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主动外排系统介导阴沟肠杆菌耐药机制新进展

中华医院感染学杂志 2013年第23期23卷 5894-5896页

作者：陈玉娇任爱民王红张淑文首都医科大学附属北京友谊医院感染科北京100050

阴沟肠杆菌（ECL）是存在于人和动物肠道内的正常菌群，由阴沟肠杆菌导致的感染多与严重的基础疾病，以及长期应用广谱抗菌药物和免疫抑制剂等因素有关，已成为院内获得性感染越来越重要的病原菌。近年来，由于长期和不合理使用广谱抗... 详细信息

阴沟肠杆菌（ECL）是存在于人和动物肠道内的正常菌群，由阴沟肠杆菌导致的感染多与严重的基础疾病，以及长期应用广谱抗菌药物和免疫抑制剂等因素有关，已成为院内获得性感染越来越重要的病原菌。近年来，由于长期和不合理使用广谱抗菌药物，使细菌产生多药耐药性（MDR）成为全球医疗难题。

关键词：阴沟肠杆菌多药耐药主动外排系统

主动外排系统介导的大肠杆菌多重耐药性的确证

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中国兽医学报 2005年第2期25卷 173-175页

作者：张海旺邓旭明任晓慧唐峰褚秀玲吉林大学畜牧兽医学院张家口农业高等专科学校河北张家口07513 河北农业大学水产学院黑龙江八一农垦大学

为检测和证实主动外排系统 (外输泵 )在细菌多重耐药机制中的作用 ,用四环素和水杨酸钠对大肠杆菌质控株进行了体外人工诱导 ,筛选出多重耐药株 ,再用能量抑制剂 CCCP(Carbongl cyanide m- chloropheyhydrazone)对耐药株和质控株进行了... 详细信息

为检测和证实主动外排系统 (外输泵 )在细菌多重耐药机制中的作用 ,用四环素和水杨酸钠对大肠杆菌质控株进行了体外人工诱导 ,筛选出多重耐药株 ,再用能量抑制剂 CCCP(Carbongl cyanide m- chloropheyhydrazone)对耐药株和质控株进行了环丙沙星摄取抑制试验。结果 :在耐药株 ,其菌体内环丙沙星稳态浓度明显低于质控株 ;多重耐药株在有 CCCP存在时 ,菌体内环丙沙星的浓度随时间的延长而递增 ,而无 CCCP的抑制时 ,菌体内环丙沙星的浓度递增缓慢 ;在质控株 ,不论有无 CCCP存在 ,菌体内环丙沙星的浓度都随时间的延长而呈递增趋势 ,且保持较耐药株明显高的水平。结论 :体外诱导多重耐药大肠杆菌多重耐药性的产生。

关键词： CCCP 大肠杆菌多重耐药性主动外排系统能量抑制剂环丙沙星外输泵

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主动外排系统与白念珠菌耐药关系研究

中华传染病杂志 2004年第4期22卷 229-233页

作者：韩旭东张永信复旦大学华山医院抗生素研究所上海200040

目的　了解国内白念珠菌的耐药与主动外排系统的关系。方法　通过检测若丹明 6G在敏感株和耐药株中的蓄积动力学 ,以明确白念珠菌的耐药与主动外排系统有关 ;以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法检测主动外排基因cdr1和cdr2的表达水平。... 详细信息

目的　了解国内白念珠菌的耐药与主动外排系统的关系。方法　通过检测若丹明 6G在敏感株和耐药株中的蓄积动力学 ,以明确白念珠菌的耐药与主动外排系统有关 ;以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法检测主动外排基因cdr1和cdr2的表达水平。结果　所有菌株在能量耗竭时 ,若丹明快速进入细胞内 ,耐药株和敏感株相似 ,在加入葡萄糖提供能量后 ,耐药株外排若丹明明显 ,而敏感株细胞外液中的若丹明含量仍继续下降。RT PCR发现临床分离的耐药株和诱导耐药株主动外排基因cdr1和cdr2的表达水平均显著高于敏感株 ,回复株上述基因表达水平介于两者之间。结论　国内临床分离白念珠菌的耐药性与主动外排系统高表达有关。氟康唑具有诱导主动外排基因cdr高表达的作用 ,主动外排基因cdr的高表达可使菌株获得多重耐药性 ,但该诱导效应是可逆的。

关键词：主动外排系统白念珠菌耐药株敏感株高表达基因临床分离目的关系研究结论

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主动外排系统介导细菌多重耐药的研究进展

现代预防医学 2014年第1期41卷 118-121页

作者：姚明晓苑广盈闻新棉泰山医学院病原生物学教研室济南市第四人民医院检验科

近年来,细菌的多重耐药性越来越高,主动外排系统是细菌产生多重耐药的主要原因,本文综述了目前已知的五种导致细菌多重耐药的主动外排系统,即耐药结节细胞分化超家族(Resistance Nodulation cell Division family,RND),主要易化子超家族... 详细信息

近年来,细菌的多重耐药性越来越高,主动外排系统是细菌产生多重耐药的主要原因,本文综述了目前已知的五种导致细菌多重耐药的主动外排系统,即耐药结节细胞分化超家族(Resistance Nodulation cell Division family,RND),主要易化子超家族(Major Facilitator Superfamily,MFS),小多重耐药家族(Small Multidrug Resistance family,SMR),多药和毒性化合物外排家族(Multidrug And Toxic compound Extrusion family,MATE)和ATP耦联盒家族(ATP binding cassette,ABC)。

关键词：主动外排系统细菌多重耐药

主动外排系统介导鲍曼不动杆菌多重耐药机制的研究

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主动外排系统介导鲍曼不动杆菌多重耐药机制的研究

作者：王子君川北医学院

学位级别：硕士

目的：了解本地区临床分离鲍曼不动杆菌对20种常用抗菌药物的耐药情况;检测鲍曼不动杆菌三种RND主动外排泵结构基因、耐消毒剂基因和四环素耐药基因的分布情况，探讨RND主动外排系统，四环素耐药基因及耐消毒剂基因的存在与介导细菌多... 详细信息

目的：了解本地区临床分离鲍曼不动杆菌对20种常用抗菌药物的耐药情况;检测鲍曼不动杆菌三种RND主动外排泵结构基因、耐消毒剂基因和四环素耐药基因的分布情况，探讨RND主动外排系统，四环素耐药基因及耐消毒剂基因的存在与介导细菌多重耐药之间的关系，为多重耐药鲍曼不动杆菌感染的治疗提供实验依据。方法：琼脂二倍稀释法测定临床分离的112株鲍曼不动杆菌对20种临床抗菌药物的MIC和外排泵抑制剂CCCP对菌株MIC的影响;PCR扩增分别检测RND主动外排系统的结构基因adeB、adeJ和adeG，耐消毒剂基因qacE△1和四环素耐药基因tetA，tetB，并分析三类基因检出率与多重耐药的关系。结果：112株鲍曼不动杆菌临床分离株科室分布以ICU（38.4%）和呼吸内科（16.1%）为主，标本主要来源为痰液（75.0%）。药敏实验结果显示鲍曼不动杆菌对多粘菌素B敏感率最高（100%），其次是亚胺培南和美罗培南，敏感率分别为82.4%和86.8%，其余抗菌药物的敏感率较低，在4.3-53.9%之间。对临床常用的头孢菌素类（头孢吡肟除外）、青霉素类、氨基糖苷类以及喹诺酮类药物耐药率都在70%以上。庆大霉素﹑氯霉素﹑四环素﹑头孢唑啉加入CCCP后显示出主动外排阳性菌株数量分别有58株（51.7%）、18株（16.1%）、13株（11.6%）、2株（1.7%）。在使用CCCP后庆大霉素的MIC值较使用前显著降低。adeB、adeJ及adeG的检出率分别达到了64.3%（72/112）、75.9%（85/112）和57.1%（64/112）,同时检出adeB、adeJ、adeG的菌株占49.1%（55/112）。同时检出adeB、adeJ和adeG的细菌对头孢曲松、头孢吡肟、庆大霉素、四环素和氯霉素五种药物耐药程度最严重;对7种药物耐药程度均显著高于仅检出adeB菌株、adeJ菌株和未检出三种RND外排泵结构基因的菌株。qacE△1阳性检出率为73.2%（82/112）。消毒剂耐药基因阳性株（82/112）对14种抗菌药物的耐药率均明显高于消毒剂的耐药基因阴性株（30/112）,且其多重耐药率（90.2%）高于消毒剂的耐药基因阴性菌株（70.0%）。在112株鲍曼不动杆菌中，对四环素耐药的细菌有76株，32.8%检测到tetA（25/76），73.6%检测到tetB（56/76），30.2%同时检测出tetA与tetB（23/76）;对四环素敏感的细菌有29株，3.4%检测到tetA（1/29），6.9%检测到tetB（2/29）。112株鲍曼不动杆菌tetB阳性检出率为55.3%（62/112），多重耐药率（96.7%）高于tetB阴性株（70.0%）。结论： 1、本地区鲍曼不动杆菌临床分离株对常用抗菌药物的耐药情况严重，碳青霉烯类、米诺环素以及多粘菌素B是多重耐药鲍曼不动杆菌感染治疗的有效药物。 2、RND主动外排系统结构基因adeB、adeJ和adeG在鲍曼不动杆菌临床分离株有较高检出率，与细菌多重耐药有关。 3、耐消毒剂基因在本地区鲍曼不动杆菌临床分离株的检出率较高，且在鲍曼不动杆菌多重耐药中发挥重要作用。 4、在耐四环素菌株中检测出tetA和tetB，尤其tetB检出率较高，与四环素类抗生素耐药关系密切。

关键词：鲍曼不动杆菌多重耐药性主动外排系统消毒剂耐药基因四环素耐药基因

鲍曼不动杆菌主动外排系统AdeABC、AdeIJK与多重耐药相关性

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中国抗生素杂志 2009年第2期34卷 100-103页

作者：林丽周岐新凌保东重庆医科大学药理教研室重庆400016 川北医学院药物研究所南充637007

了解本地区鲍曼不动杆菌主动外排系统的分布并探讨其在介导细菌多重耐药中的作用。方法琼脂二倍稀释法检测20种抗菌药物对鲍曼不动杆菌临床分离株的MIC;PCR扩增AdeABC-AdeRS、AdeUK两种RND主动外排系统的结构和调节基因。结果112株鲍曼... 详细信息

了解本地区鲍曼不动杆菌主动外排系统的分布并探讨其在介导细菌多重耐药中的作用。方法琼脂二倍稀释法检测20种抗菌药物对鲍曼不动杆菌临床分离株的MIC;PCR扩增AdeABC-AdeRS、AdeUK两种RND主动外排系统的结构和调节基因。结果112株鲍曼不动杆菌临床分离株对亚胺培南/西司他丁和美罗培南耐药率分别为0.9%和1.8%,对大多数抗菌药物的耐药率均大于60%,但对多黏菌素B和米诺环素均敏感。75.9%的菌株同时检出adeABC-adeRS和adeIJK主动外排基因,6.3%仅检出adeIJK。同时检出adeABC-adeRS和adeIJK的菌株耐药率较高。结论本地区鲍曼不动杆菌临床分离株多重耐药情况严重。adeABC和adeIJK在鲍曼不动杆菌临床分离株有较高检出率。AdeABC主动外排系统在鲍曼不动杆菌多重耐药性的形成中起重要作用。

关键词：鲍曼不动杆菌主动外排系统多重耐药

鲍曼不动杆菌主动外排系统和NDM-1基因分布特征及与耐药表型的关系

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上海交通大学学报（医学版） 2012年第7期32卷 866-870页

作者：李永丽应春妹上海交通大学医学院附属仁济医院检验科上海200127

目的了解鲍曼不动杆菌主动外排系统(外排泵)基因和新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)基因的分布情况,并分析其与细菌耐药表型的关系。方法采用琼脂二倍稀释法检测13种抗生素对81株鲍曼不动杆菌临床分离株的最低抑菌浓度(MICs),根据外排泵... 详细信息

目的了解鲍曼不动杆菌主动外排系统(外排泵)基因和新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)基因的分布情况,并分析其与细菌耐药表型的关系。方法采用琼脂二倍稀释法检测13种抗生素对81株鲍曼不动杆菌临床分离株的最低抑菌浓度(MICs),根据外排泵抑制剂PAβN处理前后MICs的变化判定外排泵表型。利用PCR扩增技术检测外排泵基因adeABC、adeIJK和adeFGH以及NDM-1基因blaNDM-1在临床分离株中的分布特征,根据外排泵基因的检出情况将临床分离株进行分组并比较耐药率。结果 81株鲍曼不动杆菌对临床常用的13种抗生素普遍耐药,43株(53%)外排泵表型试验阳性,对米诺环素的耐药率最低(30.9%),其次为亚胺培南,对其余抗生素的耐药率均超过60%,对头孢西丁和复方新诺明的耐药率较高,分别为97.5%和93.8%。在AdeABC外排泵基因阳性的菌株中,adeB、adeS和adeR的检出率分别为78%、78%和74%;在AdeIJK和AdeFGH外排泵基因中,adeJ、adeL、adeF、adeG和adeH的检出率均>90%;外排泵基因adeB、adeJ和adeG全部阳性的60株鲍曼不动杆菌的多重耐药最为严重,耐药基因阳性组的耐药率明显高于相对基因阴性组。32株鲍曼不动杆菌被检测出携带blaNDM-1基因。结论本地区鲍曼不动杆菌临床分离株多重耐药情况严重,存在blaNDM-1基因的克隆传播。AdeABC、AdeIJK和adeFGH外排泵基因在鲍曼不动杆菌临床分离株中的检出率较高。主动外排系统和NDM-1在鲍曼不动杆菌多重耐药性的形成中起重要作用。

关键词：鲍曼不动杆菌主动外排系统耐药表型

主动外排系统介导的鲍曼不动杆菌多重耐药机制研究

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主动外排系统介导的鲍曼不动杆菌多重耐药机制研究

作者：董涛中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

【研究背景】鲍曼不动杆菌已成为引起严重致死性院内感染重要病原菌，常表现为对多种抗菌药物耐药即多重耐药，易引起医院获得性肺炎、菌血症、泌尿系统感染、脑膜炎、软组织感染以及腹腔内感染等严重感染。特别是近年国内外报道耐碳青... 详细信息

【研究背景】鲍曼不动杆菌已成为引起严重致死性院内感染重要病原菌，常表现为对多种抗菌药物耐药即多重耐药，易引起医院获得性肺炎、菌血症、泌尿系统感染、脑膜炎、软组织感染以及腹腔内感染等严重感染。特别是近年国内外报道耐碳青霉烯类多重耐药鲍曼不动杆菌，在重症监护病房、血液病房引起爆发流行，病死率高。鲍曼不动杆菌感染治疗越来越困难，临床治疗面临着严峻的挑战。因此加强对其耐药性监测，研究其耐药分子机制，对于控制和治疗鲍曼不动杆菌引起的医院内感染具有重要的现实意义。【目的】筛选分离鲍曼不动杆菌临床菌中多重耐药菌株，测定其耐药表型及耐药模式;以氟喹诺酮类和氨基糖苷类为代表测定外排泵抑制剂对抗菌药物对鲍曼不动杆菌抗菌活性的影响;研究临床分离鲍曼不动杆菌中外排泵基因表达情况;测定鲍曼不动杆菌外膜蛋白，分析其与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系。【方法】(1)采用琼脂二倍稀释法检测24种抗菌药物对87株鲍曼不动杆菌的耐药表型;用RAPD分型方法分析多重耐药鲍曼不动杆菌的基因同源性。(2)琼脂二倍稀释法测定外排泵抑制剂(利血平和CCCP)对氟喹诺酮类和氨基糖苷类抗茵药物对鲍曼不动杆菌的抗菌活性的影响：初步探讨鲍曼不动杆菌临床分离株中外排泵的分布情况。(3)设计外排蛋白(AdeABC)基因特异性引，PCR扩增多重耐药鲍曼不动杆菌各克隆中外排蛋白基因，通过DNA测序及在GeneBank上进行序列比对分析测序结果，了解外排泵蛋白基因结构;分析外排蛋白表达阳性菌株在耐药表型方面的差异。(4)提取多重耐药鲍曼不动杆菌外膜蛋白，进行SDS-PAGE分析，研究其与多重耐药性的关系。【结果】(1)87株不动杆菌经常规生化反应和Vitek系统进一步鉴定，确定为鲍曼不动杆菌。24种抗菌药物敏感性试验结果显示，有68株细菌为多重耐药菌株，除亚胺培南、左氧沙星和加替沙星耐药率低于35％外，其余抗菌药物耐药率均65％以上。(2)RAPD结果显示，68株多重耐药鲍曼不动杆菌菌株中分6个克隆株，其中A型5株、B型8株，C型5株，D型47株，E型2株，F型1株。(3)利血平存在下68株多重耐药鲍曼不动杆菌对环丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星的敏感性分别由20.7％、44.8％、44.8％提高到26.4％、69.2％、66.7％;耐药率则分别由75.9％、32.2％、24.1％降低到71.3％、18.4％、10.3％。经stata统计软件方差分析，利血平存在与否左氧氟沙星和加替沙星对鲍曼不动杆菌敏感性有显著性差异统计学意义，但利血平对环丙沙星对鲍曼不动杆菌的敏感性影响差异无统计学意义;对妥布霉素、庆大霉素和丁胺卡那霉素的敏感率分别由27.6％、20.7％、30.0％提高为29.9％、25.3％和33.3％，经stata统计软件方差分析，利血平存在与否三种氨基糖苷类药物对鲍曼不动杆菌的敏感性均无统计学差异。CCCP存在下环雨沙星、左氧氟沙星、加替沙星三种药物对鲍曼不动杆菌的敏感率分别由20.7％、44.8％、44.8％提高到27.3％、73.3％和67.5％;耐药率则分别由75.9％、32.2％、24.1％降低到69.3％、17.1％和6.9％，经stata统计软件方差分析，CCCP存在与否左氧氟沙星和加替沙星对鲍曼不动杆菌敏感性有显著差异有统计学意义，但CCCP对环丙沙星对鲍曼不动杆菌的敏感性影响无统计学差异(P值为0.2981);对妥布霉素、庆大霉素和丁胺卡那霉素的敏感率分别由27.6％、20.7％、30.0％提高为29.9％、26.4％和33.3％，经stata统计软件方差分析，CCCP存在与否三种氧基糖苷类药物对鲍曼不动杆菌的敏感性差异均无统计学意义。CCCP存在时筛选出的外排泵阳性菌株环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星分别为13株、16株、17株;妥布霉素、庆大霉素、丁胺卡那霉素分别为8株、9株、8株。利血平存在时筛选出的外排泵阳性菌株环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星分别为10株、14株、11株;妥布霉素、庆大霉素、丁胺卡那霉素分别为6株、8株、8株。外排泵阴性菌株共217株，占39.7％。(4)6个克隆株中随机选取的多重耐药菌株外排蛋白基因测定结果显示，除B型克隆株外其余各克隆株外排蛋白基因均为PCR扩增阳性，在GeneBank上经Blast比对结果99％与AF370885.1同源。(5)对68株多重耐药鲍曼不动杆菌外膜蛋白进行SDS-PAGE检测发现，其中32株菌在约28KDa外膜蛋白条带明显减弱或缺失，其中17株菌受外排泵抑制剂影响可提高其对氟喹诺酮类或／和氨基糖苷类抗菌药物的敏感性;除b12号和b17号菌株属第4种耐药模式外，其余菌株均属第一种耐药模式，多重耐药情况严重。【结论】(1)北京地区医院中多重耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类敏感性明显下降，对其他药物尤其是第三、四代头

关键词：鲍曼不动杆菌多重耐药性外排泵抑制剂 CCCP 主动外排系统 RAPD 多重耐药基因外膜蛋白

主动外排系统在不动杆菌对碳青霉烯类耐药中的作用研究

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主动外排系统在不动杆菌对碳青霉烯类耐药中的作用研究

作者：王贺中国协和医科大学

学位级别：硕士

[目的]探索主动外排系统在不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药中的作用。 [方法]收集1999年-2006年来自全国14家医院的不动杆菌95株，用扩增性核糖体DNA限制性酶切片段分析技术(ARDRA)进行分子水平上的菌株复核鉴定，以琼脂稀释法测定美罗培... 详细信息

[目的]探索主动外排系统在不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药中的作用。 [方法]收集1999年-2006年来自全国14家医院的不动杆菌95株，用扩增性核糖体DNA限制性酶切片段分析技术(ARDRA)进行分子水平上的菌株复核鉴定，以琼脂稀释法测定美罗培南、亚胺培南、头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮／舒巴坦、哌拉西林／他唑巴坦、环丙沙星、阿米卡星、米诺环素和多粘菌素共10种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)，按不同耐药表型进行分组。采用脉冲场凝胶电泳技术筛选相同克隆株。普通PCR扩增外排泵基因(adeB、adeD和adeM基因)，实时荧光定量PCR检测外排泵基因表达水平。PCR扩增OXA型碳青霉烯酶及插入序列ISAbal，荧光定量PCR检测OXA-51-like基因表达水平。 [结果]根据ARDRA鉴定结果有68株鲍曼不动杆菌和4株基因组3型不动杆菌共72株菌入选实验研究。根据药敏MIC所示的耐药表型不同将菌株分为以下三组：对碳青霉烯类耐药组，对碳青霉烯类敏感同时对其他至少5种抗菌药物耐药组，对10种所测抗菌药物全部敏感组。PFGE克隆筛选显示包含不同耐药表型的克隆有A克隆，鲍曼不动杆菌32R和32S属于同一克隆，基因组3型不动杆菌4AS6及其3个突变子4AS6-1L、4AS6-2L和4AS6-3L亦属于同一克隆。普通PCR扩增外排泵基因adeB、adeD和adeM阳性率分别为81．94％、0％和100％。碳青霉烯类耐药株32R的两种外排泵基因adeB和adeM相对表达量分别比碳青霉烯类敏感株32S增加了2．79倍和4．04倍。基因组3型不动杆菌4AS6、4AS6-1L、4AS6-2L和4AS6-3L的adeB基因表达均低于检测下限;adeM外排基因表达量随突变子对碳青霉烯类MIC的升高而增加。A克隆菌株中全敏感组两种外排基因表达量都很低，碳青霉烯类耐药组外排泵adeB基因的表达量高于碳青霉烯类敏感组。P克隆菌株adeM基因表达水平高于其他克隆。忽略遗传背景，不同耐药表型组间adeB、adeM基因表达量比较，全敏感菌株中表达量极少，在多重耐药菌株中表达增加;碳青霉烯类耐药组和敏感组间无统计学差异。所有菌株adeD基因表达量均低于检测下限，可能该基因在不动杆菌中少有分布。共有7株鲍曼不动杆菌在OXA-51-like基因上游存在ISAbal插入序列。在碳青霉烯类药物耐药或中介菌株中，碳青霉烯酶OXA-51-like表达量要高于敏感株。OXA-51-like上游的插入序列，可能激活启动子，导致OXA-51-like酶高度表达，介导对碳青霉烯类耐药。鲍曼不动杆菌对美罗培南耐药性高于亚胺培南可能和OXA-51-like基因和外排泵基因(adeB和adeM)表达增加有关。 [结论]主动外排系统在不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药中发挥重要作用，外排泵表达增加可介导对多种抗菌药物敏感性降低。分析不动杆菌耐药机制时应将产酶、外膜蛋白缺失和外排泵表达增加综合考虑。应加强感染控制和抗菌药物的干预政策，防止泛耐药不动杆菌暴发流行。

关键词：不动杆菌主动外排系统碳青霉烯类耐药