染者和乙型脑炎灭活疫苗（inactivated Japanese encephalitis vaccine,JEV）接种者作为研究对象,采用TaqMan探针基因分型方法检测 miR-196a2 中的 rs11614913、miR-146a 中的 rs2910164、miR-26a1 中的 rs7372209、miR-124 中的 rs531564、miR-185 中的 rs887205 和rs2008591、miR-210 中的 rs7935908、miR-31 中的 rs13283671 共 8 个 SNPs 位点的基因多态性,分析这些SNPs的基因型、等位基因在HCV慢性感染组及对照组,以及JEV抗体阳转组及阴性组中的分布特征,开展miRNAs基因在HCV慢性感染和乙脑疫苗诱导的抗体反应中的相关性研究。结果显示,在HCV慢性感染组与健康对照组中的研究显示,选取的8个SNPs位点的基因型及等位基因在云南汉族地区HCV慢性感染组及健康对照组中的分布差异均无统计学意义（P＞0.05）;在乙脑灭活疫苗免疫应答的研究中,miR-210中的rs7935908位点的CC基因型频率在抗体阳转组中高于抗体阴性组（P=0.039）,同样,miR-185中rs887205 A等位基因频率在抗体阳转组中高于抗体阴性组（P=0.046,OR=1.329,95%CI=1.005～1.758）,miR-210 中 rs7935908 C 等位基因频率在抗体阳转组中高于抗体阴性组（P=0.014,OR=1.461,95%CI=1.077～1.982）。构建的最优遗传模型同样显示,rs887205（A＞G）、rs7935908（C＞T）的与乙脑抗体的阳转率均具有相关性（P=0.029 OR=0.561,95%CI 0.332～0.948;P=0.027 OR=2.366,95%CI=1.083～5.167）。进一步分析结果显示,在女性群体中,携带rs887205 A等位基因频率在抗体阳转组中高于抗体阴性组（P=0.040,OR=1.531.95CI=1.018～2.299）,rs2008591 C等位基因频率在抗体阳转组中高于抗体阴性组（P=0.030,OR=0.667.95CI=0.42612～1.046）,rs7935908 C等位基因频率在抗体阳转组中高于抗体阴性组P＝0.030,OR=0.667.95CI=0.42612～1.046)。在 7～12 岁接种者中,miR-210 中rs7935908位点携带基因型CC频率在抗体阳转组中高于抗体阴性组（P=0.005）,携带rs7935908位点C等位基因频率在抗体阳转组中高于抗体阴性组（P=0.001,OR=0.552.95CI=0.379-0.804）。综上,本研究中选取的8个miRNASNPs位点在云南汉族群体中,未显示与HCV慢性感染的相关性。选择的这8个SNPs位点与乙脑灭活疫苗阳转率的相关性研究显示:miR-31中的rs887205 A等位基因可能具有促进乙脑抗体阳转的作用,携带基因型AA的个体可能更容易产生有效的乙脑疫苗抗体应答;miR-210中的rs7935908 C等位基因可能具有促进乙脑灭活抗体阳转的作用,携带基因型CC的个体可能更容易产生有效的乙脑灭活疫苗抗体应答。

关键词： miRNAs HCV 慢性感染乙脑灭活疫苗单核苷酸多态性

乙脑灭活疫苗与麻风疫苗同时预防接种的不良反应观察

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中国乡村医药 2016年第17期23卷 61-62页

作者：钱锡元杭州市下城区东新街道社区卫生服务中心防保科 310004

目的观察乙脑灭活疫苗与麻风疫苗同时接种的不良反应。方法来该中心预防门诊接种的8个月到1岁健康儿童340人,按家长意愿分为单独接种乙脑疫苗组(乙脑组)75人,单独接种麻风疫苗组(麻风组)110人,乙脑疫苗+麻风疫苗组(乙脑+麻风组)155人。... 详细信息

目的观察乙脑灭活疫苗与麻风疫苗同时接种的不良反应。方法来该中心预防门诊接种的8个月到1岁健康儿童340人,按家长意愿分为单独接种乙脑疫苗组(乙脑组)75人,单独接种麻风疫苗组(麻风组)110人,乙脑疫苗+麻风疫苗组(乙脑+麻风组)155人。接种后现场留观30分钟如有异常记录结果并处理,同时在24、48、72小时后进行电话随访调查并记录。结果接种后不良反应:乙脑组19例次(12.7%),麻风组11例(10.0%),乙脑+麻风组16例(10.3%);三组间差异无统计学意义。未观察到严重危及生命的不良反应。结论乙脑灭活疫苗与麻风疫苗联合接种,可减少就诊次数,且与单独乙脑疫苗与单独麻风疫苗接种比较,不良反应未见增加。

关键词：乙脑灭活疫苗麻风疫苗预防接种异常反应联合接种

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国产乙脑灭活疫苗安全性主动监测结果分析

浙江预防医学 2016年第6期28卷 600-603页

作者：许玉洋许二萍李倩车鑫仁刘仕俊杜渐张小平王骏顾雯雯杭州市疾病预防控制中心浙江杭州310021 浙江省疾病预防控制中心

目的评价乙脑灭活疫苗常规应用后的安全性。方法采用主动监测法,将纳入观察的接种儿童分为乙脑灭活疫苗第一剂组和第二剂组,麻疹风疹联合减毒活疫苗(麻风疫苗)组,乙肝疫苗第三剂组以及乙脑灭活疫苗和麻风疫苗联合接种组5个组,分别在接种... 详细信息

目的评价乙脑灭活疫苗常规应用后的安全性。方法采用主动监测法,将纳入观察的接种儿童分为乙脑灭活疫苗第一剂组和第二剂组,麻疹风疹联合减毒活疫苗(麻风疫苗)组,乙肝疫苗第三剂组以及乙脑灭活疫苗和麻风疫苗联合接种组5个组,分别在接种后24、48及72 h对各组儿童进行一次主动随访,并收集疑似预防接种不良反应(AEFI)等疫苗安全性相关信息。结果 3 289名观察对象接种相应疫苗24、48和72 h后出现AEFI者分别为101人(3.07%)、47人(1.43%)和31人(0.94%),均无严重异常反应发生。乙脑灭活疫苗接种第一剂组接种后24 h内出现发热人数高于其他各组(P乙脑灭活疫苗第二剂组高(P=0.04)。乙脑灭活疫苗第一剂和第二剂接种后48 h的发热率较24 h均显著下降(P乙脑灭活疫苗和麻风疫苗联合接种后48 h发热人数高于其他组(P乙脑灭活疫苗接种后无严重异常反应发生,且所有接种反应均为一过性;联合接种的AEFI发生率是否高于单苗接种尚需进一步研究。

关键词：乙脑灭活疫苗安全性主动监测

接种乙脑灭活疫苗加重反应的防治(附279例临床分析)

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黑龙江医药 1992年第11期 25-26页

作者：杨汉民李丽霞齐齐哈尔黑龙江化工厂医院内儿科齐齐哈尔黑龙江化工厂医院预防保健科

本文报告279例接种乙脑疫苗后出现加重反应的原因、防治及应吸取的教训。临床资料 1.一般资料:接种乙脑灭活疫苗共302人,男148人,女154人,平均年龄10岁,(7～13岁)。本组观察的对象,住院141人,家庭病床138人,均为1991年10月27日经注射91... 详细信息

本文报告279例接种乙脑疫苗后出现加重反应的原因、防治及应吸取的教训。临床资料 1.一般资料:接种乙脑灭活疫苗共302人,男148人,女154人,平均年龄10岁,(7～13岁)。本组观察的对象,住院141人,家庭病床138人,均为1991年10月27日经注射91002批提纯乙脑灭活疫苗后7～72小时间出现不同程度临床症状和体征者共279例。 2.临床表现:发热:209例,37.5℃～39℃不等,占74.99％,但48小时后,体温在37.6℃～38.5℃

关键词：乙脑灭活疫苗乙脑疫苗疫苗接种反应

接种乙脑灭活疫苗加重反应的防治(附279例临床分析)

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黑龙江医学 1992年第11期17卷 25-26页

作者：杨汉民李丽霞齐齐哈尔黑龙江化工厂医院内儿科齐齐哈尔黑龙江化工厂医院预防保健科

本文报告279例接种乙脑疲苗后出现加重反应的原因、防治及应吸取的教训。临床资料 1.一般资料:接种乙脑灭活疫苗共302人,男148人,女154人,平均年龄10岁,(7～13岁)。本组观察的对象,住院141人,家庭病床138人,均为1991年10月27日经注射91... 详细信息

本文报告279例接种乙脑疲苗后出现加重反应的原因、防治及应吸取的教训。临床资料 1.一般资料:接种乙脑灭活疫苗共302人,男148人,女154人,平均年龄10岁,(7～13岁)。本组观察的对象,住院141人,家庭病床138人,均为1991年10月27日经注射91002批提纯乙脑灭活疫苗后7～72小时间出现不同程度临床症状和体征者共279例。 2.临床表现:发热:209例,37.5℃～39℃不等,

关键词：乙脑灭活疫苗临床分析疫苗接种接种者临床资料临床症状接种反应接种剂量益康宁乙脑疫苗

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接种乙脑灭活疫苗致喉头水肿1例报告

华南预防医学 2000年第4期26卷 40-41页

作者：凌广华林伟忠平远县东石中心卫生院平远县卫生防疫站!514600

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浓制乙脑灭活疫苗人体免疫后血清学效果观察

福建医药杂志 1985年第2期 26-27页

作者：杨文治厦门市卫生防疫站福建省卫生防疫站福清县卫生防疫站

我省自1968年开始改用地鼠肾细胞所培养的灭活疫苗(下称淡苗),乙脑发病率明显下降。1981年起试用其浓制剂(下称浓苗),注射剂量仅为淡苗的20％,经3年观察,在其他乙脑预防措施无明显改变的情况下,发现有些地区乙脑发病率有回升趋势。因此... 详细信息

我省自1968年开始改用地鼠肾细胞所培养的灭活疫苗(下称淡苗),乙脑发病率明显下降。1981年起试用其浓制剂(下称浓苗),注射剂量仅为淡苗的20％,经3年观察,在其他乙脑预防措施无明显改变的情况下,发现有些地区乙脑发病率有回升趋势。因此,必须重新考核浓苗的免疫效果,我们在1983年浓苗预防接种工作中,有计划地对接种对象进行了血清学效果观察,现报告如下。

关键词：血清学效果乙脑灭活疫苗人体免疫