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UPLC-MS/MS法结合化学计量学法分析酸枣仁和理枣仁中多指标成分

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中草药 2021年第8期52卷 2400-2407页

作者：武宝爱闫锋申晨曦马敏张福生杜晨晖闫艳山西大学山西太原030006 山西省食品药品检验所山西太原030001 山西中医药大学山西太原030619

目的建立大宗中药材酸枣仁的多指标含量测定方法,为准确发现酸枣仁和理枣仁中差异性质量控制成分提供参考。方法采用UPLC-MS/MS多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)正、负离子切换扫描模式,ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(150 mmX... 详细信息

目的建立大宗中药材酸枣仁的多指标含量测定方法,为准确发现酸枣仁和理枣仁中差异性质量控制成分提供参考。方法采用UPLC-MS/MS多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)正、负离子切换扫描模式,ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(150 mmX2.1 mm,1.8μm)进行分离,流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),进行梯度洗脱,测定16批酸枣仁和13批理枣仁中乌药碱、木兰花碱、维采宁Ⅱ、斯皮诺素、当药黄素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、6’’’-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量,并结合主成分分析(principal component analysis,PCA)和偏最小二乘判别分析(partial least squares discrimination analysis,PLS-DA)评价酸枣仁和理枣仁中9种成分的差异。结果9种成分在相应的浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)>0.9991,仪器精密度RSD乌药碱、木兰花碱、当药黄素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、酸枣仁皂苷A和B的含量显著高于理枣仁(P<0.01),而理枣仁中斯皮诺素、维采宁Ⅱ和6’’’-阿魏酰斯皮诺素的含量显著高于酸枣仁(P<0.01)。PCA和PLS-DA结果表明,酸枣仁和理枣仁可明显分开,两者组内样品成分具有很强的相似性,而组间差异较大。结论建立了专属性强、灵敏度高的酸枣仁和理枣仁质量差异性评价方法,为两者质量差异性评价的指标成分选择提供依据,为阐明理枣仁可否作为酸枣仁的代用品提供实验基础。

关键词：酸枣仁理枣仁乌药碱木兰花碱维采宁Ⅱ 斯皮诺素当药黄素山柰酚-3-O-芸香糖苷 6′′′-阿魏酰斯皮诺素酸枣仁皂苷A 酸枣仁皂苷B 质量评价

基于代谢组学与肠道菌群探讨炒酸枣仁治疗睡眠-觉醒昼夜节律障碍小鼠模型的作用机制

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中草药 2024年第18期55卷 6208-6225页

作者：何灵张圣美陶宇裴香萍闫艳杜晨晖山西中医药大学中药与食品工程学院山西太原030619 山西大学中医药现代研究中心山西太原030006

目的通过持续光照4周复制睡眠-觉醒昼夜节律障碍(circadian rhythm sleep-wake disorder,CRSWD)模型,探讨炒酸枣仁对CRSWD小鼠的作用及作用机制。方法采用雄性C57BL/6J小鼠,持续光照4周复制CRSWD模型,给予炒酸枣仁进行干预,期间测定小... 详细信息

目的通过持续光照4周复制睡眠-觉醒昼夜节律障碍(circadian rhythm sleep-wake disorder,CRSWD)模型,探讨炒酸枣仁对CRSWD小鼠的作用及作用机制。方法采用雄性C57BL/6J小鼠,持续光照4周复制CRSWD模型,给予炒酸枣仁进行干预,期间测定小鼠的体质量和摄食量,实验结束后分4个时间点(ZT0、ZT6、ZT12、ZT18)取材,利用qRT-PCR检测小鼠下丘脑时钟基因(circadian locomotor output cycles kaput,Clock)、脑和肌肉ARNT样蛋白1基因(brain-muscle arnt-like protein 1,Bmal1)、周期基因1(period 1,Per1)、Per2、隐花色素基因1(cryptochrom 1,Cry1)、视黄酸受体相关孤儿受体基因(retinoic acid receptor-related orphan,ROrα)、孤束核基因(reverse erythroblastosis virus,Rev-erbα)的表达;利用16S rRNA测序和GC-MS技术研究小鼠肠道菌群及短链脂肪酸含量的变化;采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术研究模型小鼠大脑差异代谢物的变化。结果炒酸枣仁显著调控模型小鼠下丘脑中Clock、Bmal1、Per1、Per2、Cry1、ROrα、Rev-erbα7个生物钟基因的表达(P<0.05、0.01、0.001),使其恢复到与空白组昼夜节律振荡趋势一致。肠道菌群16S rRNA测序与短链脂肪酸含量测定结果表明,炒酸枣仁可能通过升高梭状芽孢杆菌属Clostridium、乳酸杆菌属Lactobacillus、罗氏菌属Roseburia相对丰度,从而增加丁酸含量。脑代谢组学结果表明,ZT6和ZT18时共有的代谢通路有三羧酸循环、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、烟酸和烟酰胺代谢。炒酸枣仁可以通过调节梭状芽孢杆菌属、乳酸杆菌属及其代谢产物丁酸的含量,进一步影响体内氨基酸代谢通路,从而恢复CRSWD小鼠模型睡眠-觉醒昼夜节律。结论从节律生物钟基因水平、肠道菌群、脑代谢组学等多角度,揭示了炒酸枣仁治疗CRSWD小鼠模型的作用。

关键词：炒酸枣仁睡眠-觉醒昼夜节律障碍生物钟基因 16S rRNA测序代谢组学乌药碱木兰花碱维采宁斯皮诺素 6′′′-阿魏酰斯皮诺素酸枣仁皂苷A 酸枣仁皂苷B

基于多元统计分析和网络药理学的炒酸枣仁饮片质量标志物预测分析

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中草药 2021年第16期52卷 4811-4824页

作者：李泽杜鹤解玉军衡依然段慧竹裴香萍闫艳杜晨晖山西中医药大学中药与食品工程学院山西太原030619 山西大学中医药现代研究中心山西太原030006

目的基于多元统计分析和网络药理学分析预测炒酸枣仁饮片潜在的质量标志物(Q-Marker)。方法利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱联用(ultra performance liquid chromatography-quadrupole-electrostatic field orbital trap mass spectrometry,UHPLC-Q-Orbitrap-MS)解析生、炒酸枣仁饮片的主要成分,运用多元统计分析结合VIP>1和P碱、乌药碱等生物碱类成分;结合多元统计分析共找到木兰花碱、6"’-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、白桦脂酸等28个差异性成分;经网络药理学分析筛选出包括17个差异成分的Q-Marker库,分别为酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、美洲茶酸、白桦脂酸、木兰花碱、乌药碱、去甲荷叶碱、巴婆碱、斯皮诺素、当药黄素、维采宁Ⅱ、6"’-对-香豆酰斯皮诺素、6"’-阿魏酰斯皮诺素、芹菜素、桦木酮酸、牡荆素、异牡荆素;结合课题组前期研究及市售样品测定结果,最终确定木兰花碱、乌药碱、斯皮诺素、6"’-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和B作为炒酸枣仁的Q-Marker。结论分析预测的Q-Marker为炒酸枣仁的整体质量控制及临床应用提供科学依据,同时也为其功效关联物质的研究及作用机制的阐释奠定基础。

关键词：多元统计分析网络药理学酸枣仁炒酸枣仁质量标志物 UHPLC-Q-Orbitrap-MS 成分-靶点-通路木兰花碱乌药碱斯皮诺素 6’’’-阿魏酰斯皮诺素酸枣仁皂苷整体质量控制

血清化学与网络药理学关联研究酸枣仁的体内效应成分

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中草药 2017年第10期48卷 1936-1943页

作者：李强杜晨晖张敏闫艳高耀秦雪梅山西大学中医药现代研究中心山西太原030006 山西大学化学化工学院山西太原030006 山西中医学院中药学院山西太原030619

目的研究酸枣仁的血清移行成分,并构建入血成分-失眠靶点网络的效应物质研究模式。方法应用RSLC-Q Exactive Orbitrap-HRMS技术建立大鼠口服酸枣仁水提物后含药血清样品的分析方法。通过对比空白血清与含药血清色谱图异同,扣除内源性成... 详细信息

目的研究酸枣仁的血清移行成分,并构建入血成分-失眠靶点网络的效应物质研究模式。方法应用RSLC-Q Exactive Orbitrap-HRMS技术建立大鼠口服酸枣仁水提物后含药血清样品的分析方法。通过对比空白血清与含药血清色谱图异同,扣除内源性成分干扰,鉴定血中主要移行成分及其代谢产物。采用Drug Bank数据库检索失眠相关靶点,并通过String数据库和Cytoscape软件绘制失眠蛋白-蛋白相互作用网络;其次在TCMSP和CoolGeN数据库中分别检索酸枣仁入血成分所对应的靶点信息,将以上靶点集合与失眠蛋白网络进行映射,构建入血成分-失眠靶点网络。结果鉴定与表征了大鼠血清中15个移行成分,包括6个黄酮类及1个代谢物、5个三萜皂苷类和2个生物碱类及1个代谢物。将入血成分靶点集合与失眠蛋白-蛋白相互作用网络进行映射,筛选到乌药碱、酸李碱、芹菜素、斯皮诺素和酸枣仁皂苷A 5种入血成分与失眠蛋白靶点具有相关性。3类不同成分所作用的失眠靶点有交集也各有特异性。皂苷类特异性靶点为γ-氨基丁酸受体;生物碱类特异性靶点为褪黑素受体。初步认为上述5种成分为酸枣仁治疗失眠的体内效应成分。结论从体内化学成分群和潜在效应物质群2个层次共同锁定酸枣仁的效应物质,为酸枣仁体内效应成分的研究进行了有益的研究模式探索。

关键词：酸枣仁血清移行成分失眠蛋白网络效应成分筛选乌药碱酸李碱芹菜素

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酸枣仁饮片汤剂质量评价研究

中草药 2018年第19期49卷 4520-4527页

作者：张敏杜晨晖马敏张福生高晓霞闫艳秦雪梅山西大学中医药现代研究中心山西太原030006 山西大学化工学院山西太原030006 山西中医药大学山西太原030619 山西省食品药品检验所山西太原030001

目的建立酸枣仁饮片汤剂质量评价方法。方法收集10批酸枣仁饮片,制备成饮片汤剂。以出膏率和指标成分含量为指标,优化提取工艺。采用HPLC-UV/ELSD技术,建立多维度酸枣仁饮片汤剂指纹图谱。以相似度及相对保留时间、相对峰面积RSD综合评... 详细信息

目的建立酸枣仁饮片汤剂质量评价方法。方法收集10批酸枣仁饮片,制备成饮片汤剂。以出膏率和指标成分含量为指标,优化提取工艺。采用HPLC-UV/ELSD技术,建立多维度酸枣仁饮片汤剂指纹图谱。以相似度及相对保留时间、相对峰面积RSD综合评价10批酸枣仁饮片汤剂的质量。建立LC-MS/MS同时测定乌药碱、木兰花碱、维采宁、斯皮诺素、当药黄素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、6'''-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和B 9种指标成分含量的方法,并应用于酸枣仁饮片汤剂的质量评价。结果 10批酸枣仁饮片汤剂的平均出膏率为20.77%。在HPLC-UV 227、335 nm和HPLC-ELSD指纹图谱中分别标定了3、4、2个共有峰,不同检测波长下指纹图谱的相似度为0.942～0.988;相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3%。9种指标成分在相应的浓度范围内线性关系良好,相关系数r均>0.999 0;平均加样回收率为87.40%～110.42%,RSD均乌药碱0.25～0.27 mg/g、木兰花碱3.2～3.6mg/g、维采宁0.077～0.084 mg/g、斯皮诺素0.82～0.89 mg/g、当药黄素0.007 6～0.008 5 mg/g、山柰酚-3-O-芸香糖苷0.057～0.060 mg/g、6'''-阿魏酰斯皮诺素0.32～0.35 mg/g、酸枣仁皂苷A 0.83～0.91 mg/g、酸枣仁皂苷B 0.095～0.110 mg/g。结论建立了稳定、可靠的酸枣仁饮片汤剂质量评价方法,为后续药动学和药效学实验提供稳定的物质基础,同时为含酸枣仁的成方制剂质量控制提供依据。

关键词：酸枣仁饮片汤剂 HPLC 指纹图谱质量评价乌药碱木兰花碱维采宁斯皮诺素当药黄素山柰酚-3-O-芸香糖苷 6′′′-阿魏酰斯皮诺素酸枣仁皂苷A 酸枣仁皂苷B

整合指纹图谱与多成分含量测定的酸枣仁汤质量评价研究

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中草药 2022年第15期53卷 4698-4708页

作者：李佳涵王慧刘佳星杜晨晖闫艳山西大学中医药现代研究中心山西太原030006 山西中医药大学中药与食品工程学院山西太原030619

目的利用HPLC-DAD-ELSD分析技术,建立酸枣仁汤指纹图谱结合多成分含量测定方法,为其质量控制提供参考。方法采用Phenomenex C色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,柱温30... 详细信息

目的利用HPLC-DAD-ELSD分析技术,建立酸枣仁汤指纹图谱结合多成分含量测定方法,为其质量控制提供参考。方法采用Phenomenex C色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,柱温30℃,在282 nm和335 nm检测波长下,分别以芒果苷和斯皮诺素为参照峰;ELSD漂移管温度105℃,载气体积流量2.5 L/min条件下,以酸枣仁皂苷A为参照峰,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对10批自制酸枣仁汤进行相似度评价;同时建立13个指标成分含量测定方法,应用于市售产品及自制样品的质量评价。结果 10批自制酸枣仁汤的平均出膏率为21.57%,在282 nm和335 nm分别标定了5个和4个共有峰,相似度分别为0.907~0.999、0.926~0.999;HPLC-ELSD指纹图谱中标定了4个共有峰,相似度为0.946~0.999。13种指标成分在各自的线性范围内线性关系良好(r>0.995 9),平均加样回收率为93.69%,RSD值平均为2.04%。10批不同剂型市售产品中新芒果苷、乌药碱、芒果苷、异芒果苷、甘草苷、斯皮诺素、阿魏酸、6′′′-阿魏酰斯皮诺素、异甘草苷、知母皂苷BII、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和甘草酸的质量分数分别为0.30~3.38、0.02~0.20、0.27~6.04、0.33~1.38、1.54~12.02、0.16~0.87、0.16~1.27、0.04~0.35、0.25~3.12、3.66~20.92、0.36~0.98、0.32~0.89、4.90~36.37 mg/g,波动范围大。自制酸枣仁汤13种成分含量波动范围小。结论建立了酸枣仁汤HPLC-DAD-ELSD指纹图谱与多成分含量测定相结合的质量评价方法,方法准确、可靠,为市售酸枣仁汤产品的质量控制和体内药动学研究提供参考。

关键词：酸枣仁汤高效液相色谱法指纹图谱多成分含量测定质量评价新芒果苷乌药碱芒果苷异芒果苷甘草苷斯皮诺素阿魏酸 6′′′-阿魏酰斯皮诺素异甘草苷知母皂苷BII 酸枣仁皂苷A 酸枣仁皂苷B 甘草酸

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基于肠道菌群转化的酸枣仁质量标志物预测分析

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中草药 2019年第19期50卷 4634-4642页

作者：崔小芳杜晨晖裴香萍秦雪梅闫艳山西中医药大学中药学院山西太原030619 山西大学中医药现代研究中心山西太原030006

目的从肠道菌群代谢转化的角度,研究酸枣仁水提取物转化前后原型及代谢产物。方法酸枣仁水提取物与正常人肠道菌群在厌氧条件下分别共孵育0.083、1、4、12、24h。采用超高效液相色谱-高分辨质谱分析技术,对孵育液中的化合物进行鉴定并... 详细信息

目的从肠道菌群代谢转化的角度,研究酸枣仁水提取物转化前后原型及代谢产物。方法酸枣仁水提取物与正常人肠道菌群在厌氧条件下分别共孵育0.083、1、4、12、24h。采用超高效液相色谱-高分辨质谱分析技术,对孵育液中的化合物进行鉴定并分析代谢途径,继而以化合物峰面积百分比为指标,绘制不同时间点孵育液中黄酮、皂苷和生物碱类成分的变化规律。结果酸枣仁水提取物中共表征了31种原型成分,转化后的提取物中鉴定了4个代谢产物。苄基异喹啉类生物碱转化24 h内无明显降解。黄酮类成分的代谢反应类型丰富且反应程度剧烈,在24 h内降解完全。酸枣仁皂苷A和B主要发生水解反应。乌药碱、酸李碱、山柰酚-3-O-芸香糖苷、斯皮诺素、维采宁、酸枣仁皂苷A和B可作为酸枣仁潜在质量标志物(Q-marker)。结论将肠道菌群体外转化作为逆向佐证体内研究结果的一种方式,为中药Q-marker的预测提供一种新思路和新途径。

关键词：酸枣仁提取物肠道菌群代谢产物高分辨质谱质量标志物乌药碱酸李碱山柰酚-3-O-芸香糖苷斯皮诺素维采宁酸枣仁皂苷A 酸枣仁皂苷B

丹荷颗粒25种特征性成分LC-MS测定及制剂一致性分析

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中草药 2019年第24期50卷 5970-5979页

作者：马兆臣陈奎奎李月婷苏汝彬李乾阳娇郁映婷吴浩赵淑君肖红斌北京中医药大学中药学院北京100029 北京中医药大学中药分析与转化研究中心北京100029 北京中医药大学中医药研究院北京100029 石河子大学药学院新疆石河子832002

目的建立高效液相色谱-三重串联四级杆质谱(HPLC-MS/MS)联用同时测定丹荷颗粒中25种特征性成分(没食子酸、丹参素、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、芦丁、虎杖苷、金丝桃苷、紫云英苷、柚皮苷、橙皮苷、迷迭香酸、白藜芦醇、丹酚酸... 详细信息

目的建立高效液相色谱-三重串联四级杆质谱(HPLC-MS/MS)联用同时测定丹荷颗粒中25种特征性成分(没食子酸、丹参素、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、芦丁、虎杖苷、金丝桃苷、紫云英苷、柚皮苷、橙皮苷、迷迭香酸、白藜芦醇、丹酚酸B、槲皮素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、异鼠李素、大黄素、乌药碱、荷叶碱、隐丹参酮、丹参酮I、去氢荷叶碱、丹参酮IIA)含量的方法,并对其制剂批次间的一致性进行分析。方法HPLC采用Agilent Rapid Resolution HD C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液;质谱采用动态多反应监测(dMRM)扫描模式。对25种特征性成分进行含量测定。结果建立的HPLC-MS/MS方法在10 min内完成了25种特征性成分的同时定量分析,定量限分别为异鼠李素、乌药碱、去氢荷叶碱0.025 ng/mL、大黄素、丹参酮I 0.050 ng/mL,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷0.200 ng/mL,没食子酸、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、白藜芦醇、槲皮素、荷叶碱、丹参酮IIA 0.250 ng/mL,儿茶素、迷迭香酸、隐丹参酮0.500 ng/mL,丹参素、橙皮苷、丹酚酸B 1.000 ng/mL,虎杖苷2.000 ng/mL,柚皮苷5.000 ng/mL;且25种成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(r>0.9901),平均加样回收率85.16%~113.46%,RSD为2.01%~8.80%。此外,该方法较为全面地囊括了丹荷颗粒中君臣佐使药材的主要成分,25种成分总量为31.49 mg/g,其中丹酚酸B(9.44 mg/g)及橙皮苷(7.60 mg/g)质量分数最高,异鼠李素(0.79μg/g)质量分数最低。经箱线图(Box-plot)分析,10个不同批次丹荷颗粒制剂中25种成分质量分数波动范围(P值)在75%

关键词：丹荷颗粒 HPLC-MS/MS 动态多反应监测质量控制一致性分析没食子酸丹参素儿茶素绿原酸咖啡酸表儿茶素芦丁虎杖苷金丝桃苷紫云英苷柚皮苷橙皮苷迷迭香酸白藜芦醇丹酚酸B 槲皮素大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷异鼠李素大黄素乌药碱荷叶碱隐丹参酮丹参酮I 去氢荷叶碱丹参酮IIA

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潺槁树根皮化学成分的研究

中草药 2019年第12期50卷 2817-2821页

作者：林晓婉金燕孙万莹周欣欣张小坡海南医学院药学院

目的研究潺槁树Litsea glutinosa根皮的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱以及半制备HPLC等方法进行分离纯化,使用波谱分析等技术对得到的化合物进行结构鉴定。结果从潺槁树根皮中得到15个化合物,经波谱学方法鉴定为schiz... 详细信息

目的研究潺槁树Litsea glutinosa根皮的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱以及半制备HPLC等方法进行分离纯化,使用波谱分析等技术对得到的化合物进行结构鉴定。结果从潺槁树根皮中得到15个化合物,经波谱学方法鉴定为schizandriside(1)、南烛木糖苷(2)、乌药碱(3)、alangisesquin A(4)、alangisesquin B(5)、dihydrobuddlenol(6)、ssioriside(7)、dendranthemoside B(8)、epi-anhydrocinnzeylanol(9)、5'-甲氧基-异落叶松脂素-9'-O-β-D-吡喃木糖苷(10)、苯甲醇-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)、苯乙醇-β-D-吡喃葡萄糖苷(12)、正丁基-β-D-吡喃果糖苷(13)、N-顺式-阿魏酰酪胺(14)、N-反式-芥子酰酪胺(15)。结论化合物1~13为首次从该植物中分离得到。

关键词：潺槁南烛木糖苷乌药碱苯甲醇-β-D-吡喃葡萄糖苷吡喃木糖苷