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作者：谢净倍浙江师范大学

学位级别：硕士

义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)隶属于两栖纲(Amphibia)、有尾目(Caudata)、小鲵科(Hynobiidae)、小鲵属(Hynobius),仅在浙江分布,主要分布在金华、舟山、宁波、杭州等地。近年来,受栖息地破坏及人类活动影响,义乌小鲵野外种群急剧下降,... 详细信息

义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)隶属于两栖纲(Amphibia)、有尾目(Caudata)、小鲵科(Hynobiidae)、小鲵属(Hynobius),仅在浙江分布,主要分布在金华、舟山、宁波、杭州等地。近年来,受栖息地破坏及人类活动影响,义乌小鲵野外种群急剧下降,现被列为“国家二级重点保护动物”,对其抢救保护势在必行。然而,迄今为止关于义乌小鲵的群体遗传学及系统发育研究未见报道。本研究采用无损伤取样法,采集了义乌小鲵全域分布区(7个地理种群)128尾个体样本(包括义乌市里美(LM)、义乌市望道(WD)、浦江县章山(ZS)、浦江县里黄(LH)、杭州市萧山区欢潭(HT)、舟山市定海区岗后(GH)、舟山市定海区蚂蝗山(MHS),运用SSR分子标记以及mtDNA的Cytb、COI和D-loop三基因联合序列对义乌小鲵进行群体遗传学及系统发育分析,分析其历史进化。研究结果为有效评估义乌小鲵遗传资源现状,为制定更加合理科学的保护方案提供基础信息。本研究主要研究结果如下:(1)义乌小鲵转录组微卫星特征及SSR标记的开发通过MISA软件对义乌小鲵转录组测序数据进行分析,在37,638个Unigene中共检测到9,818条微卫星序列,其中主要包含了单、二、三、四、五和六碱基重复的微卫星类型。其中单碱基重复占比最大(74.57%),其次为二碱基重复单元(13.05%),五、六碱基重复类型的序列较少。本研究通过转录组信息进而筛选义乌小鲵SSR标记,根据序列信息共设计了140对引物,经过初筛、复筛后得到14对多态性良好的引物。在21个义乌小鲵样本中检测到55个等位基因,每对微卫星引物的平均等位基因(Na)为3.93;平均观测杂合度(Ho)为0.3866;平均期望杂合度(He)为0.6707;平均香农指数(I)为1.3706。表明本研究筛选的14对微卫星引物多态性良好,可用于后续义乌小鲵群体遗传学的分析。(2)基于SSR标记的义乌小鲵群体遗传多样性分析运用14对引物对7个地理种群义乌小鲵进行哈迪-温伯格平衡检验,其中发现7个义乌小鲵群体中存在一些位点偏离了哈温平衡(P义乌小鲵群体在14个SSR位点中其平均等位基因数(Na)为4.5;平均有效等位基因数(Ne)为3.1372;平均观测杂合度(Ho)为0.3903;平均期望杂合度(He)为0.6768;近交系数Fis(-0.4358-0.7392)表明义乌小鲵存在近亲交配现象。AMOVA遗传变异分析表明义乌小鲵个体间遗传差异的是变异主要来源。遗传瓶颈分析发现3个地理种群(ZS、GH、HT)经历了遗传瓶颈。聚类结果表明,5个大陆区域义乌小鲵群体(LM、WD、LH、ZS、HT)聚为一类且遗传分化处于中等偏下水平,2个舟山岛屿群体(GH、MHS)聚为一类;5个大陆区域群体与其他2个舟山岛屿群体(GH、MHS)遗传分化处于较高水平。根据Mantel检验,义乌小鲵7个地理种群间的地理距离与遗传距离无显著相关性。(3)基于mtDNA(Cytb、COI、D-loop)基因序列的义乌小鲵群体遗传学及系统发育分析采用Cytb、COI和D-loop 3个mtDNA基因联合序列对义乌小鲵7个群体的进行遗传多样性研究。结果表明,义乌小鲵mtDNA的Cytb、COI和D-loop基因序列联合序列长度为2,015 bp(Cytb为1,042 bp,COI为520 bp,D-loop为453 bp)且均存在A、T碱基的偏向性,这一现象符合两栖类mtDNA碱基组成含量特征。在128尾义乌小鲵个体中共获得57个单倍型,单倍型多样性(Hd)在0.667(HT)-0.966(ZS)之间,其中Hap2由里美(LM)、里黄(LH)共享,Hap3由里美(LM)、章山(ZS)共享,Hap31、32由里黄(LH)、章山(ZS)共享,其他单倍型均为各个地理种群独有;核苷酸多样性(π)在0.00049(HT)-0.00782(LM)之间,表明义乌小鲵群体整体遗传多样性水平较低。AMOVA遗传变异分析显示与SSR分子标记结果一致,个体差异变化是主要的遗传变异来源。遗传分化系数结果表明:岗后(GH)、蚂蝗山(MHS)群体与其他5个群体间存在较远的遗传距离和较大的遗传分化。Tajima's D、Fu's Fs检验及核苷酸错配分布显示:部分地理种群义乌小鲵发生过种群扩张事件(更新世晚期),可能是由于寒冷的环境使得义乌小鲵种群规模增长。基于57个单倍型基础上,构建系统发生树及单倍型网络图结果均支持7个地理种形成2个分支:大陆支系和岛屿支系,但分支之间无地理相关性。通过S-DIVA分析,祖先在7个义乌小鲵地理种群均有分布。义乌小鲵的共同祖先存在于更新世时期,根据mcmctree分析结果,距今约1百万年,这也是大陆区域与舟山区域支系分化

关键词：义乌小鲵微卫星标记线粒体标记遗传学系统发育

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义乌小鲵舟山种群遗传多样性分析

义乌小鲵舟山种群遗传多样性分析

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作者：刘盼浙江师范大学

学位级别：硕士

义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)是中国的特有种之一,仅分布于浙江义乌、镇海、舟山、萧山等地。其特殊的栖息地环境使得种群数量一直相对较少,目前己被IUCN(世界自然保护联盟)列为易危物种。舟山隶属于浙江省,是义乌小鲵的主要分布地之... 详细信息

义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)是中国的特有种之一,仅分布于浙江义乌、镇海、舟山、萧山等地。其特殊的栖息地环境使得种群数量一直相对较少,目前己被IUCN(世界自然保护联盟)列为易危物种。舟山隶属于浙江省,是义乌小鲵的主要分布地之一。近年来,经济快速的发展使得舟山地区的生态环境发生了较大的变化,人为活动的干扰造成了当地许多连续生境的片段化甚至破碎化。两栖动物由于扩散能力较差,对栖息地的区域稳定性要求较高,因此栖息地环境的改变会使得其种群数量急剧的下降。本研究采用近年来逐渐发展的微卫星分子标记的方法,通过近源种跨种扩增的方式来筛选义乌小鲵具有多态性的微卫星位点,并对舟山地区义乌小鲵的遗传多样性和遗传结构进行分析,以期为义乌小鲵的保护提供重要的理论依据。本文的主要研究结果如下:1、引用113对近源种(100对来自安吉小鲵,13对来自中国小鲵)的微卫星位点在义乌小鲵中进行跨种扩增试验,结果显示共有52对引物成功扩增,占总数的46.0%,其中安吉小鲵中有50对引物成功扩增,占总数的50%;中国小鲵中有2对引物成功扩增,占总数的15.4%;剩余的位点中有11对位点存在非特异性扩增或涂带现象,占总数的9.7%;有50对位点完全没有产生任何扩增产物,占总数的44.2%。本研究得到结果中安吉小鲵的跨种扩增成功率是高于中国小鲵,认为跨种扩增的成功率可能与物种的亲缘关系存在一定关系。2、利用银染法从微卫星位点中筛选出10对多态性位点大于2的引物,其中有3个位点在后续的PCR过程中,成功扩增出的样本量不足以进行后续的遗传分析,在后续的研究中被放弃;而其他7个位点的等位基因数目在3-4之间,平均值为3.43,有效等位基因平均数目为3.01,观测杂合度在0.250到0.537之间,期望杂合度在0.613到0.712之间。除此之外的42对引物在多态性检测中,得到的结果为纯合子或者仅有2个等位基因。3、通过7对引物对舟山地区的义乌小鲵的遗传多样性和遗传结构进行分析。结果显示,各位点的期望杂合度均达到了较高的遗传多样性水平(p＞0.5),且FIS显示种群内部存在较为严重的近交现象。遗传瓶颈的检测显示整个舟山种群存在瓶颈效应,只有在TPM模式检测下的38号位点,SMM模式检测下的38号、55号、56号以及97号位点才未经历瓶颈效应。4、对120个义乌小鲵个体间的亲缘关系进行了聚类分析,采用组间平均联结法,用欧式距离来衡量个体间的遗传距离,既而进行聚类分析,最终除去样本38、47和91,将78个个体在距离系数为16.065的水平上可聚为3类。分析原因可能存在物种本身的原因或人为因素,可以通过进一步的研究来深入探讨该现象。

关键词：义乌小鲵微卫星遗传多样性舟山地区瓶颈效应

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义乌小鲵微卫星位点的跨种扩增

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安徽农业科学 2018年第20期46卷 83-85页

作者：刘盼陈雅琴邵晨王宇浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004

[目的]筛选具有多态性的义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)微卫星位点。[方法]采用跨种扩增的方法从安吉小鲵(***)和中国小鲵(***)的113个微卫星位点中筛选具有多态性的义乌小鲵微卫星位点。[结果]筛选出11个具有多态性的义乌小鲵微卫星位... 详细信息

[目的]筛选具有多态性的义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)微卫星位点。[方法]采用跨种扩增的方法从安吉小鲵(***)和中国小鲵(***)的113个微卫星位点中筛选具有多态性的义乌小鲵微卫星位点。[结果]筛选出11个具有多态性的义乌小鲵微卫星位点。这些多态性微卫星位点的等位基因数为2~6个(平均3.55),观察杂合度为0.200~1.000(平均0.510),期望杂合度为0.500~0.732(平均0.662),多态信息含量为0.375~0.737(平均0.588)。[结论]筛选得到的具有多态性的11个义乌小鲵微卫星位点可应用于其种群遗传学和保护遗传学的研究。

关键词：义乌小鲵微卫星跨种扩增多态性

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气候变化对义乌市义乌小鲵栖息地适宜性影响

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浙江师范大学学报（自然科学版） 2023年第1期46卷 66-73页

作者：谢净倍费潇鸣裘林晨楼晓波黄建成郑荣泉浙江师范大学野生动物生物技术与保护利用省重点实验室浙江金华321004 浙江师范大学行知学院浙江兰溪321100 义乌市自然资源和规划局浙江义乌322000 浦江县自然资源和规划局森林资源科浙江浦江322200

义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)是中国特有的易危小鲵科动物,仅分布于浙江省的部分丘陵山地.为更好地保护其野生种群资源、维持生物多样性,于2017年11月—2019年3月开展野外调查,并采用MaxEnt模型对义乌市义乌小鲵的栖息地进行了分析和评... 详细信息

义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)是中国特有的易危小鲵科动物,仅分布于浙江省的部分丘陵山地.为更好地保护其野生种群资源、维持生物多样性,于2017年11月—2019年3月开展野外调查,并采用MaxEnt模型对义乌市义乌小鲵的栖息地进行了分析和评价.结果表明:调查发现义乌市义乌小鲵野外繁殖坑共计18处,包含成体2尾,幼体1 575尾,卵袋151对;气候变量重要性分析表明,降水量为最主要因子,累计贡献率为49.1%,其他重要因子分别为最冷季降水量(43.0%)、最湿季平均温度(40.3%)、降雨量季节性变化(4.7%)、最干季降水量(3.9%)、季节性变动率(3.7%);当前义乌小鲵在义乌市适宜面积共计438.88 km~2,其中,高适宜区面积为49.75 km~2,次适宜区面积为127.13 km~2,低适宜区面积为262.00 km~2;在3种气候情景下(RCP2.6,RCP4.5,RCP8.5),2050年高适宜分布区面积较当前分别增长58.3%,12.8%和18.1%,2070年高适宜分布区面积较当前分别增长45.5%,15.2%和19.0%.基于野外调查和模型结果,揭示了义乌小鲵当前栖息地环境及未来气候条件下对潜在栖息地的预测,对义乌小鲵野外资源的保护和管理有重要意义.

关键词：气候变化义乌小鲵 MaxEnt模型适宜性分布栖息地评价

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养殖密度和饵料密度对义乌小鲵同种相残率的影响

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江西水产科技 2022年第2期 7-9页

作者：谢净倍费潇鸣楼晓波张建春黄建成浙江师范大学野生动物生物技术与保护利用省重点实验室浙江金华321004 义乌市自然资源和规划局浙江金华321004 浦江县自然资源和规划局森林资源科浙江金华321004

用改变义乌小鲵养殖密度和饵料密度的方法(共3×3种处理),探究这两种因素对义乌小鲵幼体同种相残率的影响。结果表明,这两个因素对于吞吃率以及撕咬率存在交互作用,在这9种处理中,低密度高饵料组中的生长率最高以及义乌小鲵幼体长势最... 详细信息

用改变义乌小鲵养殖密度和饵料密度的方法(共3×3种处理),探究这两种因素对义乌小鲵幼体同种相残率的影响。结果表明,这两个因素对于吞吃率以及撕咬率存在交互作用,在这9种处理中,低密度高饵料组中的生长率最高以及义乌小鲵幼体长势最为均匀,而高密度低饵料组的同种相残现象最明显。

关键词：义乌小鲵养殖密度饵料密度

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喂食量及密度对“蝌蚪期”义乌小鲵生长及同种相残的影响

喂食量及密度对“蝌蚪期”义乌小鲵生长及同种相残的影响

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浙江省动物学会第十三次会员代表大会暨学术研讨会

作者：费潇鸣张丹丹郑荣泉浙江师范大学化学与生命科学学院浙江省野生动物生物技术与保护利用重点实验室

义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)隶属于两栖纲、有尾目、小鲵科、小鲵属,为濒危野生动物,研究价值极高。在野外,孵化不久的"蝌蚪期"义乌小鲵由于行动能力有限,也无法捕食比自身大太多的生物,因而当其所在的封闭水域内没有足够的食物,幼鲵... 详细信息

义乌小鲵(Hynobius yiwuensis)隶属于两栖纲、有尾目、小鲵科、小鲵属,为濒危野生动物,研究价值极高。在野外,孵化不久的"蝌蚪期"义乌小鲵由于行动能力有限,也无法捕食比自身大太多的生物,因而当其所在的封闭水域内没有足够的食物,幼鲵间就会发生互相捕食,直至变态完全。针对这一现象,我们探究了喂食量及密度对义乌小鲵幼体的生长及同种相残的影响。实验时间为2018年4月22日—2018年5月24日。采用3×3因子设计,即3种养殖密度(低密度下每筐5尾,中密度下每筐12尾,高密度下每筐22尾),以冻红虫为饵料,设3种喂食量(低喂食按体重的5%投喂,中喂食按体重的10%投喂,高喂食按体重的20%投喂),共9种处理组合,记录每组中义乌小鲵幼体的体重、全长、吞吃率及撕咬率。结果表明:(1)对于同一密度,高喂食量下义乌小鲵的全长及体重均显著高于低喂食量组,而对同一喂食量下,低密度下的小鲵体重及全长虽均高于中密度及高密度,但差异不显著。(2)在研究同种相残率的实验过程中发现,高密度低喂食量组相残率最高。在相同密度下,高喂食量下的幼体间撕咬率及吞吃率显著低于低喂食量;而在相同喂食水平下,高密度幼体间撕咬率与吞吃率显著高于低密度。因此,"蝌蚪期"小鲵适合高喂食量低密度的养殖模式,本研究为义乌小鲵仿生态人工养殖做了前期准备。

关键词：义乌小鲵同种相残密度撕咬率

来源： cnki会议评论

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中国西南部小鲵属的遗传分化(英文)

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动物学报 2003年第5期49卷 585-591页

作者： Jinzhong FU Mark HAYES 刘志君曾晓茂 Department of Zoology 中国科学院成都生物研究所成都610041

运用同工酶电泳和DNA测序技术 ,我们研究了中国东南部两种小鲵的遗传多样性。同工酶数据显示义乌小鲵和安吉小鲵之间存在中等水平的种间差异。而线粒体DNA序列数据则显示两种之间存在较高水平的种间差异。安吉小鲵种群存在明显的近亲繁... 详细信息

运用同工酶电泳和DNA测序技术 ,我们研究了中国东南部两种小鲵的遗传多样性。同工酶数据显示义乌小鲵和安吉小鲵之间存在中等水平的种间差异。而线粒体DNA序列数据则显示两种之间存在较高水平的种间差异。安吉小鲵种群存在明显的近亲繁殖现象 ;义乌小鲵种群间存在明显的分化。舟山群岛上义乌小鲵种群明显有别于大陆种群。

关键词：安吉小鲵义乌小鲵同工酶电泳细胞色素b序列遗传分化种群状态

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